30. Опишите методику постановки развернутой реакции агглютинации и оцените результат

Развернутая реакция агглютинации –проводится в пробирках. Вначале готовят 2-хкратные разведения сыворотки крови больного чела от 1:50 до 1:1600. В 6 пробирок наливают по 1 мл изотонич р-ра хлорида натрия. В 1ую пробирку вносят 1 мл сыворотки крови больного в разведении 1:50, перемешивают и получают разведение 1:100, затем 1 мл разведения 1:100 переносят во 2ую пробирку и получают разведение 1:200 и т.д. 2 пробирки оставляют для контроля антигена и сыворотки. В контроль сыворотки добавляют только сыворотку в разведении 1:50, в контроль антигена – только антиген. Во все остальные пробирки добавляют 0,1 мл антигена - диагностикума (О- или Н-) и ставят все пробирки в термостат при 37°С на 18-20 ч. Учет результатов р-ции проводят по характеру, кол-ву образовавшегося осадка (агглютината) и степени мутности. Учет проводят только при след результатах в контролях: контроль сыворотки – прозрачный, контроль антигена – мутный. О-антитела дают мелкозернистый осадок. Н-антитела – крупнозернистый. По последней пробирке, в которой еще видна реакция агглютинации, устанавливают диагностический титр.

При серодиагностике заб важно не просто обнаружить специфич антитела к опред возбуд, но и выявить их кол-во, т.е. уст такой титр антител, когда можно говорить о наличии заб, вызванного этим возбуд. Этот титр и называется диагностическим титром. Н, для диагностики брюшного тифа нужно выявить титр антител – 1:400, но не меньше. Еще более точные результаты дает выявление нарастания антител в парных сыворотках. Сыворотку больного отбирают в начале заб и через 3 – 5 или более дней. Если титр антител возрастает не менее, чем в 4 раза, след, можно говорить о текущем заболевании. Если развернутая р-ция агглютинации ставится для сероидентификации, то используют агглютинирующие диагностич сыворотки, разведенные до титра или до половины их титра. РА считается полож, если агглютинация обнаруживается в разведении, близком к титру диагностич сыворотки.

31. Опишите методику постановки и оцените результат рск

Р-ция связывания комплемента- эта р-ция относится к сложным серологич р-циям: в ней участвуют комплемент и 2 сис-мы антиген-антитело. 1ая сис-ма-явл специфич. 2ая сис-ма готовится из эритроцитов барана и соответств им гемолитич сыворотки. Она называется гемолитич и явл индикатором образования комплекса антиген - антитело (1ой сиС-мы) с комплементом. В присутствии комплемента в гемолитич сис-ме происходит лизис эритроцитов. Если комплемент связан специфич сис-мой, гемолиз не происходит. РСК благодаря высокой чувствит и специфичности нашла широкое применение при серодиагностике ряда инфекц болезней и идентификации антигенов. Особенно широко РСК применяется при диагностике сифилиса (р-ция Вассермана) и др спирохетозов, риккетсиозов, вирусных инф. Р-ция связывания комплемента протекает в 2 фазы. В 1ой (специфич) взаимодействуют антиген, антитело и комплемент. Если антиген соответст антителу, они соед и образуют комплекс, кот связывает комплемент. Образовавшееся соединение внешне не проявл. Об его образовании узнают с помощью индикатора, кот явл гемолитич сис-ма, участвующая во 2ой (индикаторной) фазе Р-ции. Гемолитич сис-ма состоит из эритроцитов барана и соответств гемолитич сыворотки. Гемолитич сыворотка, реагируя с эритроцитами, делает их чувствит (сенсибилизирует) к д-вию комплемента, в присутствии кот эритроциты разрушаются (лизируются). Если лизиса нет, значит комплемент связан 1ой сис-мой и, след, антиген в ней соответст антителу. Отсут гемолиза регистрируют как полож ответ. Если в испытуемой сис-ме антиген не соответст антителу, иммунный комплекс не образуется.