Student TJ

Методы микробиологической диагностики холеры.

Хеликобактерии и кампилобактерии. Морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства.

Патогенность для человека и животных. Роль кампилобактерии в возникновении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

Микробиологическая диагностика, лечение, профилактика. Лабораторная диагностика иерсиниозов, лечение, профилактика.

Холера

Холера— острая антропонозная инфекционная болезнь, протекающая с развитием дегидратации и деминерализации в результате рвоты и водянистой диареи.

Таксономия и классификация

Царство: Procaryotae; Отдел: Gracilicutes; Семейство: Vibrionaceae; Роды: Vibrio, Aeromonos, Plesiomonos, Photobacterium.

Типовой род Vibrio, включает около 30 видов, из них 11 патогенных. Патогенные виды вызывают холеру (вид: Vibrio cholerae, биовары cholerae и eltor); их относят к О1 серогруппе (О139) и нехолерные вибрионы (не О1 серогруппа) вызывают острые кишечные заболевания с явлениями гастроэнтерита, иногда заболевания с некишечной локализацией.

Морфология.

Холерный вибрион имеет один полярный жгутик, часто напоминает запятую (запятая Коха). Важный диагностический признак - подвижность (определяют микроскопией по методу висячей или раздавленной капли). Морфологически изменчивы. Хорошо окрашиваются водным фуксином Пффейфера и карболовым фуксином Циля.

Биологические свойства

Хемоорганотрофы, факультативные анаэробы. Метаболизм бродильный и окислительный, лучше размножаются в аэробных условиях.

Растут на щелочных средах с оптимальным pH 7,8−8,6 (алкалифилы).

Среды для культивирования:

1.Элективные— 1% щелочная вода— нежная голубая пленка; щелочнойМПА— прозрачные уплощенные, мелкие голубоватые колонии, напоминающие капельки росы.

2.Дифференциально-элективные:

1)TCBS (тиосульфит-цитрат бромтимоловый сахарозный агар) — уплощенные, крупные желтые колонии;

2)TTGA (таурохолат-теллурит- желатиновый агар) — полупрозрачные сероватые колонии;

3)Среда Аронсона (прототип среды Эндо, но с сахарозой вместо лактозы)

— блестящие с красным центром и бледно-розовым ободком колонии.

3. Транспортные среды:

1) 1% щелочная ПВ с теллуритом калия (для подавления роста протея и некоторых других микроорганизмов).

Биохимические свойства.

Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты без газа многие углеводы (глюкозу, сахарозу, маннозу, маннит, лактозу, левулезу, гликоген, крахмал). В 1936 году Хейберг предложил биохимическую классификацию вибрионов, основанную на различном отношении вибрионов к трем углеводам (триада Хейберга): сахарозе, арабинозе и маннозе.Согласно этой классификации

Холерный вибрион разлагает желатин, казеин, свертывает молоко и разлагает белковые препараты до индола и аммиака.

Вид V.cholerae делят на биотипы, серогруппы и серовары.. Основные биотипы классический (V.cholerae asiaticae) и Эль - Тор (V.cholerae eltor). Серогруппы выделяют по структуре О- антигенов, в основной О1 группе холерных вибрионов выделяют серовары Огава, Инаба и Хикоджима.

Антигенная структура.

У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- антигены и термолабильные Н- антигены. По структуре О- антигенов выделено 139 серогрупп, биотипы Эль - Тор и классический объединены в 01 группу (типируются 01 - антисывороткой). Изоляты Эль - Тор отличаются гемолитическими свойствами (вызывают гемолиз эритроцитов барана), способностью агглютинировать куриные эритроциты, резистентности к полимиксину, чувствительности к фагам.

О- антиген 01 группы неоднороден и включает общий А- компонент и два типоспецифических - В и С. Соответственно их наличию серовар Огава имеет сочетание АВ, Инаба - АС, Хикоджима - АВС. Холерный вибрион может переходить из S- в R- форму, не агглютинироваться Осывороткой. В связи с антигенной структурой для идентификации V.cholerae используют О- сыворотку, ORсыворотку ( для выявления OR- и R- диссоциантов), типоспецифические сыворотки Инаба (С) и Огава (В). В 90- е годы выявлен новый серовар V.cholerae 0139, не агглютинирующийся вышеуказанными сыворотками, по остальным свойствам мало отличающийся от холерного вибриона 01 группы.

