Лекции

Санкт-Петербургский государственный электротехнический университет «ЛЭТИ» им. В.И. Ульянова

(Ленина)

АВТОАНАЛИЗАТОР С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ

ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ

Метод молекулярной биологии, позволяющий создать копии определенного фрагмента ДНК из исходного образца, повысив его содержание в пробе на несколько порядков.

2

ИСТОРИЯ

МЕТОДА

ПРИНЦИП ПЦР

В основе работы

ПЦР – принцип

комплиментарно

сти азотистых

оснований ДНК

4

ТИПИЧНАЯ РЕАКЦИОННАЯ СМЕСЬ

•Анализируемая ДНК. ДНК служит матрицей для многократного копирования исследуемого участка.

•Праймеры. Праймер — это искусственно синтезированная короткая цепочка нуклеотидов (15–30 штук), комплементарная выбранному участку одной из цепей анализируемой ДНК.

•ДНК-полимераза. Фермент, строящий комплементарную матричной цепь ДНК. Обычно используют термостабильные полимеразы.

•Буфер. Раствор, содержащий различные ионы для поддержания необходимого рН, соли магния, необходимые для работы полимеразы, и не содержащий ионы детергент в сочетании бычьим сывороточным альбумином для предотвращения налипания компонентов реакции на стенки пробирки.

5

ЭТАПЫ ПЦР - АНАЛИЗА

1. Денатурация

Чтобы полимераза могла работать, две цепи ДНКматрицы нужно разъединить.

2. Отжиг праймеров

На этом этапе праймеры специфично присоединяются к освободившимся цепям ДНК-матрицы.

3. Элонгация, или синтез ДНК

В ходе реакции фермент ДНК-полимераза последовательно выстраивает цепь ДНК

6

ЭТАПЫ ПЦР - АНАЛИЗА

7

Зона детекции (при

использовании

электрофореза)