Лекции
.pdfЧувствительность ПЦР-анализа
•Аналитическая чувствительность представляет собой, то минимальное количество копий ДНК или РНК в одном миллилитре раствора образца, которое может быть определено данной тестсистемой.
•Диагностическая чувствительность оценивается в процентах и определяет количество пациентов с данным заболеванием, дающих истинно положительные результаты при использовании конкретного набора.
•
7
Специфичность ПЦР-анализа
•Диагностическая специфичность
определяемая процентом здоровых людей, имеющих истинно отрицательные результаты анализа.
•Аналитическая специфичность показывает отсутствие перекрестных реакций со сходными микроорганизмами или другими агентами.
8
Применение ПЦР в клинической лаборатории
Контаминация – попадание из внешней среды в реакционную смесь специфических молекул ДНК, способных служить мишенями в реакции амплификации и давать ложноположительные результаты.
ПЦР-лаборатория должна быть разделена на три зоны:
9
Автоанализатор (амплификатор)
Рисунок 5 – Автоанализатор Analytikjena |
10 |
Схема организации
детектирующего амплификатора
1) пробирки;
2 термоэлектрические (ТЭ) модули ; 3 ) радиатор; 4)зеркало;
5 ) источник света возбуждения флуоресценции; 6 )светофильтр источника возбуждения;
7) детектор излучения флуоресценции; 8 )светофильтр детектора; 9 )излученный
световой поток;
10)световой поток возбуждения; |
|
|
11)суммарный световой поток; |
11 |
|
12 )спектроделитель |
||
|
Автоанализатор (амплификатор)
Рисунок 6 - Структурная схема автоанализатора (амплификатора) 12
Обработка и представление данных артоанализатора ПЦР-анализа
Рисунок 7 - График зависимости флуоресценции меченой ДНК от цикла
ПЦР реакции. |
13 |
Вопросы
На какой стадии ПЦР-анализа происходит денатурация ДНК?
a)На стадии детектирования данных;
b)На первой стадии амплификации;
c)На второй стадии амплификации;
d)На стадии пробоотбора;
14
Вопросы
Во сколько раз увеличивается количество продукта в ходе ПЦР-анализа?
a)В 2 раза; b)В n раз;
c) Не изменяется; d)В 2n раз;
15