- •Полимеразная цепная реакция: принципы и практические рекомендации по использованию в клинической практике врача
- •Введение
- •Принцип метода пцр
- •Преимущества пцр как метода диагностики
- •Недостатки метода пцр
- •Общеклиническое и практическое значение пцр
- •Общий методический подход к проведению пцр
- •Диагностика частной патологии методом пцр
- •Вирусные гепатиты (вг)
- •Общие характеристики вирусных гепатитов
- •Вирусный гепатит в (hbv - от англ. Hepatitis b Virus)
- •Маркеры вируса в в репликативную и интегративную фазы развития hbv-инфекции
- •Вирусный гепатит c (hc - от англ. Hepatitis c Virus)
- •Вирусный гепатит d (нd V - от англ. Hepatitis d Virus)
- •Вирусный гепатит g (нg V - от англ. Hepatitis g Virus)
- •Герпетическая инфекция
- •Цитомегаловирус (цмв)
- •Вирус Эпштейна-Барр (вэб)
- •Папилломавирусная инфекция человека
- •Типы hpv, обнаруженные при различных поражениях кожи и слизистых оболочек (VilMers e.M., 1989)
- •Хламидиозная инфекция
- •Число микроорганизмов в пробе
- •Относительный предел измерения (аналитическая чувствительность) прямых методов диагностики c. Trachomatis (Carolyn m. Black, 1997). Микоплазменная инфекция
- •Хеликобактерная инфекция
- •Туберкулёз
- •Результаты анализа клинических образцов на наличие возбудителей туберкулеза микробиологическими методами и методом пцр
- •Онкологические заболевания
- •Опухоли и прогностические днк-маркеры или их рнк продукты
- •Наследственные заболевания и пренатальная диагностика
- •Принципиальная схема пренатальной диагностики наследственных болезней. Институт акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта рамн
- •Судебно-медицинская практика
- •Транспланталогия
- •Заключение
- •Литература
Герпетическая инфекция
Современная таксономия семейства Herpesviridae огромна и включает в себя 80 видов вирусов, которые паразитируют в организме от устриц до человека. Герпес-вирусы имеют стабильные родовые свойства, основными из которых являются структура ДНК и механизмы инфицирования клеток хозяина. В настоящее время известно 8 патогенных для человека герпес-вирусов (табл.3). Герпес-вирусная инфекция является наиболее распространённой и может проявляться в разных формах: от пожизненной латентной персистенции до лимфопролиферативных состояний. В связи с этим любая герпесвирусная инфекция лучше всего характеризуется одним образным выражением: «однажды инфицирован – инфицирован на всю жизнь». Появляющиеся в ответ на внедрение вирусов герпеса специфические антитела зачастую не обеспечивают санацию организма от вирусов герпеса и не предупреждают рецидива заболевания. В связи с этим перед практикующим врачом стоят задачи: составить наиболее адекватный план лабораторного обследования и правильно оценить полученные результаты. Необходимо помнить, что антитела к большинству герпес-вирусов выявляются более чем у 90% людей старше 25 лет не имевших на момент обследования клиники каких-либо герпетических заболеваний. Вместе с тем, как указывалось выше, обнаружение в сыворотке крови ДНК какого-либо из герпес-вирусов не всегда означает дальнейшее развитие клинически манифестной инфекции или являться причиной имеющейся патологии. Поэтому врачу крайне важно провести дифференциальную диагностику между состоянием «инфицированности» и «болезни», вызванной каким-либо герпетическим вирусом .
Альфа-герпесы |
Бета-герпесы |
Гамма-герпесы |
ВПГ 1 - вирус простого герпеса 1; ВПГ 2 - вирус простого герпеса 2; V-Z - вирус ветряной оспы/ опоясывающего герпеса |
ЦМВ – Цитомегаловирус; ВГ-6 - Герпес-вирус 6 типа; ВГ-7 - Герпес-вирус 7 типа |
ВЭБ - Вирус Эпштейна-Барр; ГВ-8 - Герпес-вирус 8 типа |
Табл. Классификация герпес-вирусных инфекций человека
С этой целью лабораторные исследования должны проводиться по алгоритму:
1 этап: тестирование на наличие противогерпетических антител класса М и G методом твердофазного ИФА, а также определение ДНК методом ПЦР (кровь, ликвор, секреты слизистой).
