4 курс / Акушерство и гинекология / Кадырова_Л_В_Дифференцировка_Т_лимфоцитов_в_динамике_беременности

61

3.4. Характеристика внутриклеточной продукции цитокинов и цитолитических молекул наивными клетками и клетками памяти в

популяциях Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови при неосложненной беременности в динамике гестационного процесса

Как известно, Т-хелперы и цитотоксические Т-лимфоциты продуцируют достаточно широкий спектр цитокинов и цитолитических молекул, обуславливающих характер иммунорегуляции гестационного процесса, тем самым, определяя неосложненное или патологическое течение беременности [39, 9].

Нами оценивалось содержание наивных клеток, центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти, внутриклеточно продуцирующих IFNγ и IL-4 в популяции CD4+ лимфоцитов, а также Perforin и Granzyme B в популяции CD8+ лимфоцитов периферической крови женщин с неосложненным течением беременности в динамике гестационного процесса.

Данные содержания клеток, находящихся на различных этапах дифференцировки и внутриклеточно продуцирующих IFNγ, в популяции периферических Т-хелперов представлены в таблице 3.4.1.

Проведенное исследование показало, что при неосложненной беременности в 1 триместре гестации в популяции CD4+ лимфоцитов достоверно повышался уровень Tn клеток, продуцирующих IFNγ, по сравнению с соответствующим показателем небеременных доноров (p<0,05). Содержание Tcm, Tem и Temra клеток памяти, внутриклеточно продуцирующих IFNγ, в популяции периферических Т-хелперов в 1 триместре беременности не имело достоверных различий по сравнению с показателями небеременных доноров (p>0,05 во всех случаях).

Во 2 триместре неосложненной беременности отмечалось достоверное повышение уровня претерминально-дифференцированных клеток памяти, продуцирующих IFNγ, в пуле CD4+ лимфоцитов относительно аналогичного

62

параметра небеременных женщин (p<0,05), при отсутствии достоверной разницы в содержании CD45RA-CD62L-IFNγ+ клеток по сравнению с показателем женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (p>0,05).

Таблица 3.4.1. Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-

дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD4+ лимфоцитов, внутриклеточно продуцирующих IFNγ, в динамике неосложненной беременности

В скобках дано число проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05;*** - p<0,01);

х - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 1 триместра гестации (хх - p<0,02);

v- коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 2 триместра гестации (v- p<0,05;vv - p<0,02).

Кроме того, в группе женщин 2 триместра гестации достоверно повышался уровень CD45RA+CD62L-IFNγ+ в популяции Т-хелперов по сравнению с аналогичным показателем, как небеременных женщин, так и женщин в 1 триместре беременности (p<0,01 и p<0,02 соответственно). Достоверных различий в содержании Tn и Tcm клеток памяти в популяции Т-хелперов, внутриклеточно продуцирующих IFNγ, в группе женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации относительно группы небеременных женщин и беременных женщин 1 триместра гестации нами выявлено не было (p>0,05 во

63

всех случаях).

Для 3 триместра неосложненной беременности в популяции CD4+ лимфоцитов периферической крови было характерно снижение уровня Tem и Temra клеток, внутриклеточно продуцирующих IFNγ, относительно 2 триместра гестации (p<0,05 и p<0,02 соответственно) до соответствующих показателей в группе небеременных доноров (p>0,05 в обоих случаях). Содержание Tn и Tcm клеток, продуцирующих IFNγ, в 3 триместре неосложненной беременности не имело достоверных различий по сравнению с аналогичными показателями в группе небеременных доноров и у беременных женщин во 2 триместре гестации (p>0,05 во всех случаях).

Содержание клеток, находящихся на различных этапах дифференцировки и продуцирующих IL-4, в популяции периферических Т-хелперов в динамике гестационного процесса представлено в таблице 3.4.2.

Сравнительный анализ данных показал, что в 1 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности в популяции периферических CD4+ лимфоцитов повышалось содержание наивных клеток, продуцирующих IL- 4, (p<0,05), при отсутствии достоверных различий в содержании центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти, внутриклеточно продуцирующих IL-4, по сравнению с группой небеременных доноров (p>0,05 во всех случаях). Во 2 триместре гестации процентное содержание Temra, продуцирующих IL-4, в популяции периферических Т-хелперов было достоверно выше, чем у небеременных доноров и беременных женщин 1 триместра гестации (p<0,05 в обоих случаях). Содержание IL-4+ Tn, Tcm и Tem клеток в пуле CD4+ лимфоцитов в группе женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации не имело достоверных различий по сравнению с аналогичными показателями в группе контроля и в группе женщин 1 триместра неосложненной беременности (p>0,05 во всех случаях). В 3 триместре неосложненной беременности отмечалось снижение уровня CD45RA+CD62L-IL4+ в пуле Т-хелперов относительно показателя 2 триместра беременности (p<0,05).

64

Таблица 3.4.2. Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-

дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD4+ лимфоцитов, внутриклеточно продуцирующих IL-4, в динамике неосложненной беременности

В скобках дано число проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05);

х - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 1 триместра гестации (х - p<0,05);

v- коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 2 триместра гестации (v- p<0,05).

Содержание Tn, Tcm и Tem клеток, внутриклеточно продуцирующих IL-4, в популяции периферических CD4+ лимфоцитов в сравниваемых группах не имело достоверных различий (p>0,05 во всех случаях). Нами также не было выявлено статистически значимых изменений в содержание наивных клеток, центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти, продуцирующих IL-4, в популяции CD4+ лимфоцитов периферической крови в 3 триместре неосложненной беременности относительно аналогичных параметров небеременных доноров (р>0,05 во всех случаях) (таблица 3.4.2.).

65

Содержание клеток, находящихся на различных этапах дифференцировки и продуцирующих Perf, в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов в динамике гестационного процесса представлено в таблице 3.4.3.

Таблица 3.4.3 Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-

дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD8+ лимфоцитов, внутриклеточно продуцирующих Perforin, в динамике неосложненной беременности

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05;**- p<0,02;***- p<0,01;**** - p<0,001);

х - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 1 триместра гестации (хх - p<0,02;хххх - p<0,001);

v- коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 2 триместра гестации (v- p<0,05).

Проведенное исследование внутриклеточной продукции цитолитических молекул клетками, находящимися на различных этапах дифференцировки, показало, что при неосложненной беременности в 1 триместре гестации в популяции периферических CD8+ лимфоцитов снижался уровень Tcm и Tem

66

клеток, продуцирующих Perforin, по сравнению с показателями небеременных доноров (p<0,02 в обоих случаях). Достоверные различия в содержании Tn и Temra клеток, внутриклеточно продуцирующих Perf, в популяции CD8+лимфоцитов в группах беременных женщин в 1 триместре гестации и небеременных доноров отсутствовали (р>0,05 в обоих случаях). Во 2 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности достоверно снижалось содержание наивных клеток, центральных, претерминальнодифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти, продуцирующих Perforin, в популяции ЦТЛ по сравнению с аналогичными показателями группы небеременных доноров (p<0,001, p<0,01, p<0,05, p<0,01 соответственно). При сравнительном анализе показателей 2 триместра беременности относительно 1 триместра нами было выявлено достоверное снижение в популяции CD8+ лимфоцитов уровня CD45RA+CD62L+Perf+ и CD45RA+CD62L-Perf+ клеток (p<0,001 и p<0,02 соответственно), при отсутствии

всравниваемых группах статистически значимых различий в содержании

CD45RA-CD62L+Perf+ и CD45RA-CD62L-Perf+ клеток (р>0,05 в обоих случаях).

Группа женщин с неосложненным течением беременности 3 триместра гестации характеризовалась достоверным снижением уровня Tcm, Tem и Temra, внутриклеточно продуцирующих Perforin, в популяции периферических CD8+ лимфоцитов относительно аналогичных параметров группы небеременных женщин (p<0,01, p<0,02, p<0,05 соответственно). Содержание Perforin+ Tn клеток

впопуляции CD8+ лимфоцитов в 3 триместре беременности было сопоставимым с таковым в группе небеременных доноров (p>0,05). В группе женщин 3 триместра беременности в популяции ЦТЛ периферической крови отмечалось повышение уровня CD45RA+CD62L+Perf+ клеток в популяции CD8+ лимфоцитов по сравнению с аналогичным показателем у женщин 2 триместра гестации (p<0,05), при этом достоверных различий в cодержании Tcm, Tem и Temra клеток памяти, внутриклеточно продуцирующих Perforin, в популяции ЦТЛ между обеими группами женщин выявлено не было (р>0,05 во всех случаях).

67

Содержание клеток, находящихся на различных этапах дифференцировки и продуцирующих Gr B, в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов в динамике гестационного процесса представлено в таблице 3.4.4.

Таблица 3.4.4. Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-

дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD8+ лимфоцитов, внутриклеточно продуцирующих Granzyme B, в динамике неосложненной беременности

Вскобках дано число проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (***- p<0,01);

х - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой

беременных женщин 1 триместра гестации (ххх - p<0,01).

Уровень центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти, внутриклеточно продуцирующих Granzyme B, в популяции CD8+ лимфоцитов не претерпевал значительных изменений в динамике неосложненной беременности, и статистически значимых различий в исследуемых показателях нами выявлено не было (p>0,05 во всех случаях).

В динамике гестационного процесса в популяции периферических цитотоксических Т-лимфоцитов нами выявлено изменение лишь уровня CD45RA+CD62L+Gr B+ клеток. Так, в 1 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности в популяции CD8+ лимфоцитов

68

отмечалось увеличение уровня наивных клеток, продуцирующих Granzyme B, по сравнению с аналогичным показателем группы небеременных доноров (p<0,01). 2 триместр неосложненной беременности характеризовался снижением уровня Granzyme B+ Tn в популяции ЦТЛ относительно показателя 1 триместра гестации (p<0,01), при отсутствии достоверных различий в содержании исследуемого параметра относительно группы контроля (p>0,05). В 3 триместре беременности также отсутствовали статистически значимые различия в уровне наивных клеток, продуцирующих Granzyme B, в популяции ЦТЛ периферической крови при сравнении, как с группой небеременных доноров, так и с группой женщин 2 триместра гестации (p>0,05 в обоих случаях).

Таким образом, при неосложненной беременности в популяции периферических CD4+ лимфоцитов в 1 триместре повышался уровень IFNγ IL4+ Tn клеток по сравнению с группой доноров, во 2 триместре увеличивался уровень IFNγ и IL4+ Temra клеток относительно аналогичных показателей небеременных доноров и беременных женщин 1 триместра гестации, а также уровень IFNγ+ Tem по сравнению с показателями небеременных доноров. В популяции цитотоксических Т-лимфоцитов на протяжении всего гестационного процесса отмечалось снижение содержания Perforin-продуцирующих клеток относительно показателей у небеременных доноров в пуле Tcm и Tem клеток в 1, 2 и 3 триместрах; в пуле Temra клеток во 2 и 3 триместрах; в пуле Tn во 2 триместре беременности. Уровень Granzyme B+ Tcm, Tem и Temra в популяции CD8+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности не претерпевал значительных изменений, отмечалось лишь увеличение содержания Gr B+ Tn в 1 триместре неосложненной беременности при сравнении с группой небеременных доноров.

69

Глава 4. СОДЕРЖАНИЕ IL-2 И IL-15 В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В ДИНАМИКЕ НЕОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И У ЖЕНЩИН С РАЗВИВШИМСЯ ВПОСЛЕДСТВИИ САМОПРОИЗВОЛЬНЫМ ВЫКИДЫШЕМ

Цитокиновая регуляция материнского иммунного ответа лежит в основе ключевых механизмов иммунологической толерантности к семиаллогенному плоду [9]. Как показали исследования последних лет, характер продукции и значимость тех или иных цитокинов на протяжении гестационного процесса, а также при развитии акушерско-гинекологической патологии, значительно меняются [22, 9, 184, 25]. Особого внимания заслуживают IL-2 и IL-15, относящиеся к цитокинам, регулирующим клеточный иммунитет и непосредственно влияющим на дифференцировку клеток [11]. Однако исследования уровня IL-15 при неосложненной беременности в динамике гестационного процесса и угрозе прерывания беременности 1 триместра гестации отсутствуют, а данные по IL-2 крайне противоречивы [13, 22].

Результаты исследования уровня IL-2 в сыворотке периферической крови у женщин с неосложненным течением беременности в динамике гестационного процесса представлены в таблице 4.1.

Сравнительный анализ данных, характеризующих содержание IL-2 в сыворотке периферической крови в динамике неосложненной беременности показал, что с наступлением беременности уровень исследуемого цитокина значительно менялся. В 1 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности нами отмечалось достоверное увеличение содержания IL- 2 по сравнению с аналогичным показателем группы небеременных доноров (p<0,05). 2 триместр неосложненной беременности характеризовался еще более выраженным увеличением уровня исследуемого цитокина при сравнении с группой небеременных доноров (p<0,05). Достоверных различий в содержании IL-2 в сыворотке периферической крови во 2 триместре гестации по сравнению с

70

аналогичным параметром 1 триместра беременности нами выявлено не было

(p>0,05).

Таблица 4.1. Содержание IL-2 в сыворотке периферической крови в динамике неосложненной

беременности

В скобках дано число проведенных исследований.

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05);

v- коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 2 триместра гестации (v- p<0,05).

В группе женщин с неосложненным течением беременности 3 триместра гестации отмечалось достоверное снижение сывороточного уровня IL-2 относительно группы женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации (p<0,05), при отсутствии достоверных различий исследуемого показателя относительно группы небеременных доноров (p>0,05).

Результаты исследования содержания IL-15 в сыворотке периферической крови у женщин с неосложненным течением беременности в динамике гестационного процесса представлены в таблице 4.2.

Результаты проведенных исследований показали, что сывороточный уровень IL-15 значительно менялся в течение беременности, причем динамика изменения содержания этого цитокина была во многом схожей с изменениями в содержании IL-2. Так с наступлением беременности в 1 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности в периферической