12. Возбудитель дифтерии, его характеристика, клинические проявления дифтерии, методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Классификация. Возбудит дифтерии относится к отделу Firmicutes, семейству Corynebacteriaceae, роду Corynebacterium, виду C. diphtheriae. Название микроба происходит от греч. coryne - булава, bacteria - палочка, diphtheria - пленка.

Морфология. С. diphtheriae (палочка Клебса-Лёффлера) - прямые или слегка изогнутые неподвижные грам+ палочки. Спор и капсул не образуют. Палочки утолщены на концах и напоминают булаву. В мазках бактерии располагаются под углом друг к другу, в виде “растопыренных пальцев”, “иероглифов”, “паркета”, латинских букв V, Y, L и др. На поверхности бактерий имеются фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки.

Культуральные свойства. Дифтерийная палочка явл аэробом или факультативным анаэробом, температурный оптимум для роста 35-37°С, оптимальная рН 7,6-7,8. Лучше растет на средах, содержащих кровь или сыворотку крови животных, хорошо растет на средах с теллуритом калия. В бульоне наблюдается равномерное помутнение или нежная пленка.

Элективные среды для выращивания C. diphtheriae: -свернутая кровяная сыворотка (среда Ру);

-сыворотка с добавлением сахарного бульона (среда Ру-Лёффлера);

-кровяной агар (КА);

-кровяной теллуритовый агар (среда Клауберга II);

-хинозольная среда Бучина;

-цистин-теллурит-сывороточная среда Тинсдаля-Садыковой.

Токсинообразование. Corynebacterium diphtheriae продуцирует мощный экзотоксин — основной фактор патогенности. Нетоксигенные штаммы дифтерии не вызывают развитие заболевания.

Основные фракции дифтерийного токсина 4 фракции: 1Гистотоксин 2 «Истинный токсин»

3 Гиалуронидаза 4 Гемолизин

Антиген св-ва. О-антигены – термостабил полисахаридные, распол в глубине клет стенки. К-антигены – поверхностные, термолабильные, серовароспецифические. С помощью сывороток к К-антигену С.diph. разделяют на серовары.

Факторы патогенности. Экзотоксин, нарушающий синтез белка и поражающий в связи с этим кл миокарда, надпочечников, почек, нерв ганглиев. Ферменты агрессии — гиалуронидазу, нейраминидазу. К факторам патогенности относится также микрокапсула.

Методы выявления токсигенности Для обнаружения токсигенности дифтерийных бактерий можно испол след способы: 1. Биологические пробы на животных. Внутрикожное заражение морских свинок фильтратом бульонной культуры дифтерийных бактерий вызывает у них некроз в месте введения.

2. Заражение куриных эмбрионов. Дифтерийный токсин вызывает их гибель.

3. Заражение культур клеток. Дифтерийный токсин вызывает отчетливый цитопатический эффект.

4. Метод твердофазного иммуноферментного анализа с использованием меченных пероксидазой антитоксинов.

5. Использование ДНК-зонда для непосредственного обнаружения Юх-оперона в хромосоме дифтерийных бактерий.

6. Обнаружение гена токсигенности (tox) методом ПЦР – наиб быстрый и надежный метод лаб диагн, однако он не дает информацию о способности микроорганизма к экспрессии дифтерийного токсина.

Однако наиб простым и распростр способом опред токсигенности дифтерийных бактерий явл серологический – метод преципитации в геле. Суть: Полоску стерильной фильтровальной бумаги размером 1,5 х 8 см смачивают антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 500 АЕ в 1 мл, и наносят на поверхность пит. среды в чашке Петри. Чашку подсушивают в термостате 15—20 мин.

Испытуемые культуры засевают бляшками по обе стороны от бумажки. На 1 чашку засевают несколько штаммов, 1 из кот, заведомо токсигенный, служит контролем. Чашки с посевами инкубируют при 37 °С, результаты учитывают через 24—48 ч. Вследствие встречной диффузии в геле антитоксина и токсина в месте их взаимодействия образуется четкая линия преципитации, кот сливается с линией преципитации контрольного токсигенного штамма. Полоски неспецифической преципитации (они образуются, если в сыворотке кроме антитоксина присутст в небольшом кол-ве др антимикробные антитела) появл поздно, выражены слабо и никогда не сливаются с полоской преципитации контрольного штамма.

Район Рамон установил, что при воздействии формалина и тепла на дифтерийный токсин образуется обезвреженное соед, обладающее антигенными и иммуногенными св-вами. Изучая р-цию флоккуляции дифтерийного токсина с антитоксином, он применял формалин как антисептик для сохр токсина. Добавл формалина к токсину не препятствовало появл феномена флоккуляции, даже если этот токсин подвергался действию умеренного тепла в термостате. Не влияя на способность токсина флоккулировать, формалин резко снижал его токсические св-ва, как и ряд др хим и физ св-в. Р-ция флоккуляции токсинов с антитоксинами сыграла большую роль в разработке метода приготовления анатоксинов.

Источник инфекции Заболевший любой формой дифтерии и носитель токсигенных C. diphtheriae.

Механизм заражения Воздушно-капельный (при чихании, кашле, в разговоре), контактно-бытовой (через загрязнённые коринебактериями поверхности).

