Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика Ку-лихорадки.
Для лабораторной диагностики этого риккетсиоза применяют серологический метод (РА, РСК), в некоторых случаях - непрямую РИФ, биологическую и кожно-аллергическую пробы.
Серологический метод является основным в лабораторной диагностике Ку-лихорадки. Серологические реакции (РА и РСК) для определения антител к Coxiella burnetii в парных пробах сыворотки крови больных Ку-лихорадкой ставят с антигенами I фазы (иммуногенный ЛПС) и II фазы (малоиммуногенный антиген) возбудителя. Диагностический титр 1:4.
Аллергодиагностика. Кожную аллергическую пробу проводят по обычной методике (0,1 мл аллергена внутрикожно), используя в качестве аллергена растворимый антиген из риккетсий Бернета I фазы, автоклавированную культуру коксиелл или ЛПС I фазы. Результаты пробы учитывают через 24-48 ч по наличию и размерам инфильтрата, гиперемии, отека. Проба специфична, но пригодна только для ретроспективной диагностики. У переболевших она остается положительной в течение 10 лет.
Биопроба - внутрибрюшинное или интратестикулярное (в толщу яичек) заражение исследуемым материалом морских свинок самцов, куриных эмбрионов в желточный мешок. Обнаружение риккетсий осуществляется в мазках-отпечатках внутренних органов, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Здродовскому. В настоящее биопроба в реальной практике не используется в связи с внедрением культур тканей для культивирования и выделения риккетсий.
Хламидии: общая характеристика, классификация; особенности физиологии, способы культивирования.
Хламидии представляют собой мелкие сферические организмы в диаметре 0,2-1,5 мкм, грамотрицательные. Клеточная стенка сходна по строению со стенками грамотрицательных бактерий, но лишена пептидогликана. Хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе в голубой или фиолетовый цвета. Споры не образуют, жгутики, капсулу не имеют. Внутриклеточно образуют микроколонии, окутанные капсулоподобным слоем – мантией, «хламидой» (от греч. сhlamydos – плащ). Размножаются бинарным делением. Могут образовывать L-формы и самопроизвольно возвращаться к исходным Хламидии выделены в самостоятельный порядок из-за уникального, отличающего их от всех прочих бактерий внутриклеточного цикла развития. Хламидии неспособны сами производить энергию, так как не имеют собственных митохондрий и живут за счёт энергии клетки хозяина, которую они инфицировали.
Жизненный цикл хламидий включает образование трех форм:
1. Элементарные тельца (ЭТ) – это зрелая форма, адаптированная к внеклеточному существованию, представляют собой небольшие частицы размером 0,2-0,4 мкм, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет. ЭТ высокоинфекционны, ответственны за процесс прикрепления к клетке-мишени и проникновение в неё, устойчивы к неблагоприятным факторам внешней среды. В клетке располагаются в межклеточном пространстве. Выполняют вирулентную функцию.
2. Ретикулярные тельца (РТ) (=инициальные тельца) – представляют собой внутриклеточные репродуктивные формы размером 0,8-1,5 мкм, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в голубоватый цвет. РТ мало инфекционны, являются формой обеспечения репродукции микроорганизма.
3. Созревание РТ в ЭТ происходит через переходные формы – промежуточные тельца.
Цикл развития условно можно разделить на несколько этапов:
1. Абсорбция элементарного тельца хламидий на чувствительной клетке хозяина.
2. Проникновение ЭТ в клетку путём эндоцитоза. Участки плазмолеммы с адсорбированными на них ЭТ инвагинируются в цитоплазму с образованием фагоцитарных вакуолей (этот этап занимает 7-10 часов).
3. Реорганизация элементарного тельца в РТ, способные к росту и делению (этот этап длится 6-8 часов).
4. Деление ретикулярного тельца. Эти внутриклеточные формы, представляющие собой микроколонии, называются хламидийными включениями – тельцами Гальберштедтера-Провацека. Во включении может содержаться от 100 до 500 РТ хламидий (длительность 18-24 часа).
5. Созревание РТ в ЭТ в течение 36-42 часов через переходные формы (промежуточные тельца).
6. Накопление ЭТ в эндосоме.
7. Выход ЭТ из клетки сопровождается гибелью клетки.
Продолжительность полного цикла составляет 48-72 часа. По прошествии этого времени начинается новый цикл.
Культуральные свойства.
По типу дыхания хламидии – это аэробы.
Хламидии являются облигатными внутриклеточными паразитами, поэтому не растут на питательных средах. Для культивирования используют:
клеточные культуры
заражение в желточный мешок куриных эмбрионов;
заражение лабораторных животных.
