- •Описать принцип микроскопии с тёмнопольным микроскопом.
- •Описать принцип микроскопии с люминесцентным микроскопом.
- •Описать методику обнаружения бактериофага в исследуемом материале.
- •Описать методику титрования бактериофага.
- •Определить dlm бактерий (по результату опыта).
- •Описать принцип и метод окраски по Грамму.
- •Как простерилизовать физ. Раствор?
- •Биологический метод контроля стерилизации.
- •Дать характеристику колоний, выросших на чашке с мпа, и указать ход дальнейших действий для выделения чистой культуры.
- •16. Как исследуют бактериологические характеристики воздуха в аптечном учреждении: аппарат для посева, объем исследуемого воздуха, методика.
- •19. Исследование лекарственного средства, стерилизуемого в процессе производства. Произвести учет посева для определения антимикробного действия лекарственного средства и указать дальнейшие действия.
- •20. Произвести учет посева лс, стерилизуемого в процессе производства. Сделать вывод.
- •21. Опишите метод испытания дистиллированной воды и инъекц р-ров на пирогенность.
- •22. Исследование лекарственного средства, не стерилизуемого в процессе производства. Количественное определение бактерий и грибов: изобразите в виде схемы.
- •29. Определение активности антибиотика методом диффузии в агар. Опишите методику посева и учета результатов
- •30. Опишите методику постановки развернутой реакции агглютинации и оцените результат
- •31. Опишите методику постановки и оцените результат рск
- •32. Назовите правила противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологической лаборатории
- •37. Посев материала на чашку с мпа для выделения чистой культуры
- •3 День - проверка чистоты культуры, выросшей на скошенном агаре, путём микроскопии мазков, окрашенных по Граму. При однородности исслед бак выделение чистой культуры можно считать законченным.
32. Назовите правила противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологической лаборатории
Соблюдение правил противоэпид режима. Бактериологич лаб при лечебно-проф учреждениях выполняют анализы, необход для постановки и уточнения диагноза инфекц заб, способствуя правильному выбору специфического лечения. Предметом для исслед явл выделения из орг чела, трупный материал и объекты внешней среды.
В соответствии с рекомендациями ВОЗ патогенные микроорг разделены на 4 гр по степени биологич опасности для сотрудников лабораторий и окружающего населения: -I - возбуд особо опасных инф (чумы, оспы, желтой лихорадки); -II – возбуд высококонтагиозных эпид заб (сибирской язвы, бруцеллеза, сыпного тифа); -III – возбуд инфекц болезней, выделяемые в самостоятельные нозологические группы ( брюшного тифа, шигеллезов); -IV – условно-патогенные микробы, возбудители оппортунистических инфекций.
Нумерация групп микробов, принятая в России, отличается обратным порядком от классификации ВОЗ, где к I группе относят микроорг самой низкой патогенности, а к IV - особо опасные. По номенклатуре ВОЗ выделяют 3 категории лабораторий: - базовые (основные или общего типа);
- режимные (изолированные); - лаборатории особого режима (максимально изолированные).
Основные правила поведения в бактериологич лаборатории 1.В помещении лаб нельзя входить без спец одежды: халата, сменной обуви. 2.В лаб нельзя вносить посторонние вещи, запрещается курить и приносить пищу. 3.При распаковывании заразного материала необходимо соблюдать осторожность: пробирки снаружи обтирать дез р-ром; переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, содержащим дез раствор. 4.Если разбилась посуда, содержащая заразный материал (пробирки, чашка Петри и др.), немедленно производится обеззараживание предметов, одежды, стола и помещения. 5.После окончания работы дезинфицируют руки и поверхность рабочего стола. 6.Музейные культуры микробов ставят на хранение в холодильник, закрывают и опечатывают
7. Работники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, с возбуд кот они работают. На кафедре микробиологии испол материалы, содержащие возбудителей III-IV групп, после разрешения председателя режимной комиссии Республиканской СЭС.
