Раздел X. Обмен сложных белков Занятие № 32

ТЕМА.ОБМЕН НУКЛЕОПРОТЕИДОВ. БИОСИНТЕЗ И

РАСПАД ПУРИНОВЫХ И ПИРИМИДИНОВЫХ

НУКЛЕОТИДОВ.

Цель занятия:1.Ознакомиться с синтезом пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов.

2.Знать катаболизм пуринов и пиримидинов.

Исходный уровень знаний:

- химия и свойства белков;

- химия нуклеиновых кислот;

- классификация и номенклатура ферментов;

- обмен простых белков.

Содержание занятия.

I.2. Источники пуринового кольца.

Синтез пуриновых нуклеотидов из инозиновой кислоты.

Синтез пиримидиновых нуклеотидов.

Распад пуринов до мочевой кислоты.

Распад пиримидиновых нуклеотидов.

Распад нуклеиновых кислот в желудочно-кишечном тракте и тканях.

Регуляция обмена нуклеотидов.

Патология обмена нуклеопротеидов.

II.1.Работа № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ

В МОЧЕ.

Мочевая кислота у человека является конечным продуктом обмена пуриновых оснований, входящих в состав сложных белков - нуклеопротеинов.

Принцип метода.

Мочевая кислота способна восстанавливать фосфорно-вольфрамовый реактив в фосфорно-вольфрамовую синюю, интенсивность окраски которой пропорциональна содержанию мочевой кислоты. При титровании фосфорно-вольфрамовой синей красной кровяной солью К₃[Fe(CN)₆] она окисляется и синее окрашивание исчезает.

Порядок выполнения работы.

К 1,5 мл мочи прибавить 1 мл 20% раствора карбоната натрия и 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива Фолина, перемешать и титровать 0,01 N раствором красной кровяной соли до исчезновения окраски.

РАСЧЕТ: Содержание мочевой кислоты (в мг) в суточной моче вычисляют по формуле:

0,8 • А • В

Х=- , где

1,5

0,8- количество мочевой кислоты в мг, соответствующее 1 мл раствора К₃[Fe(CN)₆];

А - количество красной кровяной соли, пошедшее на титрование в мл;

В- суточный диурез в мл.

Физиологические значения.

В норме у человека с мочой выделяется 1,6-3,54 ммоль/сут (270-600 мг/сут) мочевой кислоты.

Коэффициент пересчета в единицы СИ (ммоль/сут) равен 0,0059.

РЕЗУЛЬТАТ:

ВЫВОД:

Клинико-диагностическое значение.

Гипоурикурия отмечается при подагре, нефрите, почечной недостаточности.

Гиперурикурия - при алиментарной (пищевой) лейкемии, усиленном распаде нуклеопротеидов.

У детей выделяется относительно больше мочевой кислоты, чем у взрослых. Выделение мочевой кислоты зависит от содержания пуринов в пище и интенсивности обмена нуклеопротеидов.

Работа № 2. ВЫДЕЛЕНИЕ КАЗЕИНОГЕНА МОЛОКА

И ГИДРОЛИЗ ЕГО. (для пед. факультета)

Казеиноген обладает свойствами кислоты и в молоке находится в виде анионов, растворимых в воде (кальцинат казеиногена). Недиссоциированные молекулы казеиногена мало растворимы в воде. Изоэлектрическая точка казеиногена соответствуети рН 4,7. Этим объясняется, что при подкислении молоко свертывается в результате выпадения в осадок казеиногена.Свертывание молока возможно и в присутствии молочной кислоты, образовавшейся из лактозы под действием молочнокислых бактерий. При ферментативном свертывании молока (действии пепсина) казеиноген подвергается химическим изменениям с образованием из него казеина. Кальциевая соль казеина в противоположность кальциевой соли казеиногена нерастворима в воде.

Порядок выполнения работы.

1. Выделение казеиногена. К 4 мл молока прилить равный объем дистиллированной воды. Осадить казеиноген добавлением двух капель концентрированной уксусной кислоты. Выпавший осадок казеиногена отфильтровать и промыть на фильтре дистиллированной водой 2 раза.

2. Гидролиз казеиногена. При щелочном гидролизе казеиногена происходит его распад на фосфат и белок. После осаждения казеиногена из молока все содержимое с фильтра перенести в пробирку для гидролиза с обратным холодильником. Смыть осадок с фильтра 2 мл 0,1% раствора карбоната натрия в ту же пробирку и добавить 4 мл 10% раствора едкого натра. Кипятить на умеренном огне (на асбестовой сетке) 15 мин с момента закипания. После охлаждения к гидролизату добавить равный объем 0,1% раствора карбоната натрия и провести реакции на продукты гидролиза (обнаружение белка - стр. 9-11; обнаружение фосфата стр.48-49).

РЕЗУЛЬТАТ:

III.2. Контрольные вопросы.

Что является исходным субстратом для образования мочевой кислоты?

Какова нормальная суточная экскреция мочевой кислоты с мочой у человека?

Для каких заболеваний характерна гиперурикемия? гипоурикемия?

Какие факторы влияют на концентрацию мочевой кислоты в моче?

Что такое подагра?

Есть ли возрастные особенности концентрации мочевой кислоты в биологических жидкостях?

Материал для самоподготовки. а)1 с.469-478, 498-503; II, III