13. Возбудители коклюша и паракоклюша, их характеристика, клинические проявления дифтерии, методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Возбудители коклюша относятся к :отделу Gracilicutes порядку Burkholderiales

семейству Alcaligenaceae роду Bordetella. вид B. pertussis

Морфология: Бордетеллы грам-. Возбудитель коклюша имеет форму короткой овоидной палочки (коккобактерии). Бордетеллы распол чаще поодиночке. Спор не образуют, образуют капсулу. Неподвижные. При окраске наблюдается биполярность (концы окрашиваются более интенсивно вследствие неравномерного распределения липидов в кл). При окраске по Романовскому-Гимзе видна капсула. Облигатные анаэробы. Оптимум температуры 35-37°C. Плохо окрашиваются по Граму, предпочтительно испол толуидиновый синий, выявляющий биполярные метахроматические гранулы (клеточные липоиды).

Строгий аэроб, оптимальная температура для роста 37оС. Требователен к пит средам, хорошо растет на среде Борде-Жангу (картофельно-глицериновом агаре с добавлением сыворотки крови) или на казеиново-угольном агаре (КУА) с добавлением антибиотиков для подавления сопутствующей микрофлоры; введение угля необходимо для подавления ингибиторов роста. Культивируют при температуре 35-36.

На КУА(казеиново-угольный агар) B. pertussis на 3-4 день образует гладкие выпуклые колонии диаметром около 1 мм, блестящие, серовато-кремового цвета и вязкой консистенции, напоминающие капельки ртути или жемчужины. Колонии паракоклюшных бактерий на КУА образуются на 2-3 день, а колонии B. bronchiseptica выявляются уже на 1-2 день культивирования. На среде Борде-Жангу на 3-4 день коклюшные палочки формируют мелкие (диаметром около 1 мм), гладкие, блестящие, куполообразные колонии, напоминающие капельки ртути и имеющие жемчужный или металлический блеск На кровяном агаре вокруг колоний возбудителей коклюша и паракоклюша образуется не четко выраженная зона гемолиза

Ферментативная активность у палочек коклюша выражена очень слабо: не вызывает изменения цвета пит.среды с тирозином, не расщепляет мочевину, не утилизирует цитрат, оксидаза.

Во внешней среде палочки коклюша неустойчивы. Прямой солнечный свет убивает их через 1-2 часа, УФ-лучи - через несколько минут. При 56оС они погибают через 20-30 минут. Чувствительны к дезинфицирующим веществам и холоду.

Антигены. Антигенная структура бордетелл сложна. имеет 16 агглютиногенов, кот явл поверхност термолабильными капсульными К-антигенами (факторами). Фактор 7 явл общим для всех видов, фактор 1 – специфичен для Bordetella pertussis. Выявлены антигены, общие для всех бордетелл, антигены, специфичные только для Bordetella pertussis и антигены, по кот опред серовары внутри этого вида.

-ТОКСИНЫ: коклюшный токсин (КТ), кот повышает проницаемость сосудов, индуцирует в организме сенсибилизацию к гистамину. На этот токсин вырабатывается специфичный защитный антитоксический иммунитет.

- трахеальный цитотоксин повреждает эпителиоциты

-дерматонекротический термолабильный токсин вызывает воспаление и некроз эпителия дыхат путей, обуславливает спазм периферических кровеносных сосудов.

-термостабильный эндотоксин – ЛПС клет стенки, обладает пирогенным эффектом. Индуцирует выработку цитокинов.

Резервуаром и источником коклюшной инфекции является больной человек.

Коклюш передается с помощью аэрозольного механизма преимущественно воздушно-капельным путем. Обильное выделение возбудителя происходит при кашле и чихании. Поскольку во внешней среде возбудитель не сохраняется длительно, контактный путь передачи не реализуется.

Коклюшная палочка попадает на слиз оболочку верхних дыхательных путей и заселяет реснитчатый эпителий, покрывающий гортань и бронхи. В глубокие ткани бактерии не проникают и по организму не распространяются. Бактериальные токсины провоцируют местную воспалительную реакцию.