Не типируемые основной 01 сывороткой (т.е. не относящиеся к 01 группе) вибрионы называются неагглютинирующими (НАГ) вибрионамихолероподобными или парахолерными. Они имеют общий с холерным вибрионом Н- антиген, но отличаются по О- антигену.

По Н- антигену выделяют группы А и В, холерные вибрионы входят в группу А. Вирионы группы В (биохимически отличающиеся от холерных) имеют неоднородную структуру О- антигена и подразделяются на шесть серологических подгрупп.

Факторы патогенности холерного вибриона.

1.Подвижность (жгутики) и хемотаксис.

2.Ферменты способствуют адгезии и колонизации, взаимодействию с эпителиальными клеткамимуциназа (разжижает слизь), нейтаминидаза (взаимодействие с микроворсинками, создание посадочной площадки), лецитиназа и другие.

3.Эндотоксин - термостабильный липополисахарид, схожий по структуре и свойствам с другими эндотоксинами грамотрицательных бактерий.

4.Экзотоксин - холероген - главный фактор патогенности, термолабильный белок. Синтез холерогена - важнейшее, генетически детерминированное свойство холерного вибриона. Молекула холероге на состоит из двух фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептид А1 фрагмента

А. Молекула холерогена распознает рецептор энтероцита, проникает в мембрану клетки, активирует аденилатциклазную систему, накапливающийся циклический АМФ вызывает гиперсекрецию жидкости, Na+, HCO3-, K+, Cl- из энтероцитов. Это приводит к характерной для холеры диарее, обезвоживанию и обессоливанию организма.

5.У многих вибрионов, в т.ч. не относящихся к 01 группе, имеются различныеэнтеротоксины.

6.В патогенезе проявлений холеры имеет значение также фактор, повышающийпроницаемость капилляров.

Некоторые особенности эпидемиологии.

Холера - кишечная инфекция. Основной источник - человек (больной или вибрионоситель), загрязненная вода. Способ заражения - фекально - оральный. Индивидуальная восприимчивость к холере чрезвычайно вариабельна. Характерно большое количество скрытых (стертых) форм,

вибрионосительство. Обнаружение возбудителя в воде напрямую связано с наличием больных или бактерионосителей. Холерные вибрионы 01 группы могут длительно находиться в водных экосистемах в виде некультивируемых форм.

Патогенез

Миновав желудочный барьер, вибрионы попадают в тонкую кишку с благоприятной для них средой и заселяют (колонизируют) поверхность кишечного эпителия. Процесс колонизации включает в себя хемотаксис вибрионов к слою слизи, покрывающему верхушки ворсинок тонкой кишки, проникновение через эту слизь, адгезию к рецепторам на исчерченной каемке кишечных эпителиоцитов и размножение на поверхности эпителия ворсинок и крипт. У больных холерой возбудитель может быть обнаружен на всем протяжении желудочно-кишечного тракта. В желудке при рН не менее 5,5 вибрионы не обнаруживаются, в стуле их концентрация достигает 106—107.

Размножившись до определенной концентрации, возбудитель вызывает заболевание посредством вырабатываемого им холерогена. Основную роль в развитии болезни играют вибрионы, которые находятся в тесной связи со слизистой оболочкой тонкой кишки, так как они выделяют холероген в непосредственной близости от его рецепторов на эпителиальных клетках — ганглиозида GM1. После прикрепления холерного токсина к ганглиозиду субъединица А проходит через мембраны внутрь эпителиальной клетки, где происходит высвобождение фрагмента А1. Последний энзиматически расщепляет НАД и передает его АДФ-рибозную половину на регуляторный протеин аденилатциклазного комплекса, находящегося на внутренней стороне мембраны эпителиоцита. В результате происходит активация аденилатциклазы, приводящая к повышению содержания цАМФ — одного из внутриклеточных стимуляторов кишечной секреции. Связывание холерного токсина с рецепторами на эпителиальных клетках происходит чрезвычайно быстро (через 1—3 мин); биохимические изменения в клетке являются необратимыми.

Возникающее заболевание сопровождается потерей огромных количеств жидкости с низким содержанием белка и высокой концентрацией ионов натрия, калия, хлоридов, гидрокарбонатов. Эта жидкость по составу отличается как от экссудата, так и от транссудата и ближе к составу кишечного секрета.

Клинические особенности.

