4 курс / Акушерство и гинекология / Кадырова_Л_В_Дифференцировка_Т_лимфоцитов_в_динамике_беременности

91

поступают цитолитические молекулы, в том числе и гранзим, что приводит к гибели клетки [39].

Ранее было показано, что в популяции ЦТЛ есть клетки, которые осуществляют свою цитотоксическую активность независимо от Perforin [187]. В свете этих данных можно предположить, что при беременности, с одной стороны, функционирует именно эта популяция ЦТЛ. С другой стороны, ситуацию одновременно высокой продукции Granzyme B и низкой экспрессии Perforin можно рассматривать как дополнительный механизм, препятствующий чрезмерной активации эффекторных цитотоксических клеток при неосложненной беременности. Это сочетается с уменьшением фракции CD8+Tem в 1 триместре, Tcm и Tem во 2 триместре неосложненной беременности. Возможно, это объясняется особыми механизмами регуляции функциональной активности цитотоксических Т лимфоцитов при беременности. Так, например, в литературе имеются данные о том, что секретируемый децидуализированным эндометрием гликоделин, способен контролировать экспрессию Perforin в CD8+ клетках. При его воздействии подавляется синтез IL-2Rα и снижается экспрессия Eomes (Eomesodermin), который вместе с IL-2 непосредственно регулирует продукцию Perforin [177], тем самым, препятствуя пролиферации CD8+ Т-лимфоцитов и их созреванию в компетентные цитотоксические клетки.

Однако уровень всех Granzyme B-продуцирующих клеток памяти в популяции CD8+ лимфоцитов не претерпевал значительных изменений по сравнению с показателями небеременных женщин и в динамике беременности.

Следовательно, при неосложненной беременности существуют механизмы, ограничивающие цитолитическую активность CD8+ лимфоцитов, но не снижающие их цитотоксический потенциал. Природа данных факторов остается не до конца изученной. В настоящее время мы можем лишь предположить, что снижение цитолитического потенциала пула CD8+ клеток памяти в динамике неосложненной беременности может быть одним из факторов, способствующих формированию феномена толерантности иммунной системы матери к АГ плода.

92

Таким образом, гестационный процесс ассоциируется с выраженными изменениями дифференцировки наивных клеток и клеток памяти, как в популяции Т-хелперов, так и популяции цитотоксических Т-лимфоцитов, что, вероятно, связано с изменением цитокинового гомеостаза при беременности и аллогенной стимуляцией. Направленность дифференцировки Т-лимфоцитов, повидимому, зависит от силы и длительности антигенной стимуляции, которая выражена в различной степени при неосложненном течении беременности и при развитии акушерской патологии.

93

Заключение

Суммируя полученные данные, можно предположить, что с наступлением беременности под влиянием поступающих антигенов плодового происхождения и изменившегося цитокинового фона, в частности, увеличение уровня IL-2 и IL-15, происходит усиление пролиферации наивных Т-клеток и изменение процесса дифференцировки Т-лимфоцитов.

Так, проведенные нами исследования показали, что 1 триместр беременности ассоциируется с усилением синтеза цитокинов Th1 и Th2 типов. Во 2 триместре отмечается снижение пулов клеток памяти в популяциях Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов, а также уменьшение экспрессии ДНК TREC. Кроме того, во 2 триместре нами отмечалось увеличение выработки IFNγ и IL-4 эффекторными клетками памяти. В 3 триместре неосложненной беременности процесс дифференцировки стихает, и все параметры дифференцировки возвращаются к уровню небеременных доноров. Следует отметить, что на протяжении всей гестации, по-видимому, отмечается усиление гомеостатической пролиферации наивных клеток и снижение цитотоксического потенциