- •Полимеразная цепная реакция: принципы и практические рекомендации по использованию в клинической практике врача
- •Введение
- •Принцип метода пцр
- •Преимущества пцр как метода диагностики
- •Недостатки метода пцр
- •Общеклиническое и практическое значение пцр
- •Общий методический подход к проведению пцр
- •Диагностика частной патологии методом пцр
- •Вирусные гепатиты (вг)
- •Общие характеристики вирусных гепатитов
- •Вирусный гепатит в (hbv - от англ. Hepatitis b Virus)
- •Маркеры вируса в в репликативную и интегративную фазы развития hbv-инфекции
- •Вирусный гепатит c (hc - от англ. Hepatitis c Virus)
- •Вирусный гепатит d (нd V - от англ. Hepatitis d Virus)
- •Вирусный гепатит g (нg V - от англ. Hepatitis g Virus)
- •Герпетическая инфекция
- •Цитомегаловирус (цмв)
- •Вирус Эпштейна-Барр (вэб)
- •Папилломавирусная инфекция человека
- •Типы hpv, обнаруженные при различных поражениях кожи и слизистых оболочек (VilMers e.M., 1989)
- •Хламидиозная инфекция
- •Число микроорганизмов в пробе
- •Относительный предел измерения (аналитическая чувствительность) прямых методов диагностики c. Trachomatis (Carolyn m. Black, 1997). Микоплазменная инфекция
- •Хеликобактерная инфекция
- •Туберкулёз
- •Результаты анализа клинических образцов на наличие возбудителей туберкулеза микробиологическими методами и методом пцр
- •Онкологические заболевания
- •Опухоли и прогностические днк-маркеры или их рнк продукты
- •Наследственные заболевания и пренатальная диагностика
- •Принципиальная схема пренатальной диагностики наследственных болезней. Институт акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта рамн
- •Судебно-медицинская практика
- •Транспланталогия
- •Заключение
- •Литература
Маркеры вируса в в репликативную и интегративную фазы развития hbv-инфекции
Маркеры НВV |
Фаза развития НВV-инфекции |
|
репликации |
интеграции |
|
1.Сывороточные: |
||
НВsАg |
+ |
+ |
НвеАg |
+ |
- |
НВ V ДНК |
+ |
- |
Аnti-НВс IgМ |
+ |
- |
Аnti-НВс IgG |
+ |
+/- |
Аnti-НВе |
- |
+ |
2. Тканевые: |
||
НВсАg |
+ |
- |
НВsАg |
+ |
+ |
НВV ДНК |
+ |
- |
Таким образом, определение ДНК НВV в плазме крови является важнейшим анализом, который в совокупности с другими лабораторными исследованиями позволяет объективно диагностировать инфекцию, определять характер инфекционного процесса, выступать в качестве критерия в проведении терапии и оценки её эффективности.
Вирусный гепатит c (hc - от англ. Hepatitis c Virus)
Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae и. был идентифицирован в 1989 году, как главный этиологический факторпосттрансфузионных гепатитов у людей. С открытием НСV начался процесс кардинального пересмотра этиопатогенеза и лечения хронических аутоиммунных гепатитов и криптогенных циррозов печени. По данным ВОЗ около 3% мирового населения инфицированы НСV. При этом ежегодно в мире регистрируется более одного миллиона новых случаев НСV-инфекции, что соответствует уровню пандемии. Особенностями НСV- инфекции является высокая частота хронизации (от 30% до 95% в зависимости от генотипа вируса), длительное бессимптомное или мимикрирующее под другие болезни течение, возможность трансплацентарной и сексуальной передачи инфекции (рис.5).
Рис.5. Фазы течения НСV-инфекции
Рис. 6. Алгоритм обследования пациента на НСV-инфекцию
На рисунке 6 представлен алгоритм обследования пациента на НСV-инфекцию. Необходимо помнить, что у пациентов, инфицированных вирусом гепатита, С возможны несовпадения между результатами определения антител и РНК вируса.
Ложноотрицательные результаты в ИФА при положительной ПЦР имеет место в трёх ситуациях:
исследование произведено в ранние сроки после заражения, или в так называемую фазу «серологического окна», которое длится от 2 недель до 6 месяцев. Это является основной причиной того, что методами ИФА в сыворотке крови не всегда удается обнаруживать антитела против вируса гепатита С;
у иммуносупрессивных пациентов, в частности, у ВИЧ-инфицированных, онкологических и туберкулёзных больных;
при инфицировании редкими генотипами НСV-инфекции, например, 4 и 5 субтипами вируса С.
Негативная ПЦР при положительном ответе в ИФА чаще всего бывает вследствие низкой концентрации вируса в крови (порог аналитической чувствительности) или при действительной элиминации патогена из организма, но при этом антитела к вирусу гепатита С ещё могут циркулировать в крови до двух лет. В целом необходимо помнить, что серологическая диагностика НСV-инфекции, т.е. выявление специфических антител класса M и G, решает задачу этиологического диагноза ВГ, но не определяет характер и прогноз инфекционного процесса. Более того, тест-систем ИФА для практического здравоохранения с целью определения антигенов вируса гепатита С вообще не существует.
Таким образом, применение ПЦР позволяет выявлять вирус гепатита С на самом раннем этапе инфекционного процесса, поскольку РНК вируса гепатита С может обнаруживаться в сыворотке крови уже через неделю после инфицирования.
Ещё одной уникальной возможностью, которой обладает метод ПЦР, является определение генетической полиморфности вируса гепатита С. В настоящее время выделяют 6 основных генотипов вируса гепатита С, которые в свою очередь делятся на множество субтипов. В странах СНГ преобладающими являются 1, 2 и 3 генотипы ВГС, причем наличие субтипа 1b является наименее благоприятным признаком течения и успешной терапии НСV-инфекции. Метод ПЦР позволяет также определить перинатальное заражение ребёнка от НСV-инфицированной матери.
Таким образом, в диагностике, оценке прогноза и успеха противовирусной терапии НСV-инфекции метод ПЦР не имеет себе равных.