Инкубационный период при холере длится от 1 до 5 дней. Клинические проявления холеры весьма варьируют, и тяжесть клинического течения определяется степенью обезвоживания. Заболевание начинается обычно внезапно. Первым клинически выраженным признаком холеры является понос. Типичные холерные испражнения представляют собой водянистую, мутновато-беловатую жидкость с плавающими хлопьями, напоминают по внешнему виду рисовый отвар и не имеют запаха. Мышечная слабость и судороги в икроножных мышцах — ранние симптомы холеры. Вслед за жидким стулом появляется обильная повторная рвота, быстро приводящая к декомпенсированному эксикозу. Кожные

покровы становятся цианотичными, холодными на ощупь, черты лица заостряются, глаза и щеки западают. Кожа кистей рук морщинистая («руки прачки»), голос сиплый, вплоть до афонии. У больных с тяжелой формой холеры отмечается гипо-термия. Из-за ее постоянства терминальная форма холеры (IV степень дегидратации) получила название «алгидная». Алгид (декомпенсированное обезвоживание) сопровождается нарушением деятельности основных систем организма — сердечнососудистой, дыхательной, мочевыделительной.

Лабораторная диагностика.

Холера относится к группе особо опасных инфекций, культивирование ее возбудителя требует соблюдения особого режима биологической безопасности. Основной метод диагностики - бактериологический, включает выделение и идентификацию возбудителя.

Материал для исследования - испражнения и рвотные массы, секционные материалы от погибших, пробы воды и смывы с объектов окружающей среды, пищевые остатки. Материал для исследований следует доставлять в лабораторию не позже 2 часов после забора, так как возбудитель быстро погибает. При невозможности срочной доставки образцы помещают в транспортные среды.

Для посева используют жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально - диагностические среды (лучше TCBS). В качестве транспортной среды наиболее удобна 1% пептонная вода. Подозрительные стекловидные прозрачные колонии пересевают для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, подвижности, антигенным свойствам, фаготипируют.

Для ускоренной диагностики применяют иммунолюминесцентный метод, биохимическую идентификацию с набором индикаторных дисков, для обнаружения холерных вибрионов в первичных материалах - РНГА с антительным диагностикумом, для выявления некультивируемых форм - ПЦР, для определения вирулентности и синтеза холерогена - биопробы на кроликах - сосунках, ИФА, ДНКзонды (выявление фрагмента хромосомы, несущего оперон холерогена).

Иммунитет

Постинфекционный иммунитет длительный, антимикробный и антитоксический. Повторные заболевания наблюдаются редко. Лечение проводится в 2-х направлениях:

1.восполнение потерь жидкости и электролитов введением изотонических, апирогенных солевых растворов, плазмозаменяющих жидкостей внутривенно или per os;

2.антимикробная терапия (антибиотики широкого спектра действия: тетрациклины, хлорамфеникол, фторхинолоны).

Профилактика

Мероприятия с целью профилактики холеры осуществляются на общегосударственном уровне. Важны качественное водоснабжение, обеззараживание всех канализационных вод, строгое соблюдение санитарно – гигиенических норм на предприятиях торговли, общественного питания, рынках, а также на предприятиях пищевой и молочной промышленности. Особое внимание уделяется лицам, прибывшим из местностей, неблагополучных по холере. Они должны наблюдаться в течение 5 дней в кабинетах инфекционных заболеваний поликлиник и обследоваться бактериологически.

Сцелью специфической профилактики применяют комплексный препарат из холероген-анатоксина (70%) и химического О-антигена (30%) обоих се-роваров и биоваров Огава и Инаба, который вызывает выработку вибрионоцидных антител и антитоксинов высоких титров. Поствакцинальный иммунитет кратковременный (4 – 6 месяцев). По эпидемиологическим показаниям в неблагополучных по холере местностях осуществляется ревакцинация не ранее, чем через 3 месяца после первичной вакцинации. Прививки производят безигольным инъектором в дозе 8 мл препарата для взрослых. В настоящее время имеются следующие пероральные противохолерные вакцины:

Вакцина WC/rBS – состоит из убитых целых клеток V. Cholerae 01 с очищенной рекомбинантной В – субъединицей холерного анатоксина (WC/rBS) – предоставляет 85 – 90 – процентную защиту во всех возрастных группах в течение шести месяцев после приема двух доз с недельным перерывом.

Модифицированная вакцина WC/rBS – не содержит рекомбинантной В – субъединицы. Необходимо принимать две дозы этой вакцины с недельным перерывом. Вакцина лицензирована только во Вьетнаме.

