Микра_Практ
.pdf99
Общепринятым показателем санитарно-микробиологического ис следования воды является показатель коли-индекс, т. е. количество бак терий группы кишечных палочек в I л воды или коли-титр - наимень шее количество или наибольшее разведение воды, в котором еще обна
руживается кишечная палочка.
Задание
Определить количество микроорганизмов (микробное число) в во
допроводной воде и загрязненных водах.
Работа 29. Микробиолоrические методы исследования
воздуха
Воздух не является средой обитания микроорганизмов, а является
транзитной средой.
Микрофлору воздуха можно условно разделить на постоянную,
часто встр<ечающуюся, и переменную, представители которой, попадая в воздух из свойственных им мест обитания, недолго сохраняют жизне
способносtь. Постоянно в воздухе обнаруживаются пиrментообразую щие кокки, палочки, дрожжи, грибы, актиномицеты, спороносные ба
циллы и клостридии и др., т. е. микроорганизмы, устойчивые к свету, высыханию. В воздухе крупных городов количество микроорганизмов
больше, чем в сельской местности. Над лесами, морями воздух содер
жит мало микробов (в 1 м3 - единицы микробных клеток). Дождь и снег
способствуют очищению воздуха от микробов.
В воздухе закрытых помещений микробов значительно больше, чем в открытых воздушных бассейнах, особенно зимой, при недоста
точном проветривании. Состав микрофлоры и количество микроорга
низмов, обнаруживаемых в 1 м3 воздуха (микробное число воздуха),
зависят от санитарно-гигиенического режима, числа находящихся в по
мещении людей, состояния их здоровья и других условий.
В воздух моrут попадать и патогенные микроорrанизмы от живот
ных, людей (больных и носителей).
Для миkробиологическоrо исследqвания воздуха пользуются мето дами, в основу которых положены оседание (седиментация) и аспирация.
При помощи седиментационных методов можно получить общее пред
ставление о встречающихся в воздухе микроорганизмах,_Аспирационные
методы дают возможность определить не только качественное, но и ко
личественное содержание бактериif в определенном объеме воздуха. Метод оседания.- Простейший метод бактериологического иссле
дования воздуха - метод оседания, который основан на оседании бакте-
101
Среди приборов для исследования воздуха помещений самым рас пространенным является прибор Кротова. Механизм улавливания мик
рофлоры основывается на ударно-прибивном действии струи воздуха, который проходит через узкую клиновидную щель и с большой скоро стью ударяется о влажную поверхность питательной среды. В результате удара находящиеся в воздухе аэрозоли, в том числе содержащие бакте рии пылевые частицы и капли, прибиваются к поверхности МПА или элективнь1х сред. Во время отбора пробы воздуха чашка Петри вращает
ся вместе со столиком, благодаря чему достигается равномерное обсеме
нение поверхности агара мmсрофлорой воздуха. Дпя отбора проб следует
подбирать чашки Петри с плоским дмом, а количество mrrательной сре ды в чашке не должно превышать 15 мл.
Прибор Кротова характеризуется эффективностью улавливания
микрофлоры в пылевой фазе аэрозоля, дает четкие сопоставимые ре зультаты, прост в_работе, позволяет за короткое время произвести отбор проб воздуха непосредственно на чашки Петри с МПА или элективны
ми средами. Производительность прибора от 20 до 40 л/мин. Основной недостаток прибора состоит в том, что он нуждается для работы в элек
троэнергии; это ограничивает возможности его применения для иссле
дования атмосферного воздуха.
Для исследования атмосферного воздуха используется ряд прибо
ров, в которых аэрозоль улавливается в жидкую среду. Принцип уст
ройства этих приборов прост. Они представляют собой стеклянные ем
кости, в которых через отверстия в пробке пропущены две трубки. Одна
трубка кончается чуть ниже пробки и соединена с аспиратором, другая - опущена на дно цилиндра, куда поступает исследуемый воздух. В ци линдр наливают стерильный изотонический раствор хлорида натрия или водопроводную воду (жидкости, необразующие пену) и через нее про
сасывают определенный объем воздуха. В качестве аспиратора могут быть использованы воздуходувки, пылесосы, насос. Посев жидкости производят на питательный arap или дифференциальные среды. На
МПА засевают по 0,1-0,2 мл улавливающей жидкости, а на элективные среды - по 0,3-0,5 мл.
Для исследования атмосферного воздуха используются также при
боры-бактериоуловители. т. е. трубки с размещенными в них плотными фильтрами (хлопчатобумажная или стеклянная вата). После окончания отбора пробы воздуха в количестве 100--300л ватный тампон помещают
в склянку с изотоническим раствором хлорида натрия и тщательно от
мывают встряхиванием со стеклянными бусами. Полученную суспен-
102
зию подвергают бактериологическому анализу посевом на поверхность
плотных питательных сред.
Мембра11ные фильтры. Для бактериологического исследования воздуха могут быть использованы стерилизованные и высушенные мем бранные фильтры №4. При помощи воздуходувки через фильтр проса сывают воздух. Мембранные фильтры должны быть хорошо просушены, так как мокрые и даже влажные фильтры практически воздухонепрони цаемы. Преимуществом метода мембранных фильтров является их пор
тативность и возможность концентрировап" на них микроорганизмы из
относительно больших объемов воздуха. Мембранные фильтры могут
быть использованы при исследованиях атмосферного воздуха в зимних
условиях.
Для обнаружения вирусов в воздухе наиболее целесообразно ис
пользовать приборы, в которых улавливание вирусного аэрозоля осуще
ствляется в жидкой улавливающей среде.
