4.Необходимый уровень знаний:

4.1. Из материалов других дисциплин:

а) из биологии - общие данные о крови.

4.2.Из предшествующих занятий по гистологии:

- из раздела «Гистотехника»: принципы окрашивания препаратов (понятия оксифилии, базофилии, нейтрофилии);

- из «Цитологии»: структура и функции органелл, фагоцитоз;

- из «Эмбриологи»: производные мезенхимы;

- из «Общей гистологии»: определение понятия «ткань», классификация тканей: учебник - гл.1,4,5.

5.Новый материал:

5.1.Кровь: учебник гистологии - гл.8. Конспекты лекций.

6.Ориентировочная основа действия.

6.1. Методические указания к изучению гистологических препаратов.

6.1.1. Мезенхима (зародыш млекопитающего). Окраска гематоксилином.

Уже при малом увеличении видно различие между компактными закладками органов и рыхло расположенными между ними клетками зародышевой соединительной ткани - мезенхимы. При большом увеличении следует рассмотреть и обозначить эти мелкие, отростчатой формы клетки мезенхимы (1), с относительно крупным светлым округлым ядром, окруженным узким ободком цитоплазмы. Соединяясь отростками, клетки образуют синцитий (2). Найти кровеносный сосуд (3), выстланный плоскими эпителиальными клетками - эндотелиоцитами (4), и стволовые клетки крови (5) в его просвете.

6.1.2. Кровь человека (мазок). Окраска азур-эозином по Романовскому-Гимзе.

Клетки крови человека изучают при больших увеличениях, обычно с использованием иммерсионного объектива (необходимо заменить окуляр с увеличением х7 на х10 и объектив с увеличением х40 на х90), и нанесением на покровное стекло капли иммерсионного масла.

При изучении мазка крови обращает на себя внимание обилие красных кровяных клеток – эритроцитов (1). Рассматривая эритроциты, можно отметить их своеобразную форму в виде диска с просветлением в центре и с темным ободком по периферии. В норме размеры, форма и окраска эритроцитов варьируют в небольших пределах. Значительно реже, чем эритроциты, в мазке крови встречаются ядросодержащие форменные элементы – лейкоциты. Для дифференцировки различных видов лейкоцитов необходимо обращать внимание на их размеры, форму ядра, отсутствие или наличие в цитоплазме зернистости, а также на величину и характер окраски гранул.

Чаще других встречаются нейтрофилы (2) и лимфоциты (3), реже – моноциты (4) и эозинофилы (5), очень редко – базофилы (6). В связи с этим нельзя ограничиться изучением мазка только в одном поле зрения – препарат должен быть изучен в 20-30 полях зрения микроскопа. При изучении рекомендуется также использовать демонстрационные препараты.

Кроме эритроцитов и лейкоцитов, в мазке крови выявляются кровяные пластинки (7). На препарате они имеют вид небольших телец неопределенной формы, часто склеивающихся друг с другом и образующих скопления. При зарисовке необходимо соблюдать соотношения размеров форменных элементов крови, особенности окраски их цитоплазмы, зернистости. Сделать обозначения.

6.1.3. Подсчет лейкоцитов с составлением лейкоцитарной формулы.

Подсчет лейкоцитов производится в мазке крови. Препарат следует установить при малом увеличении так, чтобы край мазка находился в центре поля зрения. Затем поднять тубус и нанести каплю иммерсионного масла на покровное стекло. Перевести револьвер на иммерсионный объектив (х90) и, глядя сбоку, опустить тубус до погружения объектива в масло. Окончательно сфокусировать изображение микровинтом.

Учитывая, что лейкоцитарная формула - это процентное соотношение разных видов лейкоцитов в периферической крови, расчет производится на 100 клеток этого ряда. При перемещении препарата будут встречаться лейкоциты разных видов. Все они должны быть опознаны и записаны в таблицу 1 (разлиновать ее в виде сетки: 10х10 клеток, итого 100 клеток). Запись можно производить первыми буквами названий лейкоцитов (Н, Э, Б, Л, М). Необходимо опознавать и учитывать все без исключения лейкоциты, иначе результат подсчета будет неверен. Необходимо учитывать, что клетки в мазке распределяются неравномерно: более крупные (моноциты, эозинофилы) чаще располагаются по периферии, более мелкие (лимфоциты, нейтрофилы) - в средней части мазка. Поэтому подсчет ведут ступенеобразно, передвигая препарат на 4-5 полей зрения по краю мазка сверху вниз, затем на 2-3 поля вглубь от края, потом — на 4-5 полей параллельно краю в направлении снизу вверх и т.д. Как только общее количество лейкоцитов достигнет 100, запись прекращают. В этом случае абсолютное количество разных видов лейкоцитов, полученное при подсчете, будет совпадать с их процентным выражением.

Результаты подсчета свести в таблицу 2 (в таблице для примера представлены нормальные показатели лейкоцитарной формулы взрослого человека):

	Гранулоциты				Агранулоциты
	Нейтро-филы п/я	Нейтро- филы с/я	Эозинофилы	Базофилы	Лимфоциты	Моноциты
Норм. показатели	1-6 %	47-72%	0,5-5%	0-1%	19-37%	3-11%
Результат исследования

Сравнить полученные данные с нормальными показателями (соответственно возрасту пациента) и сделать вывод.

При оценке полученной лейкоцитарной формулы рекомендуется использовать общепринятую терминологию. Так, увеличение общего количества лейкоцитов, а также отдельных их видов, характеризуют термином, включающим в себя окончание ... — цитоз (лейкоцитоз, лимфоцитоз, моноцитоз, нейтрофилез), либо ... — филия (эозинофилия, базофилия, нейтрофилия), уменьшение общего количества лейкоцитов и отдельных их видов обозначается терминами с использованием окончания ... - пения: лейко (цито) пения, лимфо (цито) пения, моноцитопения, нейтропения, эозинопения. Важным показателем является увеличение количества незрелых нейтрофилов — метамиелоцитов (юных), палочкоядерных нейтрофилов - “сдвиг лейкоцитарной формулы влево” (т.к. на лабораторном бланке молодые клетки принято помещать слева).

При анализе лейкоцитарной формулы и показателей гемограммы необходимо учитывать возрастные особенности. Так, после рождения процентное содержание нейтрофилов падает, а лимфоцитов — возрастает, выравниваясь к 4 суткам (1-й физиологический перекрест, около 45% тех и других), к 1-2 году жизни количество лимфоцитов достигает максимума, в 2 и более раза превышая показатели содержания нейтрофилов. Наступающее за этим уменьшение содержания лимфоцитов и возрастание нейтрофилов приводит к выравниванию обоих показателей в возрасте 4-5 лет (второй физиологический перекрест). К моменту полового созревания лейкоцитарная формула приближается к нормальным показателям взрослого человека (см. таблицу 2).