3.7. Интерферон

Интерферон (ИФН) — это сводное понятие для обозна­чения белков-гликопротеидов, обладающих противовирусной активностью. Существует не один, а несколько интерферо-нов, они образуются1Гклетках под влиянием индукторов.

3.7.1. Классификация ИФН. В зависимости от происхож­ дения различают альфа-интерферон (лейкоцитарный), бета- интерферон (фибробластный), гамма-интерферон (иммун­ ный).

Альфа- и бета-интерфероны кислотоустойчивы и устойчи­вы к додецилсульфату натрия, их относят к I типу (клас­сический интерферон). Гамма-интерферон продуцируется клетками доноров, предварительно сенсибилизированных ан­тигеном, он кислотолабилен, его относят к интерферону 2 типа (иммунный)..

Интерфероны, полученные в культурах любых клеток вне организма, принято называть экзогенными, а выработан­ные в организме животных или человека — эндогенными.

2. Индукторы ИФН. Индукторами интерферона явля­ ются живые слабовирулентные или инактивированные РНК- содержащие вирусы, нуклеиновые кислоты (особенно двухце- почечная РНК), синтетические полирибонуклеотиды, бакте­ риальные антигены, эндотоксины и липополисахариды, поли­ анионы, некоторые соединения растительного происхожде­ ния, например, низкомолекулярные полифенолы, выделен­ ные из березы и госсипола хлопчатника, некоторые антибио­ тики и красители.

3. Синтез ИФН. В настоящее вр.емя общепризнано, что

29

в каждой клетке есть гены, ответственные за синтез интер-\ ферона, но эти гены находятся в состоянии репрессии. ^-

Индуктор вызывает дерепресо.ию гена, с этого участка ДНК снимается информация {транскрипция и-РНК), она идет на рибосомы, точнее на связанные с мембранами поли­сомы, где происходит считывание информации (трансляция и-РНК-ИФН) и в соответствии с кодом из клеточных амино­кислот синтезируется полипептид-интерферойд, который по­сле гликолизирования становится интерфероном.

Все гены интерферона кодируют белки из 166 аминоки­слот с N-концевой сигнальной последовательностью из 20— 23 аминокислот, В зрелых молекулах ИФН эти сигнальные концы отсутствуют и в составе альфа-ИФН установлено при­сутствие 143 аминокислот, бета-ИФН-145 и гамма-ИФН — 146 аминокислот.

По последним данным, альфа-ИФН не имеет в своем со­ставе углевода, не является гликопротеииом.

Наиболее активными продуцентами ИФН являются лей­коциты, особенно лимфоциты (ТиВ) и макрофаги.

3.7.4. Механизм действия ИФН. Интерферон не оказывает прямого антивирусного действия, а индуцирует синтез фер-ме-нтов 2,5-олиго-аденилат-синтетазы и протеинкиназы.1 2,5-олиго-аденилат-синтетаза активирует •эндорибонуклеазу, спо­собную расщеплять вирусные и-РНК, протеинкиназа инги-. бирует синтез вирусных белков, в результате чего ингиби-_ руется репликация вируса. ,. ..)

Кроме jrorpj_ИФН вызывает изменения в^плазматической мембра'нё клеток,'затрудняя проникновение^ вирусов, и по­ давляет сборку вирионов.- , " -^; Интерферон оказывает влияние и на иммунную систему. Он активизирует деятельность Естественных 'Кйллеров-лймфо- цитов периферической крови, которые могут лидировать за­ раженные вирусами клетки, усиливает' фагоцитарную дея­ тельность макрофагов, подавляет активность Т-лимфоцитов- супрессоров и усиливает синтез некоторых иммуноглобули­ нов.

Интерферон обладает широким антивирусным спектром действия, к- нему наиболее чувствительны вирусы, имеющие суперкапсидные оболочки и липиды.

Однако, интерферон обладает видотканевой специфично­стью, т. е. он проявляет более высокую активность в той системе клеток, которыми был продуцирован.

В основе специфичности ИФН по отношению к пилу

ина — специфичность взаимодействия ИФН с рецепторами *Т клеток. Однако, имеются исключения: человеческий интер­ферон способен защитить бычьи клетки, а свиной — клетки

человека.

Интерферон более надежно защищает неинфицированные-клетки, поэтому эффективен при раннем применении.

Интерферон обладает не только противовирусным дейст­вием, он регулирует различные механизмы иммунного отве­та: стимулирует фагоцитоз, проявляет антимикробные свой­ства, влияет на синтез антител, подавляет рост опухолерод-ных клеток, обладает антистрессовым и радиозащитным дей­ствием.

3.7.5. Получение интерферона. Его получают с помощью лейкоцитов или макрофагов. Их вначале обрабатывают ма­лыми дозами (0,5 ЕД/мл) ИФН — праймируют, затем вво­дят индуктор. В качестве индуктора наиболее часто исполь­зуют парагриппозный вирус Сендай или вакцинный штамм «Н» вируса болезни Ньюкасла. После того, как в культуре клеток образуется максимальное количество ИФН, вирус-индуктор инактивируют за счет подкисления среды. Препарат должен быть стерильным и активным.