Клинические прояления Признаки дифтерии у детей и взрослых в 1ые дни болезни неспецифичны и напоминают ангину, поэтому при их появлении необходимо вызвать врача на дом. Обращают внимание на такие признаки: · плотная светлая пленка на миндалинах, плохо снимающаяся шпателем;

· поражение двустороннее, но размеры его неодинаковы справа и слева;

· незначительное покраснение и боль в горле;

· температура снижается уже через 2 – 3 дня, тогда как налеты в горле сохраняются намного дольше;

· возможен отек шеи;

· после использования противодифтерийной сыворотки все симптомы быстро ослабевают.

При любом воспалении миндалин необходим мазок на дифтерию из зева и носовой полости.

Для получения быстрого результата проводят анализ на дифтерию методом ПЦР, используют и бактериологическое исследование полученного материала. Также диагностика дифтерии включает определение антител к токсину бактерии.

Иссл материал: дифтеритические пленки, мокрота, кровь, мазки из зева, носоглотки, отделяемое пораженных кожных покровов и др. Воздудитель выделяется у реконвалесцентов в теч 15-20 дней

1). Бактериоскопический метод – окраска по Граму, Леффлеру, Нейссеру (зерна Бабеша-Эрнста)

2) Бактериолог метод – посев кл пац на среду Клауберга с теллуритом, постановка пробы Пизу (образется коричневое облачко), чистую культуру идентифицируют на «пестром ряду» сред Гисса

3) Биологические пробы на морских свинках – подкожное введение возбудителя свинкам с предшествующей иммунизацией опытной группы. Заражение куриных эмбрионов и культур клеток

4) Серология – твердофазная ИФА с меченными антитоксинами, тест иммунодиффузии Илека (полоска с антитоксином на среду с культурой C. diphtheriae). Фаготипирование, ПЦР на обнаружение tox-гена; Реакция непрямой гемагглютинации с антигенным эритроцитарным диагностикумом.

Культуральные и биохимические свойства. каталазоположителен. C. diphtheriae требовательны к условиям культивирования, растут на пит средах с добавлением гемолизированной крови, лошадиной или бычьей сыворотки, обогащенных аминокислотами, пуриновыми и пиримидиновыми основаниями. Для культивирования дифтерийных бактерий испол дифференциально-диагност и элективные кровяные телуритовые среды Клауберга II или среду Тинсдаля (сывороточный агар с телуритом калия и цистином), а также элективную среду Ру (свернутая лошадиная сыворотка) и др среды. По культурально-биохимическим св-вам вид C. diphtheriae не однороден. Выделяют 4 биовара: gravis, mitis, intermedius и belfanti, но 2 последних биовара не идентифицируют. Для дифференциации биоваров испол тест на крахмал. По этому показателю все C. diphtheriae, ферментирующие крахмал, относятся к биовару gravis, а не ферментирующие крахмал - к биовару mitis. Биовар gravis (грубый) на плотных пит средах образует крупные колонии серого цвета в R-форме, напоминающие цветок маргаритку. На жидких пит средах коринебактерии дифтерии биовара gravis растут, образуя пленку на поверхности или крошкообразный осадок. Для биовара mitis (тонкий) характерна S-форма мелких колоний черного цвета, с ровными краями, выпуклой гладкой поверхностью, окруженных зоной гемолиза. На жидких пит средах коринобактерии дифтерии бактерии биовара mitis вызывают равномерное помутнение и мелкозернистый осадок. Возбудитель дифтерии резистентен к высоким концентрациям теллурита калия, ингибирующим рост сопутствующей микрофлоры. Теллурит калия благодаря восстановлению металлического теллура и его соединению с образующимся H,S придает дифтерийным колониям черный цвет. - Для дифференциации с др коринебактериями испол тесты на цистиназу и уреазу. Важнейшим дифференциальным биохимическим признаком C. diphtheriae явл наличие фермента цистиназы, кот выявляют на среде Пизу (сывороточный агар, содержащий цистин и уксуснокислый свинец). «+» цистиназная активность проявляется потемнением среды в виде «облачка» по ходу укола. C. diphtheriae обладают отрицательной уреазной активностью

Препараты для профил и лечения дифтерии 1)Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая (АКДС-вакцина). Содержит взвесь инактивированных возбудителей коклюша, дифтерийный анатоксин и столбнячный анатоксин. Адсорбент - гидроксид алюминия.

2)Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбированный (АДС-анатоксин). Содержит дифтерийный, и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроксиде алюминия.

3)Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбированный с уменьшенным содерж антигенов жидкий (АДС-М анатоксин). Содержит смесь очищ дифтерий и столбняч анатоксинов, адсорбированных на гидрате оксида алюминия.

4)Анатоксин дифтерийный очищенный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигена жидкий (АД-М анатоксин). Представляет собой очищенный дифтерийный анатоксин, сорбированный на алюминия гидроксиде.

5)Сыворотка противодифтерийная лошадиная очищенная концентрированная жидкая. Содержит антитела (антитоксины), способные нейтрализовать действие токсина возбудителя дифтерии. Для получения этого препарата проводят гипериммунизацию лошадей дифтерийным анатоксином, затем их сыворотку очищают от балластных белков и концентрируют.