2.2. Сем. Нейссерии

Известная среда для выделения патогенных нейссерии, со­держащая питательную основу, сыворотку крови, агар-агар и во­ду (Лабинская А. С, 1972), не обеспечивает высоких ростовых свойств (Гаджиева А. Г. и соавт., 1982). Последние авторы для этих целей дополнительно вводят в среду аммониевую соль

5,5 дибром-о-крезолсульфофталеина, а в качестве питательной основы используют казеиново-дрожжевой гидролизат.

West S. et al. (1985) изучали потребление железа патогенными нейссериями (N.gonorrhoeaeи N.meningitidis) и по результатам опытов высказали предположение, что экспрессированные у же-лезодефицитных мутантов белки наружной мембраны могут яв­ляться рецепторами трансферрина и лактоферрина.

Усвяцов Б. Я. и соавт. (1987) разработали метод предваритель­ного накопления патогенных нейссерии в среде 199 или Игла для повышения частоты их обнаружения при высеве материала на плотные селективные питательные среды.

HodgeD.etal. (1987) выделили вагинальный штамм нейссе­рии, морфологически и биохимически похожий на менинго­кокк, но серологически на гонококк. Так, при культивировании его на средах без цистеина морфология колоний была типична для N.meningitidis. Это грамотрицательный диплококк, оксида-зо- и каталазоположителен, не расщепляет сахарозу, фруктозу, лактозу и маннит, не обладаетp-D-галактозидазной, ДНК-азной и трибутиразной активностью, устойчив к спектиномицину.

StoakesL.etal. (1987) предложили среду для идентификации в течение 24 ч различных видовp.NeisseriaиBranchamellaпо способности сбраживать сахара. Для приготовления ее основы к 600 мл воды прибавляли 6 г агараNoble, 9 г протеозного пепто­на № 3 («Difco»), 3 г NaCl и 7 мл индикатора Andrade. После пол­ного растворения ингредиентов доводили рН до 8,1 и стерилизо­вали 15 мин при 121°С. К каждым 200 мл основы, охлажденной до 56°С прибавляли по 2 г углевода (декстрозы, мальтозы, саха­розы) и стерилизовали. После этого к каждым 20 мл добавлялипо 3 мл суплекса, растворенного в 10 мл дистиллированной воды. Конечное значение рН среды—7,2. Сахаролитическую актив­ность определяли по изменению цвета среды на розовый (в неза­сеянном виде она бесцветна). С ее помощью удалось в течение 24 ч идентифицировать 99,1% нейссерии 9 видов, тогда как на триптиказо-цистиновом агаре—всего 93,7%.

RobinsonВ.,PalmaВ. (1986) сравнивали методы идентифи­кацииNeisseriaс помощью коммерческих системGonocheckIIфирмы «DuPont» иRIM-Nфирмы «AustinBiological» и тради­ционные культуральные методы с использованием агара с цис-тином иKellogg-arapa. Ошибки при идентификации N.gonor­rhoeaeв основном были обусловлены ложноположительными результатами при определении ферментации глюкозы. Эффек­тивность использованных культуральных методов была соот­ветственно равна 67 и 100%, а методов с использованием ком­мерческих систем—99%. Ошибки при идентификации N.meningitidisимели место лишь при использованииKellogg-ara­pa, эффективность культуральных методов при этом составля­ла, соответственно, 100 и 93,5%. Эффективность методов с ис­пользованием коммерческих систем равнялась 100%. На осно-

72

73

воротка, а также длительность культивирования. Выращивание осуществляли на плотных и жидких средах. В качестве плотных использовали тиамин-цистин-глутаминовый агар—ТЦГА (Гад-жиева А. Г., 1975), содержавший 20% сыворотки крови, 1,5% агар на гидролизате мяса по Хоттингеру; среду «25-й вариант» (Мохов Ю. В., 1983); безбелковую среду с казаминовыми кислотами сле­дующего состава: агар «Difco»—25 г/л, глюкоза—7 г/л,NaCl— 10 г/л, казаминовые кислоты—17,5 г/л, глутаминовая кислота— 170 мг/л, крахмальная паста—0,2 л/л, 20%-ый растворNaOH— 2,75 мл/л. Жидкими средами являлись модифицированная Коэ-на-Уиллера (Фаньковская Э. К. и соавт., 1969) и синтетическая, состоявшая из набора солей и аминокислот. Показана зависи­мость интенсивности микрокапсулообразования от концентрации в среде глюкозы. При содержании ее 7 г/л и более формирование микрокапсулы угнеталось. При этом, вероятно, образование мик­рокапсулы зависело от глубины расщепления в питательной среде крупных белковых молекул. Формирование микрокапсулы не за­висело от содержания в среде аминного азота в изученных кон­центрациях (от 49 до 160 мг%). Наиболее интенсивно микрокапсу­лы образовывались в синтетической среде и на ТЦГА с 20% сыво­ротки, прогретой в течение 1 ч при 56°С, причем формированиеповерхностных структур зависело от типа среды. На средах, содер­жавших сывороточные белки, на поверхности микробов, помимо истинной микрокапсулы, формировалась псевдокапсула. Пло­щадь среза ее увеличивалась с повышением концентрации (0—20%) сыворотки крови в среде, тогда как на формирование микро­капсулы этот показатель не влиял. Добавление в безбелковую сре­ду Коэна-Уиллера ионов Fe³⁺ от 0 до 32 мг/л не сказывалось на интенсивности формирования микрокапсулы и росте биомассы.

Вальвачевым Н. И. и соавт. (1984) подготовлены методиче­ские рекомендации, где представлено 9 рецептур сред для выде­ления и идентификации менингококков, рекомендуемых в соот­ветствии с приказом МЗ СССР № 98 от 29.01.81 «О расширении функций Всесоюзного центра менингококковой инфекции».

Морозова Т. В. и соавт. (1998) предлагают для выделения и культивирования менингококов менингоагар, содержащий в ка­честве белковой основы панкреатичекий гидролизат казеина, ав-толизат дрожжевой, ферментативный гидролизат черного амбу-лина (стимулятор роста гемофильных микроорганизмов), а так­же глюкозу, хлорид натрия и агар-агар.

Jessouroun E. et al. (1995) сравнили экспрессию железорегули-руемого белка наружной мембраны N.meningitidisна триптиче-ском соевом бульоне и синтетических средах:Frantzи неполнойCatlin. Хотя экспрессия железорегулируемого белка на первыхдвух средах не различалась, при получении этих белков для вак­цины предпочтительна средаFrantz, имеющая известный состав.