2) Обнаружение антител.

Первый этап - адсорбция специ­фических антигенов на стенках лунки. Обычно в коммерческих систе­мах антигены уже адсорбированы на поверхности твердой фазы - в лунках или на пластиковых шариках.

Второй этап - добавление исследуемой сыворотки. При наличии антител образуется комплекс антиген-антитела.

Третий этап - после отмывания лунок добавляют антиглобулиновые антитела (антитела против глобулинов человека), меченные ферментом.

Результаты реакции учитывают, как указано выше.

В качестве контролей используют образцы заведомо положи­тельные и заведомо отрицательные.

Разрабатываются "безреагентные" системы для ИФА, в которых все компоненты реакции со­единены с поверхностью полимера. Для проведе­ния анализа необходимо внести исследуемый мате­риал и наблюдать измене­ние окраски.

ИФА применяется при многих инфекционных заболеваниях, в час­тности, при ВИЧ-инфекции, при вирусных гепати­тах.

74. Возбудитель сифилиса: название по-латыни, морфология, метод окраски, источник, механизмы и пути заражения, клинические проявления (периоды), материал для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для лечения.

Сифилис – это хроническое инфекционное венерическое заболевание, характеризующееся волнообразным течением – чередованием периодов клинического проявления болезни с длительными латентными периодами.

Таксономия.

Порядок – Spirochaetales

Семейство – Spirochaetaceae

Род – Тreponema (от греч. trepo – вращаться, nemo – нить) включает 10 видов

Вид – Тreponema pallidum

Подвид – pallidum

Морфология.

Имеют удлиненное штопорообразное извитое гибкое тело размером 0,09-0,5х5-20 мкм, первичные завитки (от 8 до 12), расположенные на равном расстоянии друг от друга. От каждого конца клетки отходят три периплазматических жгутика, обуславливающие плавное движение трепонемы. Спор и капсул не образуют, но при неблагоприятных условиях могут превращаться в цисты и L-формы.

Тинкториальные свойства.

Грамотрицательные, но плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому- Гимзе – в слабо-розовый цвет (от лат. pallidum – бледная), осуществляют метод серебрения по Морозову (окрашиваются в коричневый или почти черный цвет) и негативное контрастирование по Бурри, наиболее эффективное изучение в темнопольном или фазовоконтрастном микроскопе.

Культуральные свойства.

Микроаэрофилы (непатогенные трепонемы – строгие анаэробы), оптимальная температура – 35-37⁰С, рН 7,2. Бледную трепонему не культивируют на питательных средах, хотя при добавление к питательным средам почечной, мозговой ткани или асцитической жидкости на 3-5 сутки вырастают мелкие колонии, но “культуральные” штаммы трепонем изменяют свою морфологию (становятся более грубыми, короткими, полиморфными), утрачивают иммуногенность и патогенность. Трепонемы хорошо растут, не теряя своих иммунногеных и патогенных свойств в тестикулах кроликов, в куриных эмбрионах (“тканевые” штаммы), что используется для выделения и изучения возбудителя от больных.

Биохимические свойства.

Малоактивны: могут разлагать некоторые сахара (глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, маннит) с образованием кислоты, образуют индол и сероводород, разжижают желатин, восстанавливают нитрат серебра в металлическое серебро, что придает тканям черную или темно- коричневую окраску.

Антигенная структура.

Сложная, выделяют белковые, полисахаридные и липопротеидные антигены. Липопротеидные антигены являются перекрестно-реагирующими антигенами, идентичны липидам сердечной мышцы человека и крупного рогатого скота (быков).

Факторы патогенности.

Токсины – эндотоксин (ЛПС клеточной стенки).

Ферменты патогенности не выявлены;

Структурные и химические компоненты клетки: высокая подвижность за счет жгутиков, адгезины (белки наружной мембраны) и фактор, противостоящий фагоцитозу.

Эпидемиология.

Антропоноз. Введением заразного материала экспериментально удается воспроизвести сифилис у обезьян, кроликов и хомяков.

Источник инфекции – больной человек. Бактерионосительства при сифилисе не бывает.

Механизмы передачи инфекции:

• Контактный (пути – половой, непрямой контактный и трансфузионный);

• Вертикальный (путь – трансплацентарный).

Входные ворота: слизистые оболочки половых органов, ротовой полости, кожа с нарушением целостности и т.д.

Инкубационный период – 3-4 недели (21-24 дня, max 90 дней). Возбудитель размножается во входных воротах и регионарных лимфатических узлах.