8 зависимости от поставленной задачи исследования микрофлоры
воздуха и условий отбора проб могут проводиться определения общей бактериальной обсемененности воздуха, содержания санитарно
показательных микроорганизмов и наличия патогенных или условно
патогенных микроорганизмов.
Пробы воздуха следует отбирать на уровне дыхания сидящего или
стоящего человека.
З~ание
Определить содержание микроорганизмов в воздухе лабораторных
помещений методом седиментации и с помощью аппарата Кротова.
Работа 30. Микробиологические методы исследования
пищевых продуктов и других твердых
продуктов
Порядок взятия проб, методы их исследования и нормативы каче ства регламентируются серией ГОСТ или другой нормативно
технической документацией.
Исходным материалом для посевов продуктов плотной консистен ции обычно является IО %-ная взвесь продукта. Для ее приготовления
стерильно взятую из разных мест пробы навеску (обычно 15 r) измель
чают в гомогенизаторе (или растирают в стерильной ступке), прибавляют 135 мл стерильной водопроводной воды или изотонического раствора
хлорида натрия. Жидкие и полужидкие продукты тщательно перемеши-
103
вают и в случае резко кислой реакции подщелачивают 10% стерильным
раствором бикарбоната натрия до рН 7,2-7,4. Жидкий продукт или по
лученную взвесь плотного продукта используют для приготовления
ряда десятикратных разведений в зависимости от характера продукта и·
от предполагаемого обсеменения. |
, |
Общую обсемененность или общее количество бактерий в I r/мл nродукТс1 учитывают по росту колоний мезофильных микроорганизмов
на мясо-пептонном arape.
Тема 8. Участие микроорганизмов
впревращении веществ и энергии
вбиосфере (биогеохимические циклы превращения веществ)
Микроорганизмы принимают активное участие в биогеохимиче
ских циклах ~евращения веществ в биосфере. Глобальное значение
имеет деятельность микроорганизмов в циклах углерода, азота и серы.
Процесс круговорота углерода состоит из синтеза и минерализации ор
ганических веществ. Ежегодно накапливаемое органическое вещество в
процессе фотосинтезирующей деятельности, главным образом, расте
ний и водорослей перерабатывается на разных. уровнях жизни консу ментами и деструкторами. К первым принадлежат, в основном, живот
ные, ко вторым - rриqы и бактерии. Последовательность этих событий выражается в трофических цепях или цепях питания. Конечное, дест
руктивное, звено этой цепи - минерализация органических веществ с
возвратом СО2 в атмосферу - осуществляется гетеротрофными микро
организмами.
Первыми деструкторами природных биополимеров (белки, нук
леиновые кислоты, rемицеллюлоза, пектин, крахмал, целлюлоза, лигнин
и др.) могут выступать лишь те микроорганизмы, которые синтезируют
гидролитические ферменты. В аэробной зоне к таким микроорганизмам
относятся грибы, некоторые, главным образом, грамположительные бактерии, в том числе и актиномицеты. В анаэробной зоне - это только бактерии, в основном из группы клостридий. В аэробной зоне происхо дит практически полное превращение полимеров с освобождением СО2• В анаэробных условиях в процессе первичного разложения органиче
ских веществ в качестве продуктов распада образуются жирные кисло
ты, спирты и молекулярный водород, которые частично используются
105
При разложении остатков животных, растений, микроорганизмов
освобождаются серосодержащие аминокислоты, тиоспирты, тиофенолы,
тиоэфиры, гетероциклические соединения, в которых сера находится в
восстановленном состоянии.
В цикле превращения серы участвуют разнообразные rруппы мик роорганизмов, бактерий и архебактерий, аэробных, анаэробных, хемо- и фототрофов (рис. 28).
Sx молекулярная |
2 |
SO/·; S20/· |
|
|
|
|
|
|
1 |
17 |
|
|
|
|
з |
|
|
||
|
|
|
|
5 |
|
|
|
|
|
|
|
s2- |
|
SO/· |
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
вi |
|
|
|
1 |
----- |
||||
|
|
|
|
14 |
||||||
|
|
|
|
------ |
||||||
|
|
|
|
Органические |
|
1 |
||||
|
|
L.-. |
- .., |
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
соединения серы
Рис..28. Цикл превращения среды:
1
11
/tl
I - аосстановительffые процессы: II - без перемены валентности серы; lfl - окислительные процессы. Возбудители процессов: / - бесцветные серобакте р11и, тионовые (е аэробныхуслов11ЯХ) и фотосинтезирующие серные бактерии (в
анаэробныхусловиях): 2,3- тионовые бактерии, архебактерий; 4- всемикроор ганизмы и ра(3_mения (ассимиляция); 5 - сульфатрвдуциру_ющие бактерии; 6 -
термоацидофильные анаэробные бактерии; 7 - облигатно анаэрабные термо
фильные К11Остриди11
В аэробных условиях окислительные процессы серы и ее восста новленных неорганических и органических соединений осуществляют
хемоавтотрофные прокариоты (серные, тионовые бактерии), а также некоторые типичные гетеротрофные бактерии родов Bacillus, Pseudo-
monas идр. |
· |
В анаэробных процессах участвуют фототрофные серные пурпур
ные и зеленые бактерии, осуществляющие бескислородный фотосинтез.
При ассимиляции сульфатов, как источника серы, происходит вос становление серы в процессах конструктивного метаболизма - ассимиля
ционная сульфатредукция. Биологическое закрепление растворимых
сульфатов в микробных клетках называется также иммобилизациейсеры.