12.3.2 Опыт 2. Ингибиторы полифенолоксидазы
Ингибиторы – это вещества, уменьшающие скорость химической реакции. Снижение или полная потеря активности ферментов могут быть вызваны различными денатурирующими воздействиями. Механизм действия ингибиторов может быть самым разнообразным:
ингибитор взаимодействует с апоферментом, при этом возможны такие варианты как связывание функциональных групп белка; изменение третичной и четвертичной структуры апофермента; специфическое связывание с определенным участком апофермента; неспецифическая адсорбция на белке;
ингибитор образует комплекс с субстратом;
ингибитор связывает кофермент;
ингибитор связывает активатор;
ингибитор связывает кофактор.
Существует ингибирование двух основных типов: обратимые и необратимые. Обратимое ингибирование, в свою очередь, бывает конкурентным и неконкурентным.
Конкурентный ингибитор конкурирует с субстратом на основе структурного сходства, связываясь с активным центром фермента. Особенность конкурентного ингибирования в том, что его можно устранить или ослабить, повысив концентрацию субстрата.
При неконкурентном ингибировании ингибитор связывается не с активным центром фермента, а с другим участком молекулы фермента.
Изучение взаимодействия ферментов и ингибиторами позволяет получить ценные сведения о субстратной специфичности ферментов, природе функциональных групп активного центра, механизмах каталитической активности.
Приборы и реактивы: соль хлористый натрий; соль хлористый калий; соль йодистый калий; соль сернокислый цинк; соль азотнокислый натрий.
12.3.2.1 Методика проведения работы
Отрезают 6 кусочков яблока. Один кусочек оставляют для контроля, второй посыпают солью NaCI, третий – КСI, четвертый – KI, пятый – ZnSO4, шестой – NaNO3. Все кусочки оставляют на 30 минут на воздухе. Затем проводят наблюдения за изменениями произошедшими на срезе яблока.
12.3.2.2 Оформление результатов опыта
Полученные результаты записывают в таблицу 26.
Таблица 26
Объект исследования |
Наблюдения и выводы |
|||||
Контроль |
NaCI |
КСI, |
KI |
ZnSO4 |
NaNO3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
12.4 Контрольные вопросы
Назовите субстраты для полифенолоксидазы.
На чем основан метод определения активности полифенолоксидазы?
Что такое ингибиторы ферментов?
В чем заключается механизм действия ингибиторов?
Являются ли аллостерические ферменты ингибиторами? Ответ поясните.
Рекомендуемая литература
[3 с.472-492];[6 с.73-88]
Лабораторная работа №13 Определение содержания витамина с
13.1 Цель работы: Освоение метода количественного определения аскорбиновой кислоты.
13.2 Общие сведения
Витамины – низкомолекулярные органические соединения разнообразной химической природы. Большинство витаминов не синтезируется в организме человека, поэтому они являются незаменимыми факторами питания. Основными источниками витаминов для человека служат растительные и животные продукты. Некоторые витамины (В2, К) синтезируются микрофлорой кишечника.
Важные функции витаминов для организма связаны с тем, что многие из них являются составной частью ферментов. Водорастворимые витамины и ряд витаминоподобных веществ – это коферменты более 100 определенных ферментов. Коферменты не являются витаминами в чистом виде, они построены более сложно, но входящий в их состав витамин обычно выполняет главную роль для протекания данной химической реакции. В связи с этим ряд заболеваний организма, связанных с недостатком витаминов, рассматривают как следствие уменьшения активности ферментов в построении которых участвуют витамины.
Витамин С (аскорбиновая кислота) выполняет в организме несколько функций: она способствует образованию РНК, облегчает процессы окисления аминокислот, участвует в обмене стероидных гормонов, способствует проявлению активности фолиевой кислоты, участвует в окислительно-восстановительных процессах. Суточная потребность человека в витамине С составляет 50-75 мг.
Витамин С существует в двух формах: в виде аскорбиновой кислоты и окисленной – дегидроаскорбиновой кислоты:
`
Неспособность синтезировать витамин С – химический недостаток организма человека, обезьяны и морской свинки. Все другие организмы синтезируют его. Наличие в пище витамина С, сбалансированного с витаминами группы В повышает сопротивляемость к инфекциям и задерживает процессы старения организма.
Аскорбиновая кислота обладает сильными восстановительными свойствами. Витамин С легко разрушается при нагревании в щелочной среде и при доступе кислорода воздуха, на солнце.