13. Биологический метод контроля стерилизации.

Биологич метод предназначен для контроля эффективности работы стерилизаторов на основании гибели спор тест-культур. Осущ его с помощью биотестов. Биотест – дозированное кол-во тест-культуры на носителе, н, на диске из фильтр бумаги, или помещенное в упаковку (стеклянные флаконы для лс или чашечки из фольги). В кач-ве тест-культуры для контроля работы парового стерилизатора испол споры Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718, а воздушного стерилизатора – споры Bacillus licheniformis. После стерилизации тесты помещают на пит среду. Отсут роста на пит среде свидетельствует о гибели спор во время стерилизации.

Биологич контроль. Этот вид контроля проводят 2 р в год. Для этого испол биотесты, предназнач для конкретного вида паровой или суховоздушной стерилизации.

Пронумерованные пакеты с биотестами размещают в контрол точках стерилизатора. После проведенной стерилизации в пробирки с биотестами вносят 0,5 мл цветной пит среды, начиная со стерильной пробирки для контроля пит среды и заканчивая контрольным тестом, не подвергавшимся стерилизации (контроль культур). Далее пробирки инкубируют. После чего проводят учет изменения цвета пит среды. В контроле (стерильная проба) цвет среды не изменяется. В пробирке с контролем культуры цвет среды должен измениться на цвет указанный в паспорте, что свидетельствует о наличии жизнеспособных спор. Работа считается удовлетворительной, если цвет пит среды во всех биотестах не изменился. Результаты регистрируют в журнале. При необход контроля за стерильностью мед изделий, подвергнутых стерилизации, лаборант бактериологич лаборатории или операцион сестра под руководством сотрудников баклаборатории осущ забор проб на стерильность.

14. Дать характеристику колоний, выросших на чашке с мпа, и указать ход дальнейших действий для выделения чистой культуры.

Для изучения культуральных св-в бак необходимо выбрать на чашках Петри 3 хорошо обособленные колонии, причем наиб типичные, т е преобладающие в посеве. Затем, не открывая чашек, приступить к описанию внеш св-в колоний, обратив внимание на след признаки:

а) форма (круглая, корневидная, неправильной формы, амебовидная, ризоидная и т. д.);

б) окраска (бесцветная, грязно-белые колонии относятся к бесцветным, или пигментированная ‑ белая, желтая, золотистая, красная, черная); в) поверхн колоний (гладкая, шероховатая, бороздчатая, складчатая, морщинистая, концентрически или радиально-исчерченная и т. д.);

г) профиль колонии (плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный и т. д.);

д) блеск и прозрачность (колония блестящая, матовая, тусклая, мучнистая, прозрачная);

е) размер колонии (диаметр) измеряют с помощью обычной линейки и указывают ее величину в мм. Точечными называют колонии менее 1 мм в диаметре; мелкие имеют 1-2 мм, средние ‑ 2-4 мм и крупные ‑ более 4 мм в диаметре; ж) край колонии (ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый) опред при малом увелич микроскопа или с помощью лупы. Чашку помещают на предметный столик микроскопа; з) структура колонии (однородная, мелкозернистая, крупнозернистая, струйчатая) опред при малом увелич микроскопа или с помощью лупы; и) консистенцию колонии опред, прикасаясь к ее поверхности бактериологич петлей. Колония может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар; слизистой (прилипает к петле), тягучей, хрупкой (легко ломается при прикосновении петлей). колонии, отличающиеся хотя бы по 1му из указанных признаков, следует рассматривать как разные типы. Каждому виду бак свойственен опред характер колоний, по числу типов колоний в чашках можно иметь представление о разнообразии видового состава бак исслед объекта. Для выделен чистой колонии необход отобрать изолированную колонию, промикроскопировать ее (окраска по Граму) для проверки однородности микробов в колонии. Пересев изолированной колонии на скошенный агар для получения чистой культуры. Посевы помещают в термостат на сутки. Выделение чистой культуры бактерий-аэробов из материала, содержащего смесь микробов, занимает, как правило, 3 дня и производится по следующей схеме:

1 день – микроскопия мазка из исслед материала, окрашенного по Грамму, для предварительного ознакомления с микрофлорой данной смеси. Посев материала петлей на чашку Петри с пит средой штриховым методом для получ изолирован колоний. Засеянные чашки помещают в термостат на сут.

2 день – изучение колоний, выросших на чашках, отбор изолирован колоний, описание их и микроскопии мазков из изолированных колоний (окраска по Граму) для проверки однородности микробов в колонии. Пересев изолированной колонии на скошенный агар для получения чистой культуры. Посевы помещают в термостат на сутки.

3 д – проверка чистой культуры, выросшей на скошенном агаре, путём микроскопии мазков, окрашен по Граму. При однородности исслед бак выделение чистой культуры можно считать законченным.

15. По посевам на средах Гисса определить биохимическую активность засеянной культуры бактерий.

К дифференциально – диаг средам относятся среды Гисса, на кот изучается сахаролитич активность микрооганизмов. Среды Гисса могут быть жид и плот. Основу сред Гисса составл мясо – пептонный бульон (МПБ) и мясо – пептонный агар (МПА). В состав этих сред входит углевод и индикатор. Сущ 2 ряда сред Гисса – большой (вкл 27 наимен) и малый. Малый ряд сред Гисса вкл мальтозу, глюкозу, сахарозу, манит и лактозу. Исходная установка рН среды – слабо щелочная (7,2 – 7,4).

Если при культивировании микробов происходит расщепление субстрата до кислоты, то рН среды изменяется в кислую сторону и при этом происходит изменение цвета индикатора. Изменение цвета пит среды и явл показателем наличия у данного микроба фермента, расщепляющего конкретный субстрат до к-ты. И в жид, и в плот пит среде о наличии фермента, расщепляющего субстрат до кислоты, судят по изменению цвета индикатора. Образование газа уст по скоплению пузырьков газа в толще агара и по разрыву агара (если среды Гиса плотные) или по скоплению пузырьков газа в поплавке (если среды жидкие). Поплавок – узкая стеклянная трубочка с запаянным концом, обращенным вверх, которую помещают в пробирку со средой перед стерилизацией среды.