Билет №89 «Высокоэффективная жидкостная хромотография»

высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) осуществляется с использованием приборов - хроматографов. Форма проведения процесса - на колонках.В основе разделения веществ методом ВЭЖХ лежит обратимая сорбция вещества между жидкостью, подаваемой в колонку под высоким давлением, и твёрдой фазой колонки.

характеристики ВЭЖХ

ВЭЖХ

обратимая сорбция в системе жидкость - ТВ. сорбент

жидкость

твёрдый сорбент

20-50°С

растворяются в подвижной жидкой фазе

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является вариантом жидкостной колоночной хроматографии. Неподвижная фаза - твёрдый сорбент, подвижная – жидкость, подаваемая в колонку под повышенным давлением. Разделение компонентов смеси достигается за счёт различия в сродстве компонентов смеси к неподвижной и подвижной фазам. Основное требованиями в методе является растворимость исследуемых веществ в подвижной фазе, а также свойство удерживаться неподвижной фазой. Основными узлами хроматографа для ВЭЖХ являются: насос высокого давления для подачи подвижной фазы; устройство для ввода пробы (дозатор); хроматографическая колонка; детектор с регистрирующим устройством.

В качестве сорбента в ВЭЖХ обычно используют силикагель с гидро-ксилированной поверхностью или с привитыми к поверхности различными функциональными группами,

Принцип анализа в ВЭЖХ. Анализируемую смесь растворяют в подвижной фазе и с помощью дозатора или микрошприца вводят в специальное устройство прибора. на колонке происходит разделение смеси. Чем больше сродство компонента к неподвижной фазе и чем меньше к подвижной, тем медленнее он движется по колонке и тем дольше он в ней удерживается.Анализ проводится в определённом режиме температур, что создаётся с помощью устройства для термостатирования.Сорбент, состав подвижной фазы, скорость подачи подвижной фазы, давление, температурный режим, объём вводимой пробы устанавливаются для данной конкретной пробы. Наиболее распространёнными приборами в ВЭЖХ являются хроматографы серии "Милихром".

Характеристики детекторов для вэжх

Детектор	Измеряемое физическое свойство	Чувствительность, мг в пробе	Селективность
Фотометрический	Оптическая плотность при фиксированной длине волны	10-10	высокая
Спектрофото-метрический	Оптическая плотность при выбираемой длине волны	10-9	высокая
Рефрактометрический	Разность показателей преломления в сравнительной и измерительной ячейках	10-5	малая
Флуори-метрический	Интенсивность флуоресценции исследуемых веществ в подвижной фазе	10-11:	очень высокая
Амперо-метрический	Ток окисления или восстановления электрохимически активных соединений	10-9-10-11	очень высокая

Практическое применение в анализе

ВЭЖХ, как и предыдущие хроматографические методы, используется преимущественно при определении подлинности, испытании на чистоту и количественном определении средств и их форм.

Достоинства метода ВЭЖХ. Метод обладает такими существенными преимуществами, которые позволили ему выдвинуться на передовые позиции, как в отечественной аналитической практике, так и в развитых зарубежных страна. К несомненным достоинствам метода ВЭЖХ следует отнести:

- универсальность;

- высокая скорость процесса, позволяющая сократить анализ от нескольких часов до нескольких минут;

- высокая чувствительность и эффективность;

- возможность анализа термолабильных веществ;

- минимальная степень размывания пиков, что даёт возможность разделять соединения близкой химической структуры;

- высокая степень механизации и автоматизации разделения и обработки полученной информации;

- возможность использования в качестве подвижной фазы смеси растворителей, что позволяет варьировать её элюирующую способность;

- как и другие виды хроматографии, ВЭЖХ позволяет одновременно разделять и анализировать компоненты исследуемой смеси.

Билет №90