2 этап: не ранее чем через две, а лучше через три недели, повторить обследование методом ИФА на наличие вышеуказанных антител. Проведение ПЦР в этом периоде необходимо только в случае спорной клинической ситуации.
3 этап: обязательное обследование методом ПЦР для определения ДНК в сыворотке крови, ликворе или другой биологической среде, сроки которого определяются клинически и обычно зависят от протокола лечения. Серологические исследования на данном этапе носят второстепенный характер. Смысл такой последовательности заключается в том, что первых два этапа позволяют установить этиологию и характер инфекционного процесса (острая, хроническая или латентная формы). На третьем этапе, врач осуществляет прогноз инфекции, и если назначалось лечение, то оценивает его эффективность. В этой фазе лечебно-диагностического процесса метод ПЦР играет ключевую роль, т.к. уровень специфических антител не отражает степени виремии, а стало быть, прогноз болезни и качество проведенной терапии. Остановимся на лабораторной диагностике некоторых, наиболее значимых герпес-вирусов.
Вирус простого герпеса 1 и 2 типов (ВПГ 1+2)
Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых ВПГ 1+2 типов, включает в себя комплекс исследований, состоящий из выявления специфического иммунного ответа (антител), определения вирусной ДНК и вирусных белков (антигенов), а также подтверждение природы патогена культуральным методом (по цитопатогенному эффекту вируса в перевиваемой культуре клеток).
Серологические тесты на ВПГ, направленные на выявление антител против ВПГ 1+2, показали низкую диагностическую значимость из-за неоднозначности клинической трактовки. Это обусловлено тем, что у 97% - 100% обследованных клинически здоровых лиц обнаруживались указанные антитела. Нарастание титров антител к ВПГ происходит медленно в течение нескольких недель, при этом могут одновременно определяться специфические антитела класса М и G. Впоследствии антитела к ВПГ класса М могут циркулировать в крови в некоторых случаях от нескольких месяцев до нескольких лет. Этот феномен связывают с нарушением иммунитета у инфицированных ВПГ лиц. Кроме того, в случае реактивации ВПГ в крови могут вновь появиться специфические антитела класса М. С другой стороны, у иммуноскомпрометированных пациентов при рецидивах инфекции ВПГ антитела к вирусу (как IgM, так и IgG) могут не выявляться. Ложноотрицательный ответ на анти-ВПГ класса М может быть у новорождённых. Все выше перечисленное показывает на затруднительность дифференцировки острой инфекции ВПГ от её реактивации. Тем не менее, серологическое обследование необходимо проводить и делать это надо методом «парных» сывороток (с интервалом 14-21 день). Так, например, отсутствие в первой и появление во второй сыворотке противогерпетических IgM, или нарастание титров специфических IgG в 4 раза и более может быть показателем острой инфекции ВПГ. Таким образом, серологические тесты на наличие антител к ВПГ не могут служить единственным и надёжным критерием в постановке клинического диагноза.
Метод ПЦР в настоящее время является основным диагностическим способом в практическом здравоохранении для выявления ДНК вируса. При этом для выделения ДНК ВПГ может быть использован любой биологический материал: клетки, биологические жидкости, ткани и т.п. В настоящее время разработаны методы количественного определения вирусной ДНК в тестируемом образце. На основании полученных данных можно оценить форму инфекционного процесса. Так, если количество ДНК превышает 1000 копий геном-эквивалента (г/э) на 10 лейкоцитов периферической крови, это может свидетельствовать о развитии диссеминированной инфекции.