33. окраска метиленовой синью
Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю физ. Р-ра, в кот петлей вносят исслед материал (его берут из пробирки с чистой культурой, берут биолог петлей, предварительно открывая пробирку с культурой в пламени горелки и закрывают ее в пламени горелки) и распределяют его т о, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. При таком распределении материала в мазке при микроскопии можно увидеть изолированы бактериал клетки. Если исслед материал содержится в жид среде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки, не давая капле закипать. Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3 р через пламя горелки. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим - это простой (3-5 мин ), промыть водой, высушить и микроскопировать. Посмотреть в микроскоп и определить форму микроорганизмов , в мазке окрасились микроорганизмы в синий цвет.
34.и 35. по граму
1. Приготовление мазка. На обезжиренное спиртом предметное стекло помещают маленькую каплю водопроводной воды и переносят в нее петлей небольшое кол-во исслед материала как для препарата «раздавленная капля». Полученную суспензию равномерно размазывают петлей на площади 1 - 2 см2 возможно более тонким слоем. Мазок д б настолько тонок, чтобы высыхал после приготовления. 2. Высушивание мазка. Лучше всего сушить готовый препарат при комнатной т на воздухе. Хорошо приготовл тонкий мазок высыхает быстро. Если высушивание мазка замедлено, то препарат можно слегка нагреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию следует проводить осторожно, не перегревая мазка, иначе кл микроорг деформир. 3. Фиксация препарата преследует несколько целей: убить микроорг, т е сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; обеспечить лучшее прилипание кл к стеклу; сделать мазок более восприимчивым к окраске, т к мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые. Самым распростр способом фиксации явл термическая обработка. Для этого препарат 3 проводят через наиб горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх. Не следует перегревать мазок, т к при этом происходят грубые изменения клет структур, а иногда и внеш вида кл, н их сморщивание. Для исслед тонкого строения кл прибегают к фиксации различными хим в-вами. Фиксирующую жидкость наливают на мазок, либо препарат на опред вр погружают в стакан с фиксатором.
Методика окраски 1.Фиксированный мазок окрашивают через фильтр бумагу основным красителем – р-ром основного карболового кристаллического фиолетового. Прокрашивание длится 1-2 минуты.
2.Снимают бумагу, сливают избыток красителя и, не промывая препарата водой, наливают р-р Люголя на 1-2 минуты до почернения препарата. 3.Р-р Люголя сливают. Предметное стекло для обесцвечивания мазка погружают несколько раз в стаканчик со спитртом, процесс обесцвечивания считается завершенным, когда от мазка перестают отделяться окрашенные в фиолетовый цвет струйки жидкости. 4.Препарат тщательно промывают водопроводной водой.
5.Докрашивают спирто-водным раствором фуксина.
Результаты окраски Грам(+) микроорг окрашиваются основным красителем в темно-фиолет цвет, Грам(-), воспринимая дополнительную окраску, приобретают ярко-малиновый цвет.
36. по цилю-нильсену
1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый р-р фуксина и подогревают; при появл паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько мин (2—3 мин). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и обмывают мазок водой. 2. Обесцвечивают препарат 5—10% вод р-ром серной к-ты в теч 3—5 сек (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной к-ты можно применить 5% р-р азотной или 3% р-р соляной кислоты.
Мазок тщательно промывают водой.
Споласкивают 96°спиртом.
5. Снова промывают водой.
6. Докрашивают в течение 3—5 мин леффлеровской метиленовой синью или вод р-ром 1: 1000 малахитовой зелени или метиловой зелени.
7. Краску смывают водой и препарат высушивают.
Микроскопич картина: туберкулезные палочки - рубиново красные, остальные, за искл возбуд паратуберкулеза, кислото - и спиртоустойчивых сапрофитов, - синие. Для обесцвечивания мазков при окраске по Циль-Нильсену вместо р-ров к-т и спирта особо рекомендуется применение солянокислого алкоголя (соляной к-ты 3 мл+96° спирта 97 мл) до слабо заметного розоватого оттенка препарата. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой и т. д. по основной прописи. Указанным методом достигается одновр испытание бацилл на кислото - и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спиртоподатливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото - и спиртоустойчивы.