12. Стерилизация дробными методами. Режим стерилизации. Кипячение - режим; какие микробы погибают? Какие материалы подвергают кипячению?

Тиндализация, или дробная стерилизация, была предложена в 1877 г. Дж. Тиндалем. Она применяется для сред, портящихся при действии температур выше 100 °С. Тиндализацию осуществляют текучим паром в автоклаве с незавинченной крышкой или в кипятильнике Коха. Среды прогревают несколько раз по 10-15 мин. Между прогреванием среды ставят в термостат при температуре 30°С на 8-12 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды, не выдерживающие нагревания при 100°С, прогревают более осторожно: при 60-80°С через каждые 8-12 ч 4-5 сут подряд.

Однократный прогрев материала при температуре ниже 100 °С известен под названием пастеризация. Этот ме­тод, предложенный Пастером, пред­назначен для уничтожения только бес­споровых форм микроорганизмов. В подавляющем большин­стве случаев он не обеспечивает сте­рильности. Пастеризацию проводят при 60 — 80 °С в течение 10 — 30 мин.

Стерилизаторы и шкафы с электрическим обогревом снабжены тер­морегулятором, обеспечивающим автоматическое поддержание необходимой тем­пературы.

Подготовка посуды к стерилизации. Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Посуду развертывают непосредственно перед употреблением. В верх­ние концы пипеток вставляют ватные тампоны. Торчащие из пипеток волокна ваты сжигают в пламени горелки. Пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4 — 5 см. Обмотку начинают с оттянутого конца и постепен­ным движением бумаги по спирали заканчивают у конца с ватным тампоном. Завернутые пипетки для предохранения бумаги от загрязнения и разрывов перед стерилизацией упаковывают по несколько штук вместе или помещают в спе­циальные металлические или картонные пеналы. Чашки Петри обычно заворачивают в пакеты по 2 —4 штуки, шпатели — по отдельности, но затем, как и пипетки, их объединяют в общий сверток. Колбы, пробирки и трубки Бурри закрывают ватными пробками. На пробки можно надеть бумажные колпачки, предохраняющие горлышко от пыли.

Стерилизация. Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в сте­рилизатор (или сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого ма­териала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во время работы должен быть плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора необходимо строго следить за темпера­турой, так как при ее понижении не осуществится стерилизация, а при нагреве выше 180 °С бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилиза­ции шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80 °С, поскольку при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материа­ла, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Лучше всего выгружать посуду, когда температура в стерилизаторе сравняется с комнатной. Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла. Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации. В автоклаве посуда увлажняется.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ И ПРИБОРОВ Мелкие металлические инструменты: петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели — стерилизуют прокаливанием в пламени (т.е. нагреванием докрас­на) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно об­жигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливах сред. В пламени погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов.

При дробной стерилиза­ции объект нагревают текучим па­ром при 100° в течение 30 мин, затем раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 24 ч, после чего снова стерилизуют в тех же условиях (30 мин при 100°). Описанный цикл повторяют 3—5 раз. При первом нагревании погибают вегетативные формы микроорганизмов, при последующих — вновь появившиеся вегетативные формы. Вследствие длитель­ности этот способ в аптеках применяется редко.

Кипячение. Этим способом стерилизуют резиновые предметы, хирургический инструментарий, стеклянную посу­ду. Применять кипячение для стерилизации инъекционных растворов не рекомендуется, так как по эффективности оно значительно уступает стерилизации паром.

Кипячение - погибают только вегетативные формы бактерий, споры могут выживать; метод применяется для обработки игл, инструментов многоразового использования (кипячение в течение 30 минут с добавлением в воду 1% бикарбоната натрия), для обработки некоторых инъекционных растворов (не переносящих автоклавирования), которые до стерилизации должны отвечать очень высокому стандарту чистоты. Для стерилизации питательных сред этот метод не применяется.