- •1. Основные представления о микробиологических средах и их компонентах
- •1.1. Классификация сред, терминология
- •1.2. Питательные основы
- •1.3. Агар-агар и его заменители
- •1.4. Сыворотка крови животных и человека
- •1.5. Твины
- •1.6. Минеральные соли
- •1.7. Селективные агенты Красители
- •2. Грамотрицательные аэробы 2.1. Род Псевдомонады
- •2.2. Сем. Нейссерии
- •2.3. Род Бордетеллы
- •2.4. Род Бруцеллы
- •4.3. Сем. Пастереллы Род Пастереллы
- •8.4. Род бациллы
- •8.5. Род микобактерий
4.3. Сем. Пастереллы Род Пастереллы
Hofer M. et al. (1982), Коломнина Г. Ф. и соавт. (1988) изучали влияние различных условий культивирования на ростPasteurellamultocida.
Коротеева Л. А. (1991) готовила питательные среды для культивирования вакцинных штаммов кампилобактерий и пастерелл на основе ферментативного казеиново-дрожжевого гидролизата. Позже Коротеевой Л. А. и соавт. (1996) предложена для культивирования пастерелл среда на основе лактопептона, биологические испытания которой показали ее перспективность.
SandhuТ.etal. (1991) отмечают отсутствие роста на цитрат-ном агаре Симмонса и агаре МакКонки всех штаммов Р. апа-tipestiber, выделенных от уток и другой домашней птицы в США, Сингапуре, Англии и Германии.
Gatewood D. et al. (1994) изучали влияние состава культураль-ной среды на экспрессию специфичных белков внешней мембраныP.haemolytica, образование капсулы и лейкотоксина.
Moore M. et al. (1994) разработали селективную обогащенную среду для выделения пастерелл от птиц и окружающей среды.
MosierD.etal. (1994) провели сравнительное исследование супернатантных антигенов пастерелл серотипа-1, выращенных на среде без сыворотки и с добавлением альбумина сыворотки плодов коров и сыворотки лошади.
Регламентная среда для культивирования возбудителя пасте-реллеза свиней и птиц готовится на основе ферментативного гидролизата мяса с добавкой пептона и минеральных компонентов. В связи с высокой стоимостью исходного сырья Клыков С. П. и соавт. (1996) предлагают среды приготовленные из альтернативных источников. Сопоставимые результаты роста пастерелл получены на смесях панкреатических гидролизатов рыбно-кост-ной муки, крови и казеина при общем содержании аминного азота 200—250 мг%. Среды, на основе любого отдельно взятого
Род Хемофилус
Бактерии рода Haemophilusвызывают различные заболевания как у людей, так и у животных. Из-за требовательности гемо-филов, обнаружение и выделение патогена возможно только на высококачественных средах с удовлетворительным составом (CzukasZ., 1986), содержащихXиVфакторы роста. Эти микроорганизмы очень чувствительны к влиянию внешней среды, физических и химических факторов. Трудности бактериологической диагностики связаны также с антагонистическим влиянием на их рост ряда бактерий. Поэтому совершенствование методики выделения гемофильных палочек проводится в направлении повышения чувствительности питательных сред и создания селективных условий. Широкое применение нашли среды Левенталя, Филдса, сердечно-мозговая, с гемином, шоколадный агар и др. Селективные условия создаются антибиотиками бацитрацином, клаксоциллином, ванкомицином. Нестабильность одних сред,трудоемкость и высокая стоимость приготовления других побуждают к их усовершенствованию. В частности, для выделения гемофильных палочек предлагается «витаминный агар» с олеатом натрия (цит. по Фаустовой М. Е., 1980).
Н. aegypticus, как и Н.influenzae, могут вызывать острые конъюнктивиты. Характеризуются своими ростовыми потребностями и, в отличие от Н.influenzae, не растут на триптиказо-со-евом агаре с добавлениемXиVфакторов, плохо растут на яичной среде, шоколадном агаре и несколько лучше—на агаре Колумбия. Эти различия отчасти могут быть объяснены содержанием крахмала в среде. Жирные кислоты яичной средытоксичны для Н. aegypticus и подавляют его рост, что может быть использовано для дифференциации Н.aegypticus, и Н.influenzae, а также для определения его питательных потребностей (Abdel-AzizH.etal., 1986).
