10.3 Практическая часть

10.3.1 Опыт 1. Определение активности каталазы в свежем растительном материале.

Предлагаемый метод определения активности каталазы основан на учете количества разложившейся перекиси под действием ферментного препарата методом титрования перманганатом:

5 H₂O₂+2KMnO₄ +4H₂SO₄ 5O₂+2KHSO₄+8H₂O+MnSO₄

Приборы и реактивы: весы; ступки с пестиками; мерные колбы на 100 мл; воронки с фильтрами; конические колбы на 100 мл; бюретки; порошок карбоната кальция; 10%-ный раствор серной кислоты; 0,1Н раствор перманганата калия; 1%-ный раствор перекиси водорода.

10.3.1.1 Методика выполнения работы

Навеску 5 г свежего растительного материала растирают в ступке с 0,3 г CaCO₃, затем добавляют 20 мл дистиллированной воды и снова тщательно растирают до получения однородной массы.

После этого растертую массу водой количественно переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки. Через 30 минут смесь фильтруют. Две порции чистого прозрачного фильтрата по 20 мл помещают в конические колбы на 100 мл. Одну из колб кипятят 2-3 минуты для инактивации фермента, а затем охлаждают. В обе колбы приливают по 20 мл воды и по 3 мл 1%-ного раствора Н₂О₂. Время инкубации – 30 минут. По окончании инкубации к содержимому обеих колб добавляют 5 мл 10%-ного раствора Н₂SO₄ и титруют 0,1Н раствором KMnO₄ до слабо розовой окраски, не исчезающей в течение минуты.

По разности между контрольным и опытным титрованиям определяют количество разложившейся перекиси водорода за время инкубации в расчете на 1 г исходного растительного материала.

Вычисление результатов проводят по формуле:

х = ,

где х – активность каталазы в мг Н₂О₂, разложившейся за время инкубации на 1 г растительной пробы;

а – объем 0,1 Н раствора KMnO₄, израсходованного на холостое титрование(мл);

b – объем 0,1 Н раствора KMnO₄ пошедшего на опытное титрование (мл);

Т – поправка к титру 0,1 Н KMnO₄;

1,7 – количество мл Н₂О₂, соответствующее каждому мл 0,1 Н раствора KMnO₄(мг);

Н – навеска растительного материала (г).

10.3.1.2 Оформление результатов опыта

Полученные результаты записывают в таблицу 20.

Таблица 20

Наименование объекта	Н, г	а, мл	b, мл	Т	Активность каталазы

10.3.2 Опыт 2. Определение активности каталазы в масле

Фермент каталаза в свежем сливочном масле содержится обычно в очень небольшом количестве, иногда ее совсем нет.

Появление каталазы в масле обусловлено его бактериальной обсемененностью. Наибольшее количество каталазы выделяю микробы гнилостной группы.

Низкие числа каталазы характеризуют стойкость масла, высокие же в большинстве случаев характеризуют масло малой стойкости при хранении.

Приборы и реактивы: весы; колбы конические на 200 мл; водяная баня; мерные цилиндры на 50 мл; мерные цилиндры на 10 мл; бюретки; термометр; 0,3%-ный раствор перекиси водорода; 10%-ный раствор серной кислоты; 0,1Н раствор перманганата калия.