9.1. Взаимодействие витамина с с к3[Fe(cn)6].
К 5 мл 0,02%-ного раствора витамина С прибавляют по несколько капель 5%-ного раствора гидроксида калия и 10%-ного раствора К3[Fe(CN)6], перемешивают, затем добавляют 2-3 капли 10%-ного раствора соляной кислоты и 1-2 капли 10%-ного раствора хлорида железа (III). Появляется сине-зеленое окрашивание и постепенно образуется синий осадок берлинской лазури - Fe4 [Fe(CN)6]3.
L-аскорбиновая L-дегидроаскорбиновая
кислота кислота
3K4[Fe(CN)6] + 4FeCl3 → Fe4[Fe(CN)6]3 ↓ + 12KCl
9.2. Реакция с метиленовой синью.
В пробирку наливают 2 капли 10% раствора метиленовой сини, 2 капли 10% раствора гидрокарбоната натрия, 10 капель раствора витамина С и нагревают. Жидкость обесцвечивается.
Опыт 10. Количественное определение аскорбиновой кислоты в моче методом Тильманса.
Количество витамина С в суточном объеме мочи зависит от содержания его в пище, потребности в нем организма, возраста человека, способности слизистой кишечника к всасыванию. В среднем здоровый человек выделяет 20-40 мг витамина С. По количеству витамина С, выведенного с мочой за сутки, можно судить об обеспеченности организма аскорбиновой кислотой. Более надежным методом диагностики гиповитаминоза является проба с нагрузкой аскорбиновой кислотой.
Метод основан на окислении аскорбиновой кислоты в дегидроаскорбиновую кислоту 2,6-дихлорфенолиндофенолом, который в кислой среде восстанавливается в бесцветное лейкосоединение.
Наливают в коническую колбочку 10 мл мочи, добавляют 10 мл дистиллированной воды и 1 мл концентрированной уксусной кислоты. Содержимое колбы титруют из микробюретки 0,001 н раствором натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола до получения устойчивой розовой окраски.
Содержание витамина С в суточном количестве мочи вычисляют по формуле:
где х – количество аскорбиновой кислоты, выделенное с мочой за сутки, мг; 0,088 - количество аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл 0,001 н раствора натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола, мг; V1 – общий объем мочи, собранной за сутки, мл; V2 - количество мочи, взятое для титрования, мл. Для женщин суточное количество мочи в среднем 1200 мл, для мужчин – 1500 мл.
Контрольные вопросы
1. Какие вещества относятся к витаминам? Какова их общая функция в организме?
2. Перечислите биохимические функции витаминов, определение которых проводилось в лабораторной работе.
3. Дайте определение авитаминозам, гипо- и гипервитаминозам.
4. Какие методы, кроме титриметрического, могут использоваться для количественного определения витаминов?
Работа 7. Оксидоредуктазы
1. Обнаружение дегидрогеназы (ксантиноксидаза, альдегиддегидрогеназа, кф 1.1.3.22) в молоке (реакция Шардингера).
В три пробирки наливают по 2 мл свежего коровьего молока. Одну пробу кипятят в течение 2 - 3 мин и охлаждают. В прокипяченную пробу и в одну из некипяченых проб добавляют по 0,5 мл 0,4%-ного раствора формальдегида, а в другую некипяченую - 0,5 мл воды. Затем во все три пробирки приливают по 2 капли 0,01%-ного раствора метиленового синего. Содержимое пробирок перемешивают и заливают в каждую по 3-4 капли вазелинового масла. Все пробы помещают в водяную баню при 40°С. Через некоторое время жидкость в некипяченой пробе, содержащей субстрат, обесцвечивается за счет образования восстановленной формы метиленового синего:
Если бесцветный раствор метиленового синего встряхнуть на воздухе, то он вновь приобретает синий цвет:
Эту реакцию можно использовать для отличия сырого молока от кипяченого.