Balke E. et al. (1988) показали возможность дифференциации видов и таксоновHaemophilusпо реакции расщеплениеL-алани-
164
165
риями могла быть обнаруживаема и уровень, следовательно, определялся между 1 и 150/г.
RaccachM.,GeshellD. (1995) показали ингибирование нескольких штаммов L. monocytogenes (CA, ОН, SA и V7) в молоке истощенной средой, обезвоженной педиококками (dehydratedpediococcalspentmedium—DPSM). Зоны ингибирования формировались против всех тестируемых штаммов листерий.
EkJund M. et al. (1995) изучали сферу действия и источники L. monocytogenes в рыбных изделиях холодного копчения и продуктах предприятий перерабатывающей промышленности. Популяции L. monocytogenes инокулированные на поверхности соленых кусков лососи изменялись очень незначительно в процессе холодного копчения при температуре от 22,2—30,6°С в течение 20 ч, с или без применения дыма, но когда температура обработки снижалась до 17,2—21,1°С, популяции уменьшались в 10—25 раз когда дым применялся. ПроникновениеL.monocytogenesвнутрьэтих кусков увеличивалось в 2—6 раз при 17,2—21, ГС и в 100 раз при 22,2—30,6°С, независимо от присутствия дыма.
Показана реверсия покоящихся форм листерий в вегетативное состояние под воздействием фетальной сыворотки и ауксина (Пушкарева В. И. и соавт., 1997).
Capell С. et al. (1995) предлагают метод и среду для электрического определения Listeria spp. в пище. Описывают усовершенствование жидкой среды для детекции видов листерий мониторингом емкости образцов пиши, предварительно обогащенных в бульонеUVM1. Показан быстрый ростL.monocytogenesв жидких средах с селективностью, основанной на антибиотиках присутствующих вOxford-arape. Концентрации Оксфордских селективных агентов в конечном варианте емкостной среды были выше, чем в собственноOxford-arape, и эта среда не требовала проведения реакции эскулин/цитрат железа-аммония. Среда базировалась на способности листерий индуцировать изменение более чем на 30% ее емкости в течение 30 ч. При параллельном сравнении выявления листерий в тестируемых образцах крупной пищевой компании, метод дал меньшее количество ложнополо-жительных результатов, чем использованиеFraser-бульона.
Выделение L. monocytogenes путем посева материала на плотные среды считалось невозможным, так как при этом затруднено разграничение данного микроорганизма от непатогенных листерий.ForetJ.,DoreyF. (1997) показали быструю идентификациюL.monocytogenesна селективной среде ЕНА. Основой среды являетсяColumbia-агар с 5% бараньей крови и с добавлением сфингомиелиназы (10 ЕД/л), способствующей образованию четких зон гемолиза вокруг колоний. Добавление 0,4% 4-метилум-беллиферил-Р-О-глюкозида позволяет идентифицировать род листерий по флуоресценции колоний в ультрафиолетовом светепри 450 нм. Среда содержит 1 % хлорида лития и комплекс антибиотиков (SR1400 «Oxoid»). Высеваемость на предложенной
среде была значительно выше, чем на средах Oxford и Palcam. Селективную средуPalcamдля изоляции листерий выпускают многие зарубежные фирмы.
OttavianiF.etal. (1997) испытали селективную агаровую среду САС дляL.monocytogenesс добавлением селективного коктейля и дифференцирующего реагента, состоящего из смеси металлов, а также очищенных фосфолипидов. Через 24 ч на средеразвиваются голубые колонии рода листерий, a L. monocytogenes окружены мутным ореолом. Применение САС рекомендовано для первичного выделенияL.monocytogenesкак экономичный и быстрый метод.