15.Особенности культивирования и выделения чистой культуры анаэробных бактерий. Методы создания анаэробиоза. Микроаэрофилы.

Методы культивирования анаэробов.

Необходимо понизить окислительно-восстановительный потенциал среды, создать условия анаэробиоза,т. е. пониженного содержания кислорода в среде и окружающем ее пространстве. Это достигается применением следующих методов:

I) Физические методы. Основаны на выращивании микроорганизмов в безвоздушной среде, что достигается:

1) Посевом в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества;

В качестве редуцирующих веществ обычно используют кусочки животных или растительных тканей , которые связывают растворенный в среде кислород и адсорбируют бактерии. Чтобы уменьшить содержание кислорода перед посевом среду кипятят 10—15 мин, а затем быстро охлаждают и заливают сверху небольшим количеством стерильного вазелинового масла

2) Посевом микроорганизмов в глубину плотных питательных сред;

Его производят по способу Виньяль — Вейона, который состоит в механической защите посевов анаэробов от кислорода воздуха. Берут стеклянную трубку. Один конец трубки вытягивают в капилляр в виде пастеровской пипетки, а у другого конца делают перетяжку. В оставшийся широкий конец трубки вставляют ватную пробку. В пробирки с расплавленным и охлажденным до 50°С питательным агаром засевают исследуемый материал. Затем насасывают засеянный агар в стерильные трубки Виньяль — Вейона. Капилляр¬ный конец трубки запаивают в пламени горелки и трубки помещают в термостат. Так создаются анаэробные условия.

3) Механическим удалением воздуха из сосудов, в которых выращиваются анаэробные микроорганизмы;

Его производят путем его механического откачивания из специальных приборов — анаэростатов, в которые помещают чашки с посевом анаэробов. Анаэростат представляет собой толстостенный металлический цилиндр с хорошо притертой крышкой, снабженный отводящим краном и вакуумметром.

4) Заменой воздуха в сосудах каким-либо индифферентным газом.

Заменяют воздуха индифферентным газом (азотом, водородом, аргоном, углекислым газом) можно производить в тех же анаэростатах путем вытеснения его газом из баллона.

II)Химические методы. Основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (анаэростате, эксикаторе) такими веществами, как пирогаллол или гидросульфит натрия Na2S204.

III)Биологические методы. Основаны на совместном выращивании анаэробов со строгими аэробами.

IV)Комбинированные методы. Основаны на сочетании физических, химических и биологических методов создания анаэробиоза.

Микроаэрофильный организм — микроорганизм, требующий, в отличие от строгих анаэробов, для своего роста присутствия кислорода в атмосфере или питательной среде, но в пониженных концентрациях . Это связано с наличием у них ферментов, кот-е инактивируются при контакте с сильными окислителями и активны только при низких значениях парциального давления кислорода