- •1. Определение предмета микробиологии, отрасли, задачи медицинской микробиологии.
- •10. Микроскопия в тёмном поле зрения.
- •11. Люминесцентная микроскопия.
- •12. Фазово-контрастная микроскопия.
- •13. Электронная микроскопия.
- •14. Морфология бактерий. Место их среди микроорганизмов, основные формы, размеры.
- •Ультраструктура бактериальной клетки.
- •15. Приготовление и окраска препаратов-мазков.
- •16. Принцип и метод окраски по Граму в модификации Синёва.
- •17. Отношение бактерий к окраске по Граму. Различия между ними по строению клеточной стенки и по чувствительности к антибактериальным веществам.
- •Проведение анализа
- •Необязательные (непостоянные) структурные элементы.
- •20. Клеточная стенка, её строение, биологическая роль, способы обнаружения.
- •21. Цитоплазматическая мембрана, её строение, биологическая роль. Мезосомы.
- •Вспомогательные задачи
- •22. Споры бактерий, их биологическая роль, условия и время, необходимые для их образования и для прорастания спор в вегетативные формы. Способы обнаружения спор. Бактерии, образующие споры.
- •23. Капсула бактерий, её биологическая роль, способы обнаружения. Бактерии, образующие капсулы.
- •24. Включения бактериальной клетки, их биологическая роль, способы обнаружения. Практическое значение.
- •25. Жгутики бактерий, их биологическая роль, число и расположение, способы обнаружения.
- •26. Пили (ворсинки, фимбрии), локализация, типы, биологическая роль, способ обнаружения.
- •27. Микроскопические грибы: положение среди микроорганизмов, строение, способы размножения, группы грибов, имеющих практическое значение.
- •28. Дрожжеподобные грибы рода Candida.
- •29. Актиномицеты, их положение среди микроорганизмов, строение, значение в жизни человека.
- •2. Одновременно в спороносце образовываются поперечные перегородки по всей длине, происходит утолщение стенок и деление на 30-100 спор.
- •30. Спирохеты, их положение среди микроорганизмов, строение. Патогенные представители.
- •31. Простейшие, их положение среди микроорганизмов. Патогенные представители. Способ окраски.
- •32. Микоплазмы, их положение среди микроорганизмов, строение, сходство с l-формами и отличие.
- •34. Хламидии, их положение среди микроорганизмов, особенности морфологии, патогенные представители.
Проведение анализа
1. На фиксированный мазок наложить кусочек фильтровальной бумаги по размер препарата. Нанести небольшой избыток раствор фуксина Циля.
2. Внести предметное стекло с препаратом в небольшое пламя горелки и греть до появления паров. Стекло вынуть из пламени и дать слегка остыть.
3. Процедуру по Пункту 2. повторить еще 2 раза. Важно, процедуру прогрева проводить так, что бы к концу 3 раза фильтровальная бумага оставалась влажной!
4. Подогретый мазок оставить остывать на 5 минут для более полного окрашивания клеточной системы бактерий.
5. Снять фильтровальную бумагу и осторожно с обратной стороны стекла промыть водой до полного окончания отхождения фуксина.
6. Мазок поместить в солянокислый спирт или налить на поверхность стекла для обесцвечивания. Обесцвечивать до полного удаление краски (около 3 минут). Тщательно промыть дистиллированной водой.
7. Докрасить препарат путем нанесения на препарат раствора метиленового синего. Важно не перекрасить! Время окраски может занимать от 30 секунд до 1 минуты.
8. Стекло с препаратом промыть дистиллированной водой.
9. Высушить на открытом воздухе при комнатной температуре. Микроскопировать под масляной иммерсией.
19. Структурные элементы бактериальной клетки. Какие из них зависят от условий существования бактерий.
Обязательными структурными элементами бактерий являются: цитоплазма с нуклеоидом и рибосомами, цитоплазматическая мембрана (ЦПМ), клеточная стенка.
Цитоплазма прокариотов в отличие от эукариотов не содержит митохондрий и хлоропластов, аппарата Гольджи, лизосом, эндоплазматической сети. Нуклеоид выполняет в клетке бактерий функцию ядра, т.е. является носителем генетической информации, однако, в отличие от ядра эукариотической клетки, он не имеет ядерной мембраны, не делится митозом. Нуклеоид состоит из замкнутой в кольцо нити ДНК. В генетическом отношении ДНК нуклеоида является единственной бактериальной хромосомой. В связи с этим бактерии имеют гаплоидный набор генов, контролирующих все их жизненно важные функции. Органеллы цитоплазмы выявляются при электронной микроскопии.
Цитоплазматическая мембрана ограничивает снаружи цитоплазму и состоит из тонкого слоя фосфолипидов и белка. Функции ЦПМ: получение энергии в результате биологического окисления, участие в питании посредством активного транспорта веществ, участие в биосинтезе веществ, делении клетки. В состав ЦПМ входят окислительные ферменты, пермеазы, различные биосинтетические ферменты. ЦПМ выявляют при электронной микроскопии.
Клеточная стенка у Гр+ бактерии, как правило, содержит многослойный пептидокликан, который придает клеточной стенке прочность.
Клеточная стенка определяет форму бактерий, служит для механической защиты, участвует в питании за счет диффузии и осмоса. У Гр- бактерий клеточная стенка представлена тонким слоем пептидогликана, покрытого наружной мембраной, в состав которой входят белки, фосфолипиды и липополисахариды (ЛПС). Наружная мембрана клеточной стенки патогенных микробов во многом определяет специфичность их взаимодействия с организмом хозяина и помогает в распознавании близкородственных микробов. По компонентам и структуре клеточной стенки, биохимическим механизмам ее синтеза бактерии коренным образом отличаются от животных и растений. Поэтому лекарственные препараты, специфически воздействующие, например, на бактериальные стенки, безвредны для высших организмов. Клеточную стенку бактерий выявляют при электронной микроскопии, специальным окрашиванием или в опыте плазмолиза.