Вакцина CVD 103 – HgR – состоит из ослабленных живых оральных генетически модифицированных штаммов V. Cholerae 01 (CVD 103 – HgR). Однократная доза вакцины предоставляет защиту от V. Cholerae на высоком уровне (95%). Через три месяца после приема вакцины защита от V. Cholerae El Tor была на уровне 65%.

Хеликобактеры

Хеликобактеры – короткие, S-образно изогнутые бактерии. Средние размеры – 2,54×0,5 мкм; подвижны (лофотрихи); жгутиков обычно 4-5, они часто покрыты чехликами и имеют колбовидные утолщения на концах. Первые штаммы хеликобактеров были выделены в Австралии в 1982 году. Род Helicobacter включает H.pylori, H.fennelliae, H.cinaedi и H.mustelae. Первые три вида способны вызвать поражения у человека.

Культуральные свойства. Оптимальная температура 37˚С. Наиболее оптимальные среды – кровяной и шоколадный агары. На твердых средах через 4872 часа образую мелкие (около 1 мм) прозрачные блестящие колонии, содержащие бактерии с характерной морфологией. В жидких средах образуют голубовато-серую поверхностную пленку и незначительное помутнение среды.

Биохимические свойства. Хеликобактеры оксидаза- и каталаза-положительны; проявляют уреазную, транспептидазную и фосфатазную активности; образуют сероводород; не восстанавливают нитраты; не свертывают молоко; не ферментируют глюкозу.

Антигенная структура. У хеликобактеров выделены О-, Н- и поверхностные белковые антигены, определяющие типоспецифичность.

Эпидемиология. Хеликобактериоз относится к антропонозам. Источником инфекции является человек - больной с манифестной или бессимптомной формой заболевания. Наибольшее число источников инфекции встречается в возрастной группе после 60 лет. В этой группе более 50% населения может быть инфицировано хеликобактером.

Несмотря на то, что предполагаемым механизмом передачи является фекальнооральный, обнаружить возбудитель в фекалиях, как правило, не удается. Вместе с тем имеются убедительные доказательства в пользу орально-орального способа передачи инфекции. Установлено, что предварительное пережевывание пищи больной матерью для своего ребенка резко повышает риск его инфицирования. Хеликобактер был выделен из налета на зубах детей, страдающих рецидивирующей формой хеликобактериозного гастрита. Реализация перорального инфицирования может происходить пищевым, водным и контактнобытовым путем. Учитывая, что обострения хронических заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки хеликобактериозной этиологии возникают весной и осенью, можно предполагать усиление передачи возбудителя в эти сезоны.

Патогенез. После проникновения в желудок инфицирующей дозы возбудителя (104-109 клеток) происходит его адгезия к клеткам желудочного эпителия с максимальной

концентрацией в области межклеточных промежутков. Последнее, вероятно, обусловлено хемотаксисом бактерий к местам выхода мочевины и гемина, которые используются для жизнедеятельности микробов. Расщепляемая уреазой бактерий мочевина превращается в аммиак и углекислый газ, которые создают вокруг колоний микробов защитный слой, предохраняющий их от неблагоприятного рН в желудке. Вместе с тем аммиак является одним из факторов, повреждающих слизисто-бикарбонатный барьер и слизистую оболочку желудка. К другим повреждающим желудочный

эпителий факторам относятся цитотоксин и целый ряд выделяемых бактериями высокоактивных ферментов.

Жизнедеятельность хеликобактеров исключительно связана лишь эпителием желудочного типа. Поэтому патология двенадцатиперстной кишки (или других отделов кишечника и пищевода), обусловленная хеликобактером, возможна лишь при наличии метаплазии желудочного типа в двенадцатиперстной кишке (или других отделах желудочно-кишечного тракта).

После адгезии хеликобактеров к эпителию желудочного типа может возникнуть 2 варианта течения инфекционного процесса.

Первый - первичная потенция возбудителя, при которой отсутствуют клинические проявления заболевания, однако возможно обнаружение минимально выраженных морфологических изменений слизистой оболочки. Следствием этого является бессимптомное течение, сопровождающееся бактериовыделением, а в случаях развития выраженного иммунодефицита - возникновение симптомов хронического гастрита.

Второй - острый гастрит, сопровождающийся клинической симптоматикой и характерной морфологией. Отмечается инфильтрация слизистой оболочки желудка полисегментоядерными лейкоцитами и макрофагами, которые фагоцитируют часть хеликобактеров. Следствием этого является выделение макрофагами медиаторов иммунного ответа: фактора некроза опухоли, интерлейкина-1, цитокиназы. Воздействие их на систему простагландинсинтетаза - простагландины способствует усилению воспалительной реакции.

