9. Определение групп крови системы ab0 Определение групп крови системы ab0 с использованием цоликлонов

Определение группы крови при по­мощи цоликлонов анти-А и анти-В позволяет выявить наличие антигенов (агглютиногенов) А и В.

Цоликлоны анти-А и анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В‑лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов. Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирующих АВ0-сывороток.

На планшет или пластину индивидуаль­ными пипетками наносятся цоликлоны анти-А и анти-В по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле (0,01 — 0,03 мл) исследуемой крови, смешивают кровь с реагентом.

Наблю­дайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3 мин.

Агглюти­нация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 – 6 с, однако наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в аг­глютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны не­вооруженным взглядом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции кап­ля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в табл. 3.2.

Таблица 3.2

Интерпретация результатов определения группы крови системы AB0 с использованием цоликлонов

Результат реакции с цоликлоном		Группа исследуемой крови
анти-А	анти-В
-	-	0 (I)
+	-	А (II)
-	+	В(III)
+	+	AB(IV)

Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) отсутствие агглютинации

В составе цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, спо­собных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроци­тов, поэтому не требуется проведения контроля с растворителем.

При положительном результате реакции агглютинации со всеми цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости одну каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей изотонического раствора хлорида на­трия. Кровь можно отнести к группе АВ (IV) только при отсут­ствии агглютинации эритроцитов в изотоническом растворе на­трия хлорида.

Определение группы крови системы ab0 человека по стандартным гемагглютинирующим сывороткам

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови системы AB0 человека вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток.

Определение групп крови системы ab0 с использованием стандартных эритроцитов

Наличие антител (агглютини­нов)  и β определяется в плазме исследуемой крови стандартны­ми эритроцитами.