Раздел IX. Обмен аминокислот и простых белков. Занятие № 27

ТЕМА.АЗОТИСТЫЙ БАЛАНС. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЦЕН-НОСТЬ, ПЕРЕВАРИВАНИЕ И ВСАСЫВАНИЕ БЕЛКОВ. ГНИЕНИЕ БЕЛКОВ В КИШЕЧНИКЕ. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА.

Цель занятия:1.Знать процессы переваривания и всасывания белков.

2.Изучить процессы гниения аминокислот в кишечнике и обезвреживания продуктов гниения.

3.Овладеть методами количественного и качественного анализа желудочного сока.

Исходный уровень знаний:

- строение и физико-химические свойства аминокислот;

- химия и биологическая роль белков;

- заменимые и незаменимые аминокислоты;

- специфичность действия ферментов.

Содержание занятия.

I.2. Критерии биологической ценности белков.

Азотистый баланс: виды, примеры.

Физиологический минимум и оптимум белка.

Переваривание и всасывание белков: условия, отделы желудочно-кишечного тракта.

Протеолитические ферменты: название, место и механизм активации, субстратная специфичность.

Гниение аминокислот в кишечнике, обезвреживание продуктов гниения.

II.1.Работа № 1. ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ СОСТАВНЫЕ ЧАСТИ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА И ИХ ОБНАРУЖЕНИЕ.

Наряду с нормальными компонентами в желудочном соке при ряде заболеваний могут появляться и другие вещества: молочная кислота, кровь, желчные пигменты. В клинике часто определяют эти вещества с помощью специальных реакций.

При ахлоргидрии наряду с молочной кислотойобразуются летучие жирные кислоты (уксусная, масляная), т.к. под влиянием микроорганизмов в желудке развиваются процессы брожения.Кровь (кровяные пигменты) может попадать в желудочный сок при изъязвлении стенок желудка. Желчные пигменты появляются в желудке из двенадцатиперстной кишки вследствие антиперистальтики.

а) Обнаружение молочной кислоты.

Принцип метода и химизм реакции см. зан..№20, (с.73).

Порядок выполнения работы.

К 1 мл реактива Уффельмана добавить 5 кап желудочного сока, содержащего молочную кислоту.

РЕЗУЛЬТАТ:

б) Бензидиновая проба на кровь.

Принцип метода и химизм реакции.

Реакция обусловлена способностью гемоглобина катализировать окисление бензидина перекисью водорода. Бензидин при этом окисляется в парахинондиимин и жидкость приобретает синюю окраску, а при стоянии - красную. Эта реакция очень чувствительна и служит для определения минимальных примесей крови в биологических жидкостях.

+H₂O₂

H₂N— — —NH₂HN═ ═ ═NH+2H₂O

Hb

Порядок выполнения работы.

К 5 кап. бензидина прилить 5 кап. 3% раствора перекиси водорода и 5 кап. желудочного сока, содержащего кровь. Отметить окраску.

РЕЗУЛЬТАТ:

Работа № 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

КИСЛОТНОСТИ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА.

При определении кислотности желудочного сока различают общую кислотность, общую соляную кислоту, свободную соляную кислоту и связанную соляную кислоту. Под общей кислотностью желудочного сока понимают сумму всех кислореагирующих веществ.

Принцип метода.

Общую кислотность измеряют в миллилитрах 0,1 N раствора NaOH, затраченного на нейтрализацию 1000 мл желудочного сока в присутствии индикатора фенолфталеина (зона перехода 8,3-10,0; ниже 8,3 - бесцветный, выше 10,0 - красный). Содержание свободной HCl измеряют в мл 0,1 N раствора NaOH, затраченного на нейтрализацию 1000 мл желудочного сока в присутствии индикатора диметиламиноазобензола (зона перехода рН 2,9-4,0; ниже - розово-красный, выше - желтый).

Соляная кислота, называемая "связанной", находится в солеобразном состоянии с белками и продуктами их переваривания.Определяетсяпутём расчёта при титровании желудочного сокав присутствии двух индикаторов(диметиламиноазобензола и фенолфталеина).

Общая соляная кислота - сумма свободной и связанной соляной кислоты.

В норме у взрослого человека показатели кислотности колеблются в следующих пределах:

общая кислотность - 40-60 ммоль/л

свободная HCl - 20-40 ммоль/л

связанная HCl - 10-20 ммоль/л

общая HCl - 30-60 ммоль/л

Порядок выполнения работы.

Отмерить пипеткой в колбочку 5 мл желудочного сока, добавить 1 кап. диметиламиноазобензола и 2 кап. фенолфталеина. При наличии в желудочном соке свободной HCl он окрашивается в красный цвет с розовым оттенком, при отсутствии ее сразу появляется желтая окраска.

Титровать свободную HCl 0,1 N раствором щелочи из микробюретки до появления желтовато-красного (оранжевого) окрашивания, результат зафиксировать (n₁).

Продолжить титрование, не добавляя щелочи в бюретку до появления лимонно-желтого цвета, результат записать (n₂).

Продолжить титрование до появления розового окрашивания (n₃).

NB! n₃> n₂> n₁.

Расчет:

n • 1000 • 0,1

X = ------------------------ , где

5

X- кислотность желудочного сока;

n- количество щелочи, пошедшей на титрование желудочного сока.

NB! n=n₁- для определениясвободной соляной кислоты;

n=n₃- для определенияобщей кислотности;

n=(n₂+n₃):2- для определенияобщей соляной кислоты.

1000- количество мл желудочного сока для расчета;

0,1- кол-во мг-экв щелочи в 1 мл 0,1 N р-ра в ммоль;

5- кол-во желудочного сока, взятого для титрования в мл.

РЕЗУЛЬТАТЫ:

ВЫВОД:

Клинико-диагностическое значение.

При заболеваниях желудка кислотность может изменяться. При язвенной болезни желудка или гиперацидном гастрите содержание свободной HCl и общей кислотности увеличивается (гиперхлоргидрия). При гипацидном гастрите или раке желудка наблюдается уменьшение количества свободной HCl и общей кислотности (гипохлоргидрия). При раке желудка, хроническом гастрите отмечается полное отсутствие HCl и значительное снижение общей кислотности (ахлоргидрия). При злокачественном малокровии, при раке желудка наблюдается полное отсутствие HCl и пепсина (ахилия).

Работа в плане УИРС.

Получить у преподавателя две пробирки с клиническим материалом. Содержимое 1-ой пробирки проанализировать на содержание патологических компонентов, а образец из 2-ой пробирки оттитровать для определения показателей кислотности желудочного сока.

РЕЗУЛЬТАТЫ:

ВЫВОД:

III.2. Контрольные вопросы.

Что такое желудочный сок?

Каков его состав в норме?

Какова роль HCl желудочного сока в пищеварении?

Какие патологические компоненты можно обнаружить в желудочном соке?

Какой реакцией открывают молочную кислоту?

Какая проба используется для выявления крови?

Чему в норме равны показатели кислотности желудочного сока?

Как называются состояния изменения кислотности?

Материал для самоподготовки. а)1 с.409-431; II, III