Активность ИФН определяют в культуре клеток по наи­высшему разведению препарата, предохраняющему клетки от разрушения вирусом везикулярного стоматита.

Наивысшие концентрации ИФН образуются в культуре макрофагов — до 1:4000 (4000 ЕД/мл).

В настоящее время в нашей стране отработана биотехноло­гия производства интерферона с помощью трансформирован­ного штамма эшерихии, полученного методом генной инжене­рии.

В США в 1983 г. ген бета-ИФН встроили в геном вируса

ядерного полиэдроза и при заражении насекомых таким трансформированным штаммом вируса получают большой выход интерферона человека из клеток насекомых.

3.7.6. Практическое применение ИФН. Экзогенный интер­ферон наиболее активен при раннем применении, особенно при локальных вирусных инфекциях кожи, слизистых оболо­чек, глаз. В медицине применяется при герпесе и гриппе.

До недавнего времени интерферон считали совершенно безвредным препаратом. К сожалению, накопились данные о том, что он может вызывать и нежелательные эффекты: повышение температуры, гипотония, миалгия, тахикардия, нарушение функции печени.

31

В ветеринарной практике экзогенный интерферон с пола­дь жительными результатами испытан при острых респиратор­ных болезнях телят и птиц, однако наиболее перспективно применение индукторов эндогенного интерферона.

В качестве индукторов используют живые вакцины из слабовирулентных штаммов. Они быстро индуцируют выбра­ковку ИФН и уже через 4—8 часов после введения защища­ют организм от вирусной инфекции. ИФН обнаруживается в крови в течение 24—36 час, в паренхиматозных органах — до 4 суток, т. е. он обусловливает защиту организма от виру­сов еще до появления в организме специфических вирусней-трализующих антител.

При отсутствии специфической вирусвакцины следует ис­пользовать другие индукторы, наиболее доступным и испы­танным из которых является вакцина из штамма «Н» вируса болезни Ньюкасла. Имеются данные, что она защищала жи­вотных от экспериментального ящура и болезни Ауески.

В качестве индукторов эндогенного интерферона можно использовать микробные липополисахариды (пирогенал, про-дигиозан) и бактериальные антигены.

Эффективным может -быть комбинированное применение экзогенного. интерферона, сывороточных препаратов, индук­торов интерферона и химиотерапевтических препаратов, на­пример, лицам, укушенным явно бешеным животным, вво­дят антирабическнй гаммаглобулин, интерферон, фермент • РНК-азу, а затем антирабическую вакцину. ,

.3.8. НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ГЛОБУЛИНЫ

( Они представляют собой 10% водный раствор гамма- и -бета-глобулинов, выделенных из сыворотки крови клиниче­ски здоровых .животных, убиваемых для использования на. мясо^Кроме «нормальных» антител в них содержатся спе­цифические антитела против тех возбудителей, которые цир­кулируют среди животных данного хозяйства или против ко­торых проводили иммунизацию животных, поэтому название «неспецифические» относительно условно, их можно бы на­зывать полиглобулинами. >

Препарат, полученный из сыворотки крови крупного ро­гатого скота, применяют телятам, а полученный из крови свиней — поросятам.

.32

Неспецифические глобулины применяют для компенсации иммунологической недостаточности при запоздалой выпойке 32

молозива, при переводе молодняка на искусственное вскарм-. лйвание, перед перегруппировкой, взвешиванием, перевозкой, а также при желудочно-кишечных и респираторных заболева­ниях молодняка. Препарат оказывает общее стимулирую­щее действие, повышает резистентность, предупреждает возникновение или облегчает течение заболеваний, в том чи­сле и вирусной этиологии, благоприятно влияет на рост и раз­витие молодняка.

Для применения в промышленном птицеводстве разрабо­тан препарат «Авиглобулин неспецифический», который пред­ставляет из себя водный раствор фракций гамма и бета-гло­булинов сыворотки крови кур. Препарат повышает резис­тентность, сохранность и продуктивность цыплят.

Глобулины выделяют из сыворотки крови спиртовым, ри-ванолевым, солевым методом или с помощью полиэтиленгли-

коля.

В ветеринарной практике в настоящее время чаще исполь­зуется полиэтиленгликолевый метод, в т. ч. и в Кировской областной производственной лаборатории.

Суть этого метода, усовершенствованного А. П. Простя-ковым, Л. И. Трусовой и др. (БГНКИ, 1988), заключается в следующем. Берут сыворотку крови, с помощью IH раствора едкого натра устанавливают рН до 8,0—8,5, затем при посто­янном помешивании в сыворотку добавляют 8% полиэтилен-гликоля (ПЭГ-115, м. масса 500 Д). После полного раство­рения ПЭГ (через 10—20 мин.) смесь оставляют на 24 час. для отделения осадка, затем центрифугируют или сепариру­ют, осадок отделяют и готовят 10% раствор на физрастворе, после чего снова выдерживают 24—48 час, при 8—12°С, над-осадочную жидкость (раствор глобулинов) фильтруют и рас­фасовывают, а осадок (нестабильные белки) отбрасывают. Препарат контролируют на стерильиостьь и безвредность.