17. Выделение чистой культуры бактерий.

По совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств делают вывод о видовой принадлежности выделенной чистой культуры бактерий. При необходимости изучают и другие признаки (факторы вирулентности, антигенную структуру, чувствительность к фагам и др.). В бактериологической практике установление вида возбудителя позволяет поставить диагноз заболевания, поэтому выделение и идентификация чистой культуры - это и есть бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний. Постановка этого метода обязательно включает и определение чувствительности выделенной чистой культуры возбудителя к антибиотикам (определение антибиотикограммы). Выделение чистой культуры анаэробных бактерий также осуществляется в три этапа. При этом также получают чистую культуру из одной клетки и добиваются роста микроорганизмов в виде изолированных колоний с последующим ее пересевом и идентификацией. Особенностью работы по выделению чистой культуры анаэробов является применение различных методов создания бескислородных условий (см. выше). Три этапа:

Первый день. Делают посев (земля, гной) на среду Китта-Тароцци.

Второй день: для получения колоний делают пересев со среды Китта-Тароцци по методу Цейсслера, методу Вейнберга и методу Перетца.

Третий день: колонии пересевают в пробирку с новой средой Китта-Тароцци для накопления чистой культуры; проводят идентификацию чистой культуры анаэробов по морфологическим, культуральным, тинкториальным, биохимическим и антигенным свойствам.

Посев по методу Цейсслера. Каплю (петлю) материала со среды Китта-Тароцци последовательно засевают в три чашки Петри с кровяным агаром. Посевы ставят в анаэростат или аппарат Аристовского, которые ставят в термостат. На следующий день на третьей чашке вырастают отдельные колонии. Делают пересев этих колоний на среду Китта-Тароцци для накопления чистой культуры, изучения ее свойств и точного определения вида микроорганизмов.

Посев по методу Вейнберга. Пастеровской пипеткой переносят материал со среды Китта-Тароцци последовательно в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, погружая пипетку в расплавленный агар до самого дна пробирки. Пробирки быстро охлаждают под холодной водой. Агар застывает и разобщает микробные клетки в глубине агара. Из этих клеток вырастают колонии, которые пересевают в новую среду Китта-Тароцци, накапливают чистую культуру и идентифицируют.

18. Пигменты микробов. Продукция микробами ароматических веществ, тепловой и световой энергии.

Пигменты бактерий – это специфические фоторецепторные молекулы, вторичные метаболиты, образующиеся на свету и придающие бактериям окраску.

Классификация пигментов по растворимости:

 жирорастворимые (каротиноидные, хиноновые, азахиноновые);

 водорастворимые (фенозиновые, пиразиновые)

– хромопарные (способны диффундировать в окружающую среду и окрашивать не только колонии, но и питательные среды);

 спирторастворимые (каротиноидные, пирроловые);

 нерастворимые ни в воде, ни в сильных кислотах (меланиновые).

Значение пигментов:

 защита от действия видимого света и УФ-лучей;

 ассимилируют углекислый газ;

 обезвреживают токсичные кислородные радикалы;

 участвуют в синтезе витаминов;

 обладают антибиотическим действием и свойствами биологически активных веществ;

 цвет пигмента используют в идентификации бактерий.