Занятие № 25
ТЕМА.БИОСИНТЕЗ ЛИПИДОВ И ХОЛЕСТЕРИНА. РЕГУЛЯ-ЦИЯ И НАРУШЕНИЯ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА.
Цель занятия: 1.Изучить обмен холестерина у человека.
2.Усвоить синтез триглицеридов и фосфоглицеридов.
3.Ознакомиться с регуляцией и патологией липидного обмена.
4.Овладеть методом количественного определения холестерина в сыворотке крови (по Ильку).
Исходный уровень знаний:
- строение и классификация липидов;
- регуляция активности ферментов;
- строение ц-АМФ, АТФ, ЦТФ;
- жирорастворимые витамины.
Содержание занятия.
I.2. Синтез и ресинтез триглицеридов.
Пути синтеза и ресинтез глицерофосфолипидов.
Синтез холестерина: локализация в организме, этапы, химизм I стадии.
Биологическое значение и структура стероидов - производных холестерина.
Выведение холестерина из организма.
Липопротеиды: виды, состав.
Регуляция липидного обмена: роль ЦНС, эндокринной системы, ц-АМФ.
Патология липидного обмена: причины, симптоматика, примеры энзимопатий.
II.1. Работа № 1. РЕАКЦИЯ ЛИБЕРМАННА-БУРХАРДТА
НА ХОЛЕСТЕРИН.
Холестерин и его эфиры содержатся в различных тканях и жидкостях животных: головном мозге, кожном сале, крови, желчи. В мозге холестерин в норме присутствует почти исключительно в свободном виде, а не в виде эфиров. В белом веществе мозга содержится 4-5% холестерина на влажную массу.
Принцип метода.
Раствор холестерина в хлороформе дает с уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой красное окрашивание, переходящее затем в синее и зеленое. Под действием концентрированной серной кислоты происходит отщепление воды от вторичного спирта холестерина с последующей конденсацией непредельных углеводородов, соединяющихся с серной кислотой, и образованием окрашенных продуктов.
Порядок выполнения работы.
К 1 мл хлороформного экстракта из мозга добавить 10 кап уксусного ангидрида и 2 кап. концентрированной H2SO4и хорошо перемешать. Отметить изменение окраски.
РЕЗУЛЬТАТ:
Работа № 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕ-РИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Принцип метода.
Холестерин взаимодействует с ацетангидридом и серной кислотой с образованием соединения зеленого цвета. Интерференция белков подавлена 2,5-диметилбензосульфоновой кислотой.
Порядок выполнения работы.
|
Реактивы (мл) |
Р-р сравнения |
Эталон |
Проба |
|
Сыворотка крови |
- |
- |
0,1 |
|
Стандартный –р (реактив 1) |
- |
0,1 |
- |
|
Дистиллированная вода |
0,1 |
- |
- |
|
Реактив 2 |
3,0 |
3,0 |
3,0 |
|
|
Перемешать, на водяную баню t=20оС на 5 мин. | ||
|
Реактив 3 (Н2SO4) |
0,6 |
0,6 |
0,6 |
|
|
Быстро перемешать, на водяную баню t=20оС на 10 мин. | ||
Измерить оптическую плотность пробы и эталона против раствора сравнения в кювете 1 см при длине волны 560-590 нм.
РАСЧЕТ:
А1
Х = , где
А2
Х - количество холестерина в ммоль/л
А1– оптическая плотность пробы
А2– оптическая плотность стандарта.
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
Клинико-диагностическое значение.
При нарушении жирового обмена холестерин может накапливаться в крови. Увеличение содержания холестеринав крови (гиперхолестеринемия) наблюдаетсяпри атеросклерозе, сахарном диабете, механической желтухе, нефрите, нефрозе(особенно при липоидных нефрозах), гипотиреозе.
Понижение холестеринав крови (гипохолестеринемия) наблюдаетсяпри анемиях, голодании, туберкулезе, гипертиреозе, раковой кахексии, паренхиматозной желтухе, поражении центральной нервной системы, лихорадочных состояниях, при введении инсулина.
III.2. Контрольные вопросы.
В каком виде холестерин содержится в сыворотке крови и тканях?
В чём заключается физиологическое значение холестерина?
Какова нормальная концентрация холестерина в сыворотке крови?
При какой патологии наблюдается гиперхолестеринемия?
Когданаблюдается гипохолестеринемия?
Назовите исходные вещества для синтеза холестерина.
Предшественником каких биологически активных соединений является холестерин?
Материал для самоподготовки. а)1 с.392-408, 556-558, 574-577,
245, 454; II, III