Техника посева на скошенный агар

Рисунок 50 - Техника посева на скошенный агар.

в пробирку. Петлю с исследуемым материалом опускают на поверхность пита- тельной среды у дна пробирки и скользящими движениями делаю посев штрихом снизу вверх. После пересева горлышко пробирки обжигают в пламени и пробирку закрывают пробкой (рисунок 50).

Техника посева на жидкую

среду

Петлю с находящимся на ней материалом погружают в пита- тельную среду. Если материал

вязкий и с петли не снимается, его растирают по стенки пробирки (рисунок 51).

Рисунок 51 - Техника посева микроорганиз- мов на жидкую питательную среду.

Техника пересевов культур микробов

Культуру микроорганизма, выращенную на питательной среде, с целью изу- чения культурально-биохимических свойств пересевают на другие среды. При этом в левую руку берут две пробирки: с культурой микроба, из которой произво- дится пересев и со стерильной питательной средой. Пересев делают бактериаль- ной петлей, которую держат в правой руке. Мизинцем и безымянным пальцем правой руки, извлекают одновременно две пробки из пробирок. Горлышки проби- рок обжигают в пламени горелки. Обожженную петлю охлаждают

Рисунок 52 - Техника пересевов культур микробов с оной питатель-

Ной среды на другую.

прикосновением к внутренней стенки пробирки и погружают в культуру микроба, материал на петле переносят в стерильную среду. Затем обжигают горлышки про- бирок, одновременно закрывают их пробками и ставят в штатив (рисунок 52).

Все посевы подписывают и помещают в термостат при температуре 37° С на сутки, за исключением посевов в МПЖ, который выдерживают при комнатной температуре или в термостате при 22°С в течение трех и более суток.

В жидкой средерост микроорганизмов проявляется либо равномерным по- мутнением за счет увеличения числа бактериальных клеток, в основном подвиж- ных или продуктов обмена бактерий; либо образующимся осадком (в этом случае среда остается прозрачной). Осадок может быть рыхлый, легко разбивающийся при встряхивании пробирки, или слизистый, поднимающийся в виде «косички»,

«смерчика», а также в виде сплошной массы на дне пробирки или мелких крупи- нок, располагающихся на стекле пробирки. Есть виды микроорганизмов, которые в силу особой потребности в кислороде воздуха растут на поверхности жидкой среды, образуя пленку и не вызывая помутнения бульона. Пленка может быть су- хой и слизистой, гладкой и складчатой. В ряде случаев бактериальные культуры дают одновременно помутнение среды, обильный осадок и пристеночное кольцо на поверхности.

На плотной средекультуральные свойства определяют по характеру разви- вающихся колоний. При внесении на поверхность среды большого количества бактериальных клеток наблюдают сплошной рост микробной массы. При высеве небольшого количества клеток на среду с большой поверхностью из каждой бак- териальной клетки в результате ее деления (размножения) формируется колония.

Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросших из одной клетки (клон клеток). В зависимости от того, где растет микроорганизм (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее), различают поверхност- ные, глубинные и донные колонии.

Колонии в диаметре могут быть мелкие (1-2 мм), крупные (более 4 мм) или совсем маленькие в виде мельчайших росинок. Различают колонии сухие, влаж- ные (сочные) или слизистые; гладкие, глянцевые, шероховатые с неровной по- верхностью, с ровными или неровными краями, выпуклые, плоские и с углубле- нием посередине,прозрачные и матовые, бесцветные или пигментированные.

При описании колоний учитывают следующие признаки (рисунок 53):

• форму - округлая, амебовидная, неправильная и т.д.;

• размер - очень мелкие (точечные) (0,1-0,5 мм), мелкие (0,5-3 мм), средних размеров (3-5 мм) и крупные (более 5 мм в диаметре);

-поверхность –гладкая(S-форма) –микробные клетки располагаются,со- прикасаясь своими боковыми поверхностями, шероховатая (R-форма) - микроб- ные клетки располагаются цепочками,которые, накладываясь друг на друга, обу- славливают шероховатую поверхность и неровный край колоний, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;

• профиль - плоский, выпуклый, конусовидный, кратерообразный и т.д.;

• прозрачность - тусклая, матовая, блестящая, прозрачная, мучнистая;

• цвет (пигмент) - бесцветная или пигментированная (белая, желтая, золоти- стая, красная, черная), особо отмечают выделение пигмента в среду с ее окраши- ванием;

• край - ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д.;

Рисунок 53 - Разнообразные формы колоний микроорганизмов.

• структура - однородная, мелко или крупнозернистая, струйчатая; край и структуру колонии определяют с помощью лупы или на малом увеличении микро- скопа, поместив чашку Петри с посевом на столик микроскопа крышкой вниз;

-консистенция -определяют прикасаясь к поверхности петлей,колония мо- жет быть плотной, мягкой, врастающей в агар, слизистой (тянется за петлей), хрупкой (легко ломается при соприкосновении с петлей).

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР

Чистая культура – это микроорганизмы одного вида, выросшие на пита- тельной среде. Выделение чистой культуры является важным этапом бактериоло- гического исследования. Чистая культура необходима для изучения морфологиче- ских, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по их совокупности устанавливается видовая принадлежность микроорганизма.

Микробная колония – это потомство или популяция одной микробной клетки при росте на плотных питательных средах.