- •Раздел 3. Частная вирусология
- •Тема 3.1. Микробиологическая диагностика стафило- и стрептокок-
- •Тема 3.2. Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза. 149
- •Введение
- •Требования к уровню освоения дициплины
- •Раздел 1. Общая микробиология
- •Устройство бактериологической лаборатории
- •Устройство микроскопа
- •Правила работы с микроскопом
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.2. Основные формы бактерий. Бактериологические краски. Приго-
- •Формы бактерий
- •Бактериологические краски
- •Техника приготовлениябактериологических препаратов (мазков)
- •Методы фиксации мазков:
- •Простые методы окраски бактерий
- •Сложные методы окраски
- •Окраска по Граму
- •Окраска по Циль-Нильсену
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.3. Окраска спор, капсул бактерий, методы определения подвижно- сти бактерий.
- •Метод Пешкова:
- •Метод Виртца:
- •Ные капсулы.
- •Метод Михина:
- •Метод Ольта:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.4. Изучение морфологии грибов и актиномицетов.
- •Классификация
- •Тофтора).
- •Культивирование грибов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.5. Лабораторная аппаратура. Методы стерилизации.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.6.Приготовление питательных сред.
- •Классификация питательных сред
- •По назначению:
- •Специальные питательные среды
- •Методы создания анаэробных условий
- •Дифференциально-диагностические среды
- •Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера).
- •Среды накопления (обогащения)
- •Синтетические среды
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.7.Посев и культивирование микроорганизмов. Методы выделения чистых культур микробов.
- •Техника посева на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри
- •Техника посева на скошенный агар
- •Техника посева на жидкую
- •Техника пересевов культур микробов
- •Ной среды на другую.
- •Методы механического разделения микробов
- •Методы использования биологических особенностей микроорганизмов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.8.Изучение культуральных и биохимических (ферментативных)
- •Определение протеолитических ферментов
- •Определение сахаролитических свойств микробов
- •Определение окислительно-восстановительных ферментов
- •Определение редуцирующих свойств
- •Определение гемолитических свойств
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.9.Изучение действия антибиотиков,антисептиков и бактерио-
- •Метод диффузии антибиотиков в агар с применением дисков
- •Метод серийных разведений антибиотика
- •Контрольные вопросы:
- •Способы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие трупов лабораторных животных
- •Определение токсигенности микробов
- •Определение токсичности микробов
- •Методы лабораторных исследований
- •Отбор патматериала
- •Принципы организации и оборудование бактериологических лабораторий
- •Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.11.Санитарно-бактериологическое исследование воды.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.12.Санитарно-бактериологическое исследование воздуха и почвы.
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.13.Изучение микрофлоры кормов. Коллоквиум №1 «Общая микро-
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 2. Инфекция и иммунитет Тема 2.1.Серологические реакции. Реакция агглютинации (ра).
- •Метод ра.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.2.Реакция преципитации (рп).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.3.Реакция связывания комплемента (рск).
- •Компоненты реакции:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.4.Реакция нейтрализации (рн), метод флуоресцирующих антител
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.5.Биопрепараты. Коллоквиум № 2 «Серологические реакции в мик- робиологии».
- •Лиофилизация микроорганизмов
- •Правила использования и хранения биопрепаратов, их транспортировка
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 3. Частнаямикробиология Тема 3.1.Микробиологическая диагностика стафило- и стрептококкозов
- •Стафилококки.
- •Специфическая терапия и профилактика.
- •Стрептококкоза молодняка.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.2.Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза Цель занятия: ознакомить студентов с возбудителями рожи свиней и листе-
- •Содержание:
- •Слева: гладкие s-формы (колонии возбудителя на пита- тельной среде и мазок под микроскопом); Справа: шероховатые r-формы (колонии возбудителя на питательной среде и мазок под микроскопом).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.3.Микробиологическая диагностика сибирской язвы.
- •Ная» дорожка.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.4.Микробиологическая диагностика клостридиозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.5. Микробиологическая диагностика некробактериоза и копытной гнили овец.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.6. Коллоквиум № 3 «Грамположительные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.7. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.8. Микробиологическая диагностика паратуберкулеза.
- •Тема 3.9. Микробиологическая диагностика эшерихиозов и сальмонелле-
- •Мпа; 2. Среда Эндо; 3. Среда Левина; 4. Среда Плоскирева.
- •Специфическая профилактика.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.10. Микробиологическая диагностика бруцеллеза и туляремии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.11.Микробиологическая диагностика пастереллеза и гемофилезов свиней.
- •Специфическая терапия.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.12. Микробиологическая диагностика сапа лошадей и мелиоидоза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.13. Коллоквиум № 4 «Грамотрицательные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.14. Микробиологическая диагностика лептоспироза и кампило-
- •Вакцины импортные для собак:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.15. Патогенные микоплазмы.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.16. Хламидии, риккетсии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.17. Лабораторная диагностика микозов.
- •Лабораторная диагностика, специфическая терапия и профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.18. Лабораторная диагностика микотоксикозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Форма промежуточного контроля знаний студентов
- •Список рекомендованной литературы
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания
- •Перечень ресурсов информационно-телекоммуникационной сети «Интернет»
Контрольные вопросы:
Чем отличается стерилизация от дезинфекции.
Как осуществляют стерилизацию текучим паром.
Что такое тиндализация. Для каких сред ее применяют.
Объяснить метод пастеризации.
В чем сущность дробного метода стерилизации.