После гибели бактерий высвобождается эндотоксин, кот и вызывает характерный для коклюша спазматический кашель. С прогрессированием кашель приобретает центральный генез – формируется очаг возбуждения в дыхательном центре продолговатого мозга. Возбуждение нервного центра может способствовать инициации аналогичных процессов в соседних областях продолговатого мозга, вызывая рефлекторную рвоту, сосудистую дистонию (повышение АД, сосудистый спазм) после кашлевого приступа. У детей могут отмечаться судороги (тонические или клонические).

Возбудитель коклюша - Bordetella pertussis; паракоклюша - Bordetella parapertussis. Материал для диагностики Мокрота, слизь из носоглотки. «Метод кашлевых пластинок» – подносят чашку с пит агаром ко рту кашляющего ребенка, держат в течение 6-8 кашлевых толчков.

Бактериолог метод диагностики 1 день Материал засевают на КУА (кровяно – угольный агар), среду Борде –Жангу (картофельно- глицериновый кровяной агар). В агар добавляют пенициллин для угнетения посторонней флоры. Инкубируют 48-72 часа при 37С. 3-4 день Изучение морфологии выросших колоний. Рост мелких выпуклых влажных блестящих колоний. На КУА – серовато- кремового цвета, на среде Борде-Жангу – жемчужный или ртутный блеск.

Бактериоскопия. В мазках по Грамму видны овоидные грам- палочки. Иммунологическая реакция. С подозрительными колониями ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с коклюшной и паракоклюшной сыворотками.

При «+» результате ставят р-цию агглютинации с сыворотками к ф-рам 1, 7, 14, 12. Учет: Bordetella pertussis: «+» р-ция с антисыворотками к ф-рам 1, 7; Bordetella parapertussis: к факторам 7, 14; Bordetella bronchiseptica: к факторам 7,12.

Изучение биохимических свойств. Определяют уреазную активность.

5 день B. pertussis и В. parapertussis: уреаза # ПЦР – диагностика, ИФА. Материал для исследования – мокрота, слизь из носоглотки, подозрительные колонии с КУА. Обнаруживают ДНК возбудителя. Серологический метод. ИФА, РСК. Рертоспективный диагноз. Агглютинины появляются на 3-4 неделе заб в титрах 1:20 и выше. В условиях массовой вакцинации имеет значение нарастание титра антител в динамике заболевания через 4-5 дней.

Посев на плот пит среды с а/б. Для идентификации возбудителя – р-ция агглютинации на стекле с К-сыворотками. Для ускоренной диаг­нос. применяют прямую РИФ со специфической флуоресцентной сывороткой и материалом из зева. Серологический метод – обнаружение IgG и IgA против феламентозного гемаггютинина и против токсина В.pertussis.

Колонии паракоклюшного микроба схожи с коклюшными, но крупнее (до 2–4 мм), вокруг них может обнаруживаться потемнение среды, а на КУА – появляться кремовый и даже желто-коричневый оттенок, время формирования 24–48 ч. При изучении колоний бордетелл с помощью стереомикроскопа при боковом освещении виден так называемый хвост кометы, представляющий собой конусообразную тень колонии на поверх среды, однако этот феномен наблюдается не всегда. B.pertussis в отличие от др представителей рода биохимически инертны и не разлагают мочевину, тирозин, углеводы, не утилизируют цитраты.

Лечение. При тяжелых формах коклюша испол этиотропную антибиотикотерапию (эритромицин и т.д.), норм человеч Ig и Ig чела коклюшный антитоксический, получен. из сыворотки доноров, вакцинированных коклюшным анатоксином.

Профилактика. Для специфической профилактики коклюша применяют АКДС-вакцину, кот вводят детям, начиная с 3-месячного возраста. Коклюшный компонент АКДС состоит из коклюшных микробов 1-й фазы, инактивированных мертиолятом и формалином. Наряду с этим применяют бесклет вакцины, содержащие коклюшный анатоксин, ФГА, пертактин, а также 2-ой и 3-ий агглютиногены фимбрий. При контакте с больным детям в возрасте до 1 года и не вакцинированным в целях экстренной профилактики заболевания вводят гипериммунный коклюшный антитоксический Ig или Ig человека нормальный.