Работа 17. Определение количества уксусной кислоты, адсорбированной животным углем

В колбочку отмерить из бюретки точно 20 мл 0,1н раст­вора СН₃СООН. Добавить 10 капель 0,5% раствора фенол­фталеина и оттитровать 0,1н раствором NaOH до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 1-2 мин. Рас­ход раствора.NaOH записать.

Во 2-ю колбочку налить точно 25 мл 0,1н раствора СН₃СООН, внести 0,5 г животного угля и встряхнуть в те­чение 3 мин. После раствор отфильтровать через бумажный фильтр. Отмерить пипеткой точно 20 мл фильтрата, приба­вить к нему 10 капель раствора фенолфталеина и оттитро­вать 0,1н раствором NaOH до появления розовой окраски. Расход раствора NaOH записать.

Задание: 1. Выполнить опыт.

2. По разности NaOH, пошедшей на титрование 20 мл СН₃СООН до и после смешивания ее с углем, установить ко­личество СН₃СООН, адсорбировавшейся на животном угле.

Вопросы для самоподготовки по теме 4

1. Адсорбция и абсорбция (понятие, сущность).

2. Адсорбтив, адсорбент, элюция (понятия).

3. Виды адсорбции.

4. Количественное определение адсорбции.

5. Биологическое и практическое значение адсорбции.

Тема 5. Химия и обмен белков

Белки - макромолекулы, состоящие из одной или нескольких полипептидных цепей. Каждая полипептидная цепь построена из большого числа аминокислотных остатков, соединенных в цепи ковалентной пептидной связью.

Линейная полипептидная цепь имеет следующую структуру:

- CO-CH-NH-CO-CH-NH-CO-CH-NH-

R₁ R₂ R₃

По химической структуре белки делятся на простые (протеины, состоят только из -аминокислот, например, коллаген, эластин и др.) и сложные (протеиды, состоят из -аминокислот и других компонентов, например, хромопротеиды, нуклеопротеиды, многие ферменты и др.). В состав белков входит до 22 аминокислот.

По биологической ценности белки бывают: полноценные (содержат полный набор незаменимых аминокислот) и не­полноценные (в них отсутствует одна или несколько незаменимых аминокислот).

По происхождению они могут быть животными, расти­тельными, микробными и искусственными (получены путем органического синтеза), в организме животных - мышеч­ными (актомиозин и др.), кровяными (гемоглобин, глобулины и др.), молочными (казеиноген и др.), печеночными (гемокупреин и др.) и т. д.

Белки обладают амфотерностью, имеют различную М. м. (от 6000 и более), им присущи все свойства гидрофильных коллоидов (оптические, кинетические, электрические).

Работа 18. Определение количества белка в гомогенате мышечной ткани, яйце рефрактометрическим методом

В норме у здоровых животных и человека в сыворотке крови содер­жится 60 — 80 г/л (6—8%) белка. Это состояние называется нормопротеинемия.

При гиперпротеинемии количество белка в сыворотке больше 80 г/л, а при гипопротеинемии - меньше 60 г/л.

Отклонения от нормы в содержании белка в сыворотке крови (гипер- и гипопротеинемия) могут быть по алиментар­ной причине (alimentum - пища), связанной с избытком или недостатком его в рационе, несбалансированностью по­следнего по аминокислотам, особенно незаменимым, а также вследствие нарушений обмена веществ или болезней (ин­фекционные, инвазионные, кровопаразитарные).

Для определения количества белка в биоматериале ис­пользуются различные рефрактометры: РЛ-2, ИРФ-22 и др.

Сущность метода заключается в нахождении показателя светопреломления растворов и пересчете его через формулу в количество белка в них.

Ход опыта

Вначале при работе с рефрактометрами производят настрой по дистиллированной воде. Для этого на нижнюю призму рабочего столика рефрактометров РЛ-2, ИРФ-22/и АМ-2 наносят 1 каплю дистиллированной воды и опускают верхнюю призму столика. Вращая винт окуляра вправо или влево у ИРФ-22 и вдвигая и выдвигая окуляр по направля­ющей у РЛ-2 и АМ-2, наводят резкость на шкалу. Затем, вращая нижний винт у АМ-2, перемещая вверх - - вниз ры­чаг справа у РЛ-2 и вращая винт слева у ИРФ-22 (рядом с зеркальцем - осветителем шкалы, которое надо открыть!), вводят в поле зрения две тени: у РЛ-2 и АМ-2 - темнова­тую вверху и светло-серую внизу; у ИРФ-22 они располага­ются наоборот. При наличии на границе между тенями раду­ги ее удаляют с помощью компенсатора. Затем, смотря в оку­ляр, у ИРФ-22 винтом слева устанавливают границу между тенями строго в поле зрения на перекрест, а у РЛ-2 и АМ-2 устанавливают соответственно рычажком справа и винтом снизу три черточки строго на границу между тенями и сни­мают показатель преломления (Д). Для дистиллированной воды при + 20°С он равен 1,3320.

Аналогичным образом поступают при определении пока­зателя преломления белка и желтка яйца, гомогената мышечной ткани.

После каждого анализа призмы столика вытирают насу­хо мягкой салфеткой.

В исследованиях (особенно научных) обязательно учитывают поправки для показателя преломления на темпера­туру, если она в рабочем столике отклоняется от + 20°С.

Расчет количества белка производят по формуле

,

где С — количество белка (г/л);

Д — показатель преломления биоматериала;

0,00172 — величина, на которую увеличивается показатель преломления при повышении содержания белка в биоматериале на 1%;

10 — коэффициент пересчета белка в г на 1 л биоматериала.

Задание: 1. Освоить методику работы по определению показателя преломления воды на предоставленных рефрактометрах.

2. Найти показатель преломления белка и желтка яйца, вытяжки из мяса.

3. Рассчитать содержание белка в исследуемом материале и в случае отклонения от нормы сделать вывод о причинах явления и мерах, которые следует предпринять, чтобы привести этот показатель в норму.