Диффузионный метод.
Эта группа реакций преципитации ставится в агаровом геле, результат взаимодействия растворимых антигена и антител проявляется в виде беловатой полоски на границе их встречи в геле - преципитат.
РПГ - реакция преципитация в геле.
Реакцию ставят на чашках Петри, залитых пептонным агаровым слоем. Посередине помещают полоску фильтровальной бумаги, предварительно смоченной антитоксической сывороткой. После подсушивания, на расстоянии 1 см от края полоски делают посевы культур дифтерийного микроба бляшками до 1 см, с двух сторон полоски бумаги. Среди культур должен быть заведомо токсигенный штамм (положительный контроль) и штамм нетоксигенный (контроль отрицательный). Посевы помещают в термостат на 24 ч.
Если культуры были токсигенные, то между полоской бумаги и бляшкой культуры возникает белая линия преципитации, которая совпадает с линией преципитации положительного штамма. Если культуры не токсигенные, то линии преципитации не будет. Преципитат образуется благодаря диффузии антител и антигена в разные стороны в агаре. В месте их встречи появится белая полоска преципитации.
РПО - реакция преципитации по Оухтерлоне.
Еще одна разновидность преципитации в геле. В агаре на чашке Петри определенными пробойниками вырезают 4 небольшие лунки, расположенных в виде квадрата, на расстоянии 0,5 см. В первую лунку вносят иммунную сыворотку. Во вторую лунку рядом - известный антиген (контроль положительный), гомологичный иммунной сыворотке, которая в 1 лунке. В третью лунку, напротив первой лунки, вносят нормальную сыворотку (отрицательный контроль). В 4 лунку, рядом с первой, но с другой стороны от нее по сравнению со второй лункой, вносят испытуемый на антиген экстракт. Чашка ставится во влажную камеру на сутки при 37о С - при необходимости и более суток.
Если в испытуемом экстракте присутствует антиген, то полоски преципитации в геле распределятся между 1 и 2 лунками (контроль), 1 и 4 лунками (опыт) под углом к третьей лунке (отрицательный контроль). Если антигена нет, то будет всего одна полоска между 1 и 2 лунками (положительный контроль).
РИЭФ - реакция иммуноэлектрофореза.
Представляет собой сочетание электрофоретического разделения компонентов с иммунопреципитацией.
На стеклянную пластину наносят слой агара толщиной в несколько мм. В застывшем агаре проделывают небольшую лунку и вносят в нее исследуемый экстракт на антиген. Включают слабый ток и антиген начинает ускоренно двигаться в сторону анода, что и является электрофорезом. Движение антигена продолжается несколько часов. Затем поперек движения антигена прорезают узкую канавку и заполняют ее антисывороткой к антигену, предполагаемому в материале. Антитела сыворотки диффундируют во все стороны, в том числе - навстречу антигену.
Если в экстракте есть антиген, то наблюдаются белого цвета дуги преципитации, где произошло взаимодействие антиген-антитело. Пластину можно отмыть, окрасить на белки и сравнить со стандартом. Таким образом, если использовать известный антиген, можно определять антитела, а при известной антиглобулиновой сыворотке определять классы ИГ.
РВИЭФ - реакция встречного иммуноэлектрофореза.
Используется принцип движения компонентов реакции в электрическом поле. На стеклянной пластине, залитой агаром, делают лунки на расстоянии 1 см. В одну из них вносят экстракт на антиген, в другую - антисыворотку. Подключают слабый электрический ток. Антиген движется к аноду, а антитела - к катоду, т.е. навстречу друг другу. При этом методе происходит быстрое их сближение и реагирование (за 60 мин).
Если в экстракте есть антиген, то при встрече с антителами будет их взаимодействие, что проявится линией преципитации белого цвета. Пластину можно отмыть и покрасить для более четкого просмотра линий. Если антигена нет, линий преципитации не обнаруживается. В реакции нельзя использовать антигены, имеющие кислую реакцию.
Феномен нейтрализации
Основан на взаимодействии антител с микробами или его факторами метаболизма.
Метод иммобилизации.
Группа реакций основана на обездвиживании подвижных микробов.
РИТ - реакция иммобилизации трепонем.
В одну пробирку вносят 0,5 мл антисыворотки, предварительно прогретой при 56о С в течение 15 мин, а во вторую пробирку- 0,85 % раствор хлорида натрия. В обе пробирки добавляют по 0,5 мл тканевой культуры хорошо подвижных трепонем. Пробирки слегка встряхивают и выдерживают 60 мин при 35о С. Затем пастеровской пипеткой наносят на предметное стекло каплю из первой пробирки и из второй, раздельно. Накладывают покровные стекла и просматривают под микроскопом в темном поле. В первой пробирке будут наблюдаться обездвиженные трепонемы. Процент иммобилизации трепонем можно подсчитывать по формуле: (А-В): А, где А - количество подвижных трепонем в контроле, В - в опыте.
РИВ - реакция иммобилизации вибриона.
В две пробирки вносят по 0,5 мл бульонной культуры хорошо подвижных холерных вибрионов для определения их специфичности. В одну пробирку вносят 0,5 мл холерной антисыворотки, например, типа Огава в разведении 1: 5, во вторую 0,85% раствор хлорида натрия. Пастеровскими пипетками наносят на предметное стекло две капли: из опытной и контрольной пробирок, покрывают покровными стеклами и просматривают в темнопольном микроскопе.
Если вибрион по специфичности соответствует сыворотке, то активность его движения заметно падает и через несколько минут прекращается. В это время в контрольной капле движение вибриона продолжается. Если антисыворотка была гетерологичной, то на движении вибрионов это не отразится.