12. Фазово-контрастная микроскопия.

Фазово-контрастная микроскопия в наст вр позволяет изучать живые организмы, объекты, кот попросту неразличимы для визуализации с применением обычного оптического (светового) микроскопа. когда необходимо исслед живого объекта, фазово-контрастная микроскопия явл неотъемлемой частью исслед. У фазово-контрастного микроскопа самый обыкновенный конденсор меняется на конденсор с кольцевой диафрагмой, а объектив представлен линзами с фазовой пластиной. Когда происходит сдвиг фаз волны, имеющей название электромагнитной, переходит в контраст интенсивности. Принцип фазово контрастной микроскопии: Свет от его источника проходит через исследуемые объекты, расположенные на предметном столике, рассеивается на 2 части: преломленный и непреломленный свет. Не преломленный свет данная фазовая пластина ослабляет, снижается его интенсивность. Преломленный же свет и вовсе не попадает на нее. Благодаря этому невидимые, неконтрастные микроорганизмы, незаметные при обычном микроскопировании в световом микроскопе, становятся высоко контрастными, и прекрасно визуализируются. Они могут наблюдаться темными на фоне светлого цвета, так называемый, позитивный фазовый контраст, а также, наоборот, негативный контраст, когда исследуемый объект выглядит светлым на темном фоне.

13. Электронная микроскопия.

В электронном микроскопе вместо света для построения изображения используют поток электронов в вакууме.

В качестве «линз», фокусирующих электроны, служит электромагнитное поле, создаваемое электромагнитными катушками. Изображение в электронном микроскопе наблюдают на флюоресцирующем экране и фотографируют. Объекты при электронной микроскопии находятся в глубоком вакууме, поэтому подвергаются фиксации и специальной обработке.

Кроме того, они д б очень тонкими, т к поток электронов сильно поглощается объектом. В связи с этим в качестве объектов используют ультратонкие срезы толщиной 20—50нм, помещенные на тончайшие пленки. Разрешающая микроскопов значительно выше чем световых и достигает 1,5А (0,15 нм), что позволяет получить полезное увеличение в миллионы раз.

Наиболее широко применяются просвечивающая (трансмиссивная) и сканирующая электронная микроскопия.

Просвечивающая электронная микроскопия применяется для изучения ультратонких срезов микробов, тканей, а также строения мелких объектов (вирусов, жгутиков. и др.), контрастированных фосфорно-вольфрамовой кислотой, уранилацетатом, напылением металлов в вакууме и др. Сканирующая электронная микроскопия применяется для изучения поверхности объектов.

14. Морфология бактерий. Место их среди микроорганизмов, основные формы, размеры.

Морфология бактерий – это раздел микробиологии, изучающий форму, размеры, строение бактерий и их взаимное расположение относительно друг друга.

Размеры бактерий измеряются в мкм и колеблются от 0,1 до 10 мкм; размеры отдельных клеточных структур – в нм.

Существуют 4 основные формы бактерий – шаровидные, палочковидные, извитые, ветвящиеся.

Шаровидные бактерии – кокки (coccus – зерно) имеют правильно сферическую или эллипсовидную форму, по расположению в мазке различают:

• микрококки (от греч. micros – малый) распределяются в мазке беспорядочно, по одному;

• диплококки (от греч. diplos – двойной ) – попарно;

• тетракокки – по 4;

• сарцины (от греч. sarcina – связка, тюк) – «пакетами» по 8, 16, 32 и более;

• стафилококки (от греч. staphyle – гроздь винограда) – в виде гроздьев винограда;

• стрептококки (от греч. streptos – цепочка) – в виде цепочки кокков.

Характер расположения в мазках зависит от особенностей деления бактериальных клеток в процессе размножения и наличием капсулы.

Палочковидные формы подразделяются на:

• бактерии (не образуют спор);

• бациллы (аэробные спорообразующие микроорганизмы);

• клостридии (спорообразующие анаэробы).

Палочки бывают короткими, длинными с закругленными и заостренными концами. По расположению в мазках выделяют:

• диплобактерии;

• стрептобактерии;

• располагающиеся беспорядочно.

Извитые бактерии делятся на:

• вибрионы – изогнутость тела не превышает четверти оборота спирали (холерный вибрион);

• спириллы и спирохеты – имеют по одному или несколько оборотов (например, возбудитель сифилиса), спирохеты отличаются от спирилл подвижностью.

Нитевидные формы (ветвящиеся) – это палочки с разветвлениями на одном или обоих концах (например, актиномицета).

Но размеры и форма бактерий могут изменяться под влиянием окружающей среды (состав питательной среды, ее pH, температура, лекарственные препараты и др.), а также в зависимости от возраста культуры.