10. Микроскопия в тёмном поле зрения.

Темнопольная микроскопия основана на рассеивании света микроскопическими объектами, в т ч теми, размеры кот меньше предела разрешения светового микроскопа. Свет от осветителя и зеркала проходит через специальный темнопольный конденсор, кот формирует световой пучок в виде полого конуса и направляет его на объект наблюдения. Роль темнопольного конденсора в отраженном свете выполняет эллиптическое зеркало, одетое на оправу объектива. По выходе из конденсора основная часть лучей проходит мимо объектива (кот находится внутри этого конуса). Изображение в микроскопе формируется при помощи лишь небольшой части лучей, рассеянных микрочастицами объекта наблюдения внутрь конуса и прошедшими через объектив. Т о, в поле зрения на тёмном фоне видны светлые изображения элементов структуры объекта, отличающиеся от окр среды показателем преломления. Метод темного поля в отраженном свете чаще всего примен для изучения непрозрачных образцов, кот невозможно увидеть с помощью светлопольной микроскопии, например шлифы металлов. Кроме того, метод идеально подходит для контроля мелких дефектов на полупроводниковых пластинах, кот на изображении имеют вид ярких «вспышек».

11. Люминесцентная микроскопия.

Люминесцентная (флюоресцентная) микроскопия основана на способности некоторых в-в люминесцировать, т. е. светиться при освещении невидимым ультрафиолетовым или синим светом. Цвет люминесценции смещен в более длинноволновую часть спектра по сравнению с возбуждающим ее светом (правило Стокса). При возбуждении люминесценции синим светом цвет ее м б от зеленого до красного, если люминесценция возбуждается ультрафиолетовым излучением, то свечение м б в любой части видимого спектра. Эта особенность люминесценции позволяет, используя спец светофильтры, поглощающие возбуждающий свет, наблюдать сравнительно слабое люминесцентное свечение. Устройство люминесцентного микроскопа и правила работы с ним отличаются от обычного светового микроскопа в основном след: Наличие мощного источника света в осветителе, изучающего преимущественно в коротковолновой (ультрафиолетовой, синей) части спектра (ртутно-кварцевая лампа сверхвысокого давления или галогенная кварцевая лампа). Наличие системы светофильтров: возбуждающие светофильтры пропускают только ту часть спектра, кот возбуждает люминесценцию; *теплозащитный светофильтр защищает от перегрева другие светофильтры, препарат и оптику люминесцентного микроскопа. «запирающие» светофильтры расположены между окуляром. Эти светофильтры поглощают возбуждающее излучение и пропускают свет люминесценции от препарата к глазу наблюдателя. препарат освещают светом, падающим на него через объектив. Благодаря этому освещенность увелич при испол объектов, имеющих большую числовую апертуру, т. е. тех, кот испол для изучения микроорганизмов. Важную роль при этом способе освещения играет спец интерференционная светоделительная пластинка, направляющая свет в объектив. Она предст собой полупрозрачное зеркало, кот избирательно отражает и направляет в объектив часть спектра, кот возбуждает люминесценцию, а пропускает в окуляр свет люминесценции. Оптика объективов люминесцентного микроскопа изготавливается из нелюминесцирующих сортов оптического стекла и склеивается спец нелюминесцирующим клеем. При работе с объективами масляной иммерсии испол нелюминесцирующее иммерсионное масло. Поскольку большинство микроорганизмов не обладают собственной люминесценцией существует несколько способов их обработки для наблюдения в люминесцентном микроскопе. Прежде всего это флюорохромирование - окрашивание сильно разведенными (до нескольких микрограмм/мл) р-рами флюоресцирующих красителей (флюорохромов). Этот метод испол для бактериоскопического исслед возбуд некот инфекций: туберкулеза (ауромин),, включ в кл, образуемых некот вирусами и др. Этот же способ может применяться для цитохимического изучения живых и фиксированных микроорганизмов: некот флюорохромы избирательно связываются с полимерами кл(акридиновый оранжевый связываясь с ДНК флюоресцирует зеленым, а с РНК - красным. В реакции иммуннофлюоресценции с помощью антител, меченных флюорохромами (ФИТЦ и др.), выявляются антигены микроорганизмов или антитела в сыворотке больных.