Специальные питательные среды

Анаэробы –большая группа микроорганизмов,которые растут и размножа- ются при отсутствии кислорода воздуха. Анаэробный тип дыхания менее продук- тивный, чем аэробный, поэтому питательные среды для анаэробов должны быть богаче питательными субстратами и витаминами. Для удаления из сред кислорода в них помещают кусочки печени, головного мозга, почек. Тканевые клетки обла- дают редуцирующими свойствами, т.е. активно поглощают и адсорбируют на себе кислород, в результате чего в среде создаются анаэробные условия. Среды в про- бирки разливают высоким столбиком в объеме 10-12 мл. Кислород воздуха диф- фундирует обычно на расстоянии 1-2 см от поверхности, а в глубине создаются анаэробные условия.

Мясо-пептонный печеночный бульон Китта- Тароцци - жидкая среда для культивирования анаэробов (рисунок 41). Печень крупного рогатого скота нарезают мелкими кусочками, заливают водой 1:1, кипятят, фильтруют и печеночную воду добавляют к МПБ 2:1 (на 2 л МПБ 1 л печеночного отвара), кипятят, устанав-

ливают рН, разливают по пробиркам высоким столби- ком, в которые предварительно положены кусочки ва-

Рисунок 41 - Среда Китта-Тароцци.

реной печени. В пробирки поверх среды наливают 1-2 мл вазелинового масла и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 30 мин.

Сахарно-кровяной агар Цейсслера (специальная обогащенная среда для ана- эробов). Готовят 3 % МПА и добавляют 2 % глюкозы и 10-20 дефибринированной крови, подсушивают 4-6 часов в термостате и используют.

Методы создания анаэробных условий

1. Физические методы:

• основной и наиболее часто применяемый метод - выращивание культур ана- эробов в специальных приборах –анаэростатах(рисунок 42),из которых откачи- вается воздух с помощью механического насоса. В ана-

эростатах создается отрицательное давление, уровень ко- торого контролирует манометр. Чашки с посевами на по- верхности среды помещают в анаэростат вверх крышкой, герметично закрывают крышку анаэростата и откачивают воздух. Анаэростат помещают в термостат. Учет роста проводят через 1-2 дня.

• выращивание микроорганизмов в глубине пита-

тельной среды, разлитой «высоким столбиком». При таком способе культивирования среды часто подверга-

Рисунок 42 - Анаэро- стат.

ют дополнительной обработке: прогревают питательные среды на водяной бане для удаления растворенного кислорода; наслаивают на поверхность питательной среды вазелиновое масло, расплавленный парафин и другие компоненты, не про- пускающие воздух.

2. Химические методы, основанные на поглоще- нии свободного кислорода воздуха в результате хими- ческих реакций. Реактивы (гипосульфит натрия и гид- роксид калия) смешивают, слегка увлажняют водой и в открытой чашке ставят на дно специального стеклянно- го сосуда с плотно закрывающейся крышкой – эксика- тора(рисунок 43) непосредственно перед размещением

в ней чашек с посевами.

3. Биологические методы – совместное выращи-

Рисунок 42 - Эксикотор.

вание культур аэробов и анаэробов. Применяют крайне редко. В чашку Петри на- ливают сахарно-кровяной агар. После застывания агара посредине чашки в пита-

55

тельной среде вырезают канавку шириной 1-1,5 см, которая делит питательную среду на две половинки. Одну из них засевают культурой аэробов (чудесная или кишечная палочка), другую – анаэробов. Для предупреждения поступления кисло- рода извне крышку заклеивают лейкопластырем.Чашки с посевами устанавлива- ют в термостате вверх дном. Быстрорастущие аэробы, поглощая кислород, созда- ют условия для роста анаэробов.

Сахарный (глюкозный) бульон (или агар) изготавливают как обычные среды, но к ним добавляют 1-2 % глюкозы и стерилизуют текучим паром или автоклави- руют при 0,5 атм.

Сывороточный бульон и сывороточный мясо-пептонный агар готовят пу- тем асептического добавления к МПБ или расплавленному и охлажденному до 45- 50° МПА 5-10 % стерильной сыворотки крови лошади (барана, кролика), затем сывороточный бульон разливают в стерильные пробирки (колбы).

Среда Петраньяни (среда для выращивания микобактерий туберкуле- за)содержит цельное молоко, пептон, крахмал, поваренную соль, картофель, кури- ные яйца, желток,глицерин, малахитовая зелень.