После стихания острых явлений, как правило, развивается хроническая форма гастрита. В этом случае слизистая оболочка желудка преимущественно инфильтрирована лимфоцитами. Наибольшие морфологические изменения обнаруживаются в антральной части желудка.

Таким образом, хеликобактеры являются основными этиопатогенетическими факторами в развитии хронического антрального гастрита (хронический гастрит типа В).

Клинические проявления. Общепринятой клинической классификации хеликобактериоза нет. На основании изученных клинико-патогенетических закономерностей можно выделить следующие его формы: острый гастрит (гастродуоденит);

1.хронический антральный гастрит (гастродуоденит);

2.язвенная болезнь желудка;

3.язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки;

4.редкие формы хеликобактериоза (хеликобактериозный эзофагит; энтерит, проктит и т.д.), обусловленные гетеротопией эпителия желудочного типа и обычно сопровождающие патологию типичной локализации; 5. бессимптомная форма.

Клиника хеликобактериозной инфекции не имеет каких-либо особенностей, отличающих ее от других острых и хронических заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки.

Среди многочисленных осложнений заболевания встречаются кровотечение, перфорация и пенетрация язв, рубцовая деформация двенадцатиперстной кишки, пилоростеноз и др.

Обострения хеликобактериозной инфекции редких локализаций (пищевод, тонкий и толстый кишечник) обычно сопровождают обострения патологии основной локализации. При этом воспалительный процесс в пищеводе проявляется дисфагией, в кишечнике - наклонностью к диарее, метеоризмом и флатуленцией.

Возможно также бессимптомное течение хеликобактериоза, которое подтверждается лишь обнаружением возбудителя в слизистой оболочке желудка. Максимальная продолжительность бактерионосительства в этом случае не установлена. Вместе с тем очевидно, что и данный вариант хеликобактериозной инфекции может приобрести манифестный характер, трансформировавшись в

хронический гастрит (гастродуоденит) при возникновении в организме бактерионосителя тяжелого иммунодефицита.

Прогноз для жизни благоприятный. Летальность в основном связана с осложненными формами язвенной болезни. Прогноз в отношении трудоспособности не всегда удовлетворителен. Диагностика. Верификация клинического диагноза возможна с помощью прямых и косвенных инвазивных и неинвазивных методов. Используемые для этого тесты могут быть объединены в шесть основных групп.

I. Бактериологические:

1)обнаружение бактерий в мазках-отпечатках (темнопольная микроскопия,иммунофлюоресценция);

2)выделение культуры хеликобактера. Материалом для исследований служатбиоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Для получения чистых культур применяют кровяные среды (5-17% эритроцитов), дополненные антибиотиками. На 5-7 сутки культивирования в микроаэрофильных условиях при температуре 37˚С наблюдается видимый рост. Рост хеликобактеров отсутствует при температуре 25˚ и 42˚С в аэробных и анаэробных условиях.

II. Иммунохимические (серологические): обнаружение антител к возбудителю методами ИФА, ИБ, РСК, РНГА, РАЛ.

III. Морфологические: выявление хеликобактеров в биоптатах при окраске препаратов по Романовскому - Гимзе, по Граму, акридиновым оранжевым или серебрением по Уортину - Стерри.

IV. Биохимические: 1) уреазный тест с биоптатами (CLO-test); 2) аэротест, при котором в выдыхаемом воздухе определяется содержание аммиака; 3) каталазная активность; 4) оксидазная активность.

V. Изотопные: 1) проводится анализ содержания в выдыхаемом воздухе количества С13 или С14 после принятия пациентом внутрь мочевины, предварительно меченой указанными изотопами; 2) концентрацию N15, которым метят мочевину, определяют в моче.

VI. Молекулярно-генетические: 1) полимеразная цепная реакция (ПЦР), в т.ч., что особенно удобно, в слюне; 2) реакция молекулярной гибридизации.

Профилактика. Учитывая широкое распространение хеликобактериоза в семейных очагах, необходимо не только тщательное соблюдение санитарногигиенических мероприятий в семье для профилактики заболевания у всех ее членов, но и проведение у них в части случаев эрадикации возбудителя.