Тема 1.6.Приготовление питательных сред.
Цель занятия: изучить требования к питательным средам классификацию пи- тательных сред, ознакомиться с составом, назначением простых, специальных, элективных и дифференциально-диагностических сред. Ознакомиться с приготов- лением питательных сред.
Содержание:
Требования, предъявляемые к питательным средам.
Состав питательных сред.
Классификация питательных сред.
Для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях применяют различные искусственные питательные среды. На них микроорганизмы выделяют, изучают, накапливают и хранят.
Питательные среды по своей сущности являются искусственной средой оби- тания микробов и поэтому должны соответствовать следующим требованиям:
содержать основные питательные вещества, из которых строится мик- робная клетка:макроэлементы (азот,углерод,водород,кислород,фосфор,железо, калий, кальций, сера, магний), микроэлементы (кобальт, йод, марганец, молибден, цинк, медь и др.), витамины. Все элементы должны находится в легкоусвояемой для конкретного микроорганизма форме. В питательные среды добавляют амино- кислоты, органические кислоты, витамины, сахара, многоатомные спирты, белки, соли различных кислот и воду;
иметь достаточную влажность (не менее 20 % воды), т.к. поступление веществ в микробную клетку осуществляется при помощи диффузии и осмоса;
быть изотоничными, т.е. иметь концентрацию солей соответствующую концентрации солей в микробной клетке (для большинства микроорганизмов 0,5
%, для галлофилов – 3 %);
быть нетоксичными для исследуемых микробов;
обладать оптимальной для выращиваемого микроорганизма концентра- цией водородных ионов (рН). Питательные вещества могут усваиваться микроба- ми только при определенной реакции питательной среды, т.к. от этого показателя зависит проницаемость оболочки микробной клетки. Для большинства микроор- ганизмов оптимум роста наблюдается при рН 7,2-7,4;
быть по возможности прозрачными, т.к. это облегчает изучение в них роста микробов;
быть стерильными, чтобы была возможность размножать в них культуру только одного вида микроба.
Классификация питательных сред
Потребность в питательных веществах у различных микробов неодинакова, поэтому нет возможности создать для них универсальную питательную среду. На основании разных показателей питательные среды классифицируют следующим образом.
По консистенции: жидкие, плотные, полужидкие;
По происхождению - животного, растительного происхождения и синте- тические среды постоянного состава;
По назначению:
-обычные(простые)-для выращивания большинства микроорганизмов;
специальные - для культивирования микробов, не растущих или плохо рас- тущих на обычных питательных средах;
дифференциально-диагностические - употребляемые для определения родо- вых или видовых особенностей исследуемых бактериальных культур (гемолити- ческих, сахаролитических, протеолитических, редуцирующих и других свойств);
элективные - для выделения микробов одного рода или вида из материала, содержащего смесь разных видов микроорганизмов, на которых одни виды хоро- шо растут, а другие не растут;
среды обогащения (накопительные).
Основой многих питательных сред животного происхождения является мясная вода. Ее готовят из свежего нежирного говяжьего мяса, освобожденного от костей, фасций, сухожилий. Измельченное мясо (мелкие кусочки или фарш) за- ливают дистиллированной водой в соотношении 1:2 (на 1 кг мяса 2 л воды). Экс- трагируют 12-24 ч, кипятят 1,5-2 ч, фильтруют, добавляют дистиллированной воды до первоначального объема, разливают в бутыли, колбы, закрывают ватно- марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве.
Простые питательные среды Мясо-пептонный бульон (МПБ) - жидкая питательная
среда (рисунок 38). Для его приготовления к 1 л мясной во- ды добавляют 1 % пептона, 0,5 % химически чистой пова- ренной соли и кипятят. Мясная вода слабокислой реакции, поэтому МПБ подщелачивают – добавляют небольшое ко- личество 10-15 % раствора КОН или NaOH, кипятят 2-3
мин. МПБ фильтруют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, автоклавируют.
Рисунок 38 - МПБ.
Мясопептонный агар (МПА) - плотная пи- тательная среда (рисунок 39). К МПБ добавляют 2 % агар-агара (органическое вещество, полученное из морских водорослей)и кипятят до его расплавления, в горячем виде устанавливают рН, кипятят 5-10 мин,
фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки или колбочки, авто-
Рисунок 39 - МПА.
клавируют. После стерилизации горячие пробирки с агаром раскладывают на- клонно под углом 5-6°. При застывании образуется скошенная плотная поверх- ность.
Мясо-пептонный полужидкий агар готовят так же, как и МПА но агар-агара добавляют меньше – 0,2 %.
Мясо-пептонный желатин (МПЖ). К МПБ добавляют 10-20 % желатина (продукт, получаемый из клейдающих тканей животных), расплавляют и в горя- чем виде устанавливают нужную реакцию среды, пропускают через ватно- марлевый фильтр, разливают в пробирки, стерилизуют текучим паром дробно. На рисунке 40 представлены различные формы разжижения желатина.
Рисунок 40 - Формы расщепления желатина.
Молоко – натуральная естественная питательная среда. Цельное молоко обезжиривают центрифугированием, разводят водой 1:1, устанавливают рН 7,0-7,3 с помощью питьевой силы. Молоко стерилизуют дробно текучим паром 3 дня в автоклаве при 110 °С 20 мин. При изучении редуцирующих свойств микробов пе-
ред стерилизацией добавляют 2 % раствор метиленового синего из расчета 2 мл краски на 100 мл среды.