9.3.1.1 Методика выполнения работы
Наливают в 10 пронумерованных пробирок по 1мл дистиллированной воды. В первую пробирку отмеряют 1 мл слюны, разведенной водой в десять раз. Перемешивают содержимое пробирки. 1 мл полученного раствора переносят из первой пробирки во вторую. Перемешивают содержимое второй пробирки и переносят из нее 1мл раствора в третью. Этим способом получают ряд разведений. Концентрация фермента в каждой последующей пробирке в два раза меньше, чем в предыдущей. Из десятой пробирки 1мл жидкости как излишней выливают.
Наливают в каждую пробирку еще по 1 мл воды. Далее наливают из бюретки во все десять пробирок, начиная с десятой, по 2 мл раствора крахмала и перемешивают содержимое пробирок. Одновременно помещают все десять пробирок в химическом стакане в нагретую до 370С водяную баню. Выдерживают пробирки на водяной бане при температуре 370С в течение 30 минут, затем вынимают пробирки из бани, быстро охлаждают их потоком холодной воды. Прибавляют во все пробирки по две капли раствора йода, перемешивают и наблюдают в пробирках гамму цветов от желтого к синему.
Желтый цвет свидетельствует об отсутствии крахмала, красно-бурый – о присутствии промежуточных продуктов расщепления, синий – о присутствии крахмала или продуктов его начального расщепления.
Вычисляя амилазную активность исследуемой слюны, исходят из следующего. В пробирке, где жидкость окрашена в синий цвет, должного расщепления крахмала не произошло. Достаточное расщепление крахмала имеет место в той пробирке, где нет синего оттенка. Предположим, что это пятая пробирка. В пятой пробирке неразведенной слюны было 1/320 мл, то есть:
мл
слюны разлагает 2мл 0,1%-ного раствора
крахмала
1 мл -----------//------------ Х мл 0,1%-ного раствора крахмала
Х
=
=
640
мл
Следовательно, 1мл слюны разлагает за 30 минут при 370С 640 мл 0,1%-ного раствора крахмала.
(диастаза)
=
=
1,23 ед
С этой же серии разведенной слюны провести еще два типа определения:
вместо 1 мл дистиллированной воды берут по1 мл хлористого натрия в 10 пробирок;
вместо 1 мл дистиллированной воды берут по 1 мл сернокислой меди в 10 пробирок.
Сравнивают результаты трех определений активности амилазы.
9.3.1.2 Оформление результатов опыта
Полученные данные записывают в таблицу 18.
Таблица 18
|
Номера пробирок, Н2О |
Номера пробирок, NaCI |
Номера пробирок,CuSO4 |
|||||||||||||||||||||||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
|
Окраска |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
диастаза |
|
|
|
|||||||||||||||||||||||||||