Лечение. В этиотропной терапии острого и обострении хронического антрального гастрита используются трихопол (метронидазол) по 0,25-0,5 г 3 раза в день и тинидазол (фазижин) по 0,5г 2 раза в день. Длительность курса – 10-14 дней. В лечении язвенной болезни желудка препаратом выбора является коллоидный субцитрат висмута (де-нол, трибимол и др.), который назначается в дозе 120 мг 4 раза в сутки. Длительность курса - 1-2 мес.

Для эрадикации возбудителя болезни более эффективна комбинация де-нола с трихополом (или тинидазолом) и амоксициллином (0,5 г 4 раза в сутки) или аугментином, а также кларитромицином, обеспечивающая более чем у 95% пациентов освобождение организма от хеликобактера.

Кампилобактериоз

Кампилобактериоз (лат. campylobacteriosis) — острое инфекционное зоонозное заболевание, характеризуется синдромом общей интоксикации, поражением желудочно-кишечного тракта и возможностью генерализации патологического процесса.

Возбудитель заболевания впервые был идентифицирован в 1909 году. Причиной болезни считались заболевания домашних животных,

сопровождающихся выкидышами. Впервые эти микроорганизмы были выделены от людей Р.Винцентом в 1947 году.

Классификация

Семейство: Spirillaceae Род: Campylobacter.

Всего выделено и описано 15 видов. Не менее 9 видов патогенных для человека. Ведущими видами в патологии человека являются:

1.C. jejuni,

2.C. coli

3.C. lari,

4.C. fetus subspecies fetus

Морфология. Кампилобактерии (греч. kampylos — изогнутый, bakterion — палочка) — полиморфные, подвижные, грамотрицательные микробы, легко окрашивающиеся всеми анилиновыми красками и по Романовскому-Гимзе. В мазках из патологического материала имеют вид запятой, летящей чайки, буквы S или спирали с одним или несколькими завитками. Спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства. Для кампилобактеров нужны специальные газовые смеси для создания микроаэрофильных условий, рН - 7,0-7,2, мезофильные условия (+420С - для термофилов, +370С - для остальных). Используют специальные питательные среды (мясные, печеночные, кровяные) с добавлением селективных антибиотиков. Для получения более чистых проб для посевов (чаще исследуют копрофильтраты!) можно использовать фильтрацию через мембранные фильтры с диаметром пор 0,65 мкм. На плотных средах образуют два типа колоний - “расползающиеся” с неровными краями или блестящие выпуклые с ровными краями, колонии мелкие.

Биохимические свойства. Инертны к углеводам, редуцируют нитраты, оксидаза положительны, энергию получают за счет аминокислот и трикарбоновых кислот. Дифференциация видов по биохимическим свойствам основана на гидролизе гиппурата (C.jejuni и C.coli), чувствительности к налидиксовой кислоте (C.jejuni и C.lari), образовании сероводорода и др.

Антигенная структура. Кампилобактеры имеют О- , Н- и К- антигены. Основное значение для серотипирования имеют термостабильные О- антигены.

Эпидемиологические особенности. Кампилобактеры распространены у различных видов млекопитающих и птиц. Основной путь передачи - пищевой. Характерна преимущественно летняя сезонность.

Основные патогенетические факторы. Кампилобактеры характеризуются высокой адгезивной и инвазивной активностью, быстрой колонизацией верхних отделов тонкого кишечника. Важнейшими факторами адгезии являются жгутики и специфические поверхностные адгезины. У этих бактерий имеется эндотоксин, термолабильный энтеротоксин. По механизму действия термолабильный энтеротоксин напоминает термолабильные диареегенные токсины эшерихий и холерного вибриона, повышая уровень внутриклеточного цАМФ.

Патогенез. Возбудитель попадает в организм преимущественно через желудочнокишечный тракт при алиментарном заражении. Инфицирующая доза зависит от индивидуальной чувствительности. Кампилобактер вначале прикрепляется к поверхности энтероцитов, затем при помощи жгутика повреждает клеточную мембрану и оказывается внутри клетки. Довольно быстро проникает в кровь. Бактериемия наблюдается не только при острой форме, но и при хронически протекающих заболеваниях желудка. В частности, у больных язвой желудка Helicobacter pylori обнаруживался в крови у 75%, у больных хроническим гастритом бактериемия выявлялась несколько реже (у 50%). На месте ворот инфекции развиваются воспалительные изменения. При проникновении микробов в кровь высвобождается токсин, который обусловливает развитие общей интоксикации. Гематогенно

обсеменяются многие органы и ткани. У беременных женщин отмечается трансплацентарная передача инфекции, что приводит к абортам и внутриутробному заражению детей. У ослабленных людей заболевание принимает септическое течение с формированием вторичных очагов в различных органах (эндокардиты, менингиты, энцефалиты, перитонит и др.). Подобное течение кампилобактериоза наблюдается на фоне цирроза печени, алкоголизма, при кахексии, а также у новорожденных и престарелых. Обильная рвота и понос могут приводить к дегидратации, гиповолемическому шоку. У лиц с хорошо функционирующей иммунной системой заражение не сопровождается клинически выраженными проявлениями (субклиническая форма, здоровое бактерионосительство).

Клиника. Инкубационный период продолжается от 1 до 6 дней (чаще 1-2 дня). По клиническому течению выделяют следующие формы кампилобактериоза: 1) гастроинтестинальную; 2) генерализованную (септическую); 3) субклиническую; 4) хроническую. Хронический гастрит и язва желудка, которые этиологически связывают с кампилобактериозом, изучаются терапевтамигастроэнтерологами и нет необходимости рассматривать их как инфекционные болезни.

Чаще наблюдается гастроинтестинальная форма. Среди диарейных заболеваний у детей удельный вес кампилобактериоза колеблется от 3 до 30%. Заболевание чаще встречается у детей первого года жизни. Наблюдаются эти формы и у взрослых как в виде спорадических случаев, так и в виде вспышек. Заболевание начинается остро. Появляется лихорадка, симптомы общей интоксикации и синдром гастроэнтерита. Больные жалуются на тошноту, боли в эпигастральной области, нередко рвоту. Стул обильный, жидкий, пенистый, примеси слизи и крови у взрослых обычно не отмечается. Могут развиться симптомы обезвоживания (сухость кожи и слизистых оболочек, олигурия, у отдельных больных кратковременные судороги). У детей лихорадка и симптомы общей интоксикации более выражены, в стуле могут отмечаться примеси слизи и крови, чаще развивается обезвоживание.

Генерализованная (септическая) форма чаще наблюдается у детей первых месяцев жизни, реже у ослабленных взрослых. Заболевание характеризуется выраженной лихорадкой, большими суточными размахами температуры, истощением, снижением массы тела, анемией. Заболевание протекает в виде сепсиса с бактериемией, множественными органными поражениями. Часто отмечается рвота, понос, обезвоживание, увеличение печени. На этом фоне развиваются пневмония, перитонит, абсцессы печени, головного мозга. Микроабсцессы наблюдаются также в почках, миокарде. У отдельных больных развивается тромбогеморрагический синдром, до степени диссеминированного внутрисосудистого свертывания. Может развиться также инфекционнотоксический шок.

Субклиническая (инаппарантная, бессимптомная) форма кампилобактериоза выявляется обычно в очаге при обследовании здоровых людей. Характеризуется выделением возбудителей из испражнений и нарастанием титра специфических антител в сыворотке крови.

Хронические формы кампилобактериоза являются первично-хроническими, т. е. с самого начала принимают вялое хроническое течение (без острой фазы болезни). Отмечается длительный, обычно волнообразный, субфебрилитет. Больные жалуются на слабость, плохой аппетит, раздражительность, нарушение сна, снижение массы тела. На этом фоне у отдельных больных появляются тошнота, иногда рвота, кратковременное послабление стула, чередующееся с запорами. Наблюдаются конъюнктивит, кератит, иногда фарингит. У женщин часто развивается вагинит, вульвовагинит, эндоцервицит, возможно бесплодие. Реже (на фоне вяло текущей инфекции) отмечаются артрит, тромбофлебит, эндокардит, перикардит, эмпиема плевры. Иногда во время очередного обострения появляются признаки менингита (серозного или гнойного). По течению хронический кампилобактериоз может напоминать сепсис.

Лабораторная диагностика. Микроскопический метод - окраска 1% водным раствором основного фуксина 1020 секунд - выявляют S- образные короткие цепочки, “крылья чайки”. Основной метод - бактериологический - посев испражнений. Культуры идентифицируют по совокупности признаков.

Иерсиниозы

Иерсиниозы — зооантропонозные заболевания. Резервуар —различные грызуны, которые выделяют бактерии с фекалиями и мочой. Путь заражения алиментарный.

Заболевания регистрируются в виде вспышек или спорадических случаев.

Род Yersinia содержит семь видов, из которых патогенными для человека являются Y. Pestis (возбудитель чумы), Y. pseudotuberculesis(возбудитель псевдотуберкулеза), Y. enterocolitica— воз-будитель острых кишечных инфекций, кишечного иерсиниоза.

Морфология и культуральные свойства

Грамотрицательные палочки длиной1–3 мкм и шириной 0, 5–0, 8 мкм без спор и капсул. При температуре ниже30°С(во внешней среде) подвижны(за счет перитрихиально расположенных жгутиков), при37° С(в организме человека) жгутики не образуют и неподвижны.

Иерсинии— это гетеротрофные факультативно-анаэробные микроорганизмы с психрофильными и олиготрофными свойствами. Они растут на простых питательных средах. Через24 ч образуют на агаре прозрачные или полупрозрачные колонии диаметром0,1–1,0 мм. Температурный оптимум роста— 28–29° С(но могут расти в широком диапазоне температур— от0°С до45° С); оптимум рН— 7,6–7,9, диапазон рН— 4,6–9,0. На среде Эндо через сутки колонии имеют диаметр0,1−0,2 мм, круглые, выпуклые, блестящие, с ровными краями, бесцветны(не ферментируют лактозу), через несколько суток размер колоний0,5−3 мм. Благодаря психрофильности иерсинии способны расти и активно размножаться при низких температурах(в том числе от0°С до+4° С). Иерсинии— олиготрофные микроорганизмы: для роста и размножения достаточен минимум питательных веществ. Культуральные особенности иерсиний позволяют им накапливаться в воде, пищевых продуктах, сохраняемых в условиях бытового холодильника.

Биохимические и антигенные свойства. Оксидазоотрицательные,

каталазоположительные. Ферментируют глюкозу и другие углеводы до кислоты без образования(или с небольшим количеством) газа. Фенотипические характеристики проявляются у культур, инкубированных при 25–29° С, но не при35–37°С. Имеют О- и К-антигены, а при температуре инкубирования ниже 30°С— Н-антиген. Y.enterocolitica по О-антигенам разделяется на34 серотипа. От больных иерсиниозом чаще всего выделяют штаммы серотипов О:3 и О:9. Главным резервуаром патогенных для человекаY. enterocolitica серотипов О3 и О9 являются свиньи. Наиболее частыми путями заражения являются пищевой и водный (употребление овощных салатов, свинины, молочных продуктов, морепродуктов, инфицированной воды).

Биологические свойства иерсиний отличаются от свойств других энтеробактерий. Для них характерен ряд температурозависимых признаков, которые по-разному проявляются при температуре37° С и ниже30° С.

Патогенез и клинические проявления иерсиниозной инфекции Проникнув в организм алиментарным

незавершенный) и с макрофагами может распространяться по организму, формируя очаги инфекции в различных органах и тканях. У возбудителя имеются перекрестнореагирующие антигены, поэтому заболевание сопровождается инфекционно-аллергическими реакциями. Размножение иерсиний в

Инкубационный период при иерсиниозе составляет4–7 дней. Основными клиническими формами иерсиниоза и псевдотуберкулеза являются энтероколит, острый мезентериальный лимфаденит, часто в сочетании с терминальным илеитом(«псевдоаппендицит»).

Диагностика

При бактериологическом методе исследуемый материал от больного (испражнения, кишечные биоптаты, лимфоузлы или ткань удаленного аппендикса, кровь, слизь из зева), а также подозрительные продукты или воду засевают на среды Эндо, Плоскирева, Серова (индикаторную и дифференциальную) и инкубируют при 37°С в течение 48−72 ч. Подозрительные колонии (мелкие бесцветные на средах Эндо и Плоскирева и окрашенные колонии двух различных форм на средах Серова) пересевают для получения чистых культур, которые идентифицируют по биохимическим признакам и окончательно типируют с помощью диагностических агглютинирующих сывороток. Для

особенностей иммунного ответа. Более информативным может быть выявление антител (IgG, IgA, IgM) к«антигенам вирулентности» иерсиний, например, в ИФА или методом иммуноблотинга. Для обнаружения патогенных иерсиний в клиническом материале или пищевых продуктах используются методы генодиагностики(ДНК-гибридизация, полимеразная цепная реакция).

Лечение и профилактика

Возбудители иерсиниоза, как правило, проявляют чувствительность к большинству антибиотиков, используемых в отношении представителей семейства Enterobacteriaceae . Профилактические мероприятия направлены на предотвращении контаминации патогенными иерсиниями пищевых продуктов, особенно подлежащих длительному хранению. Специфическая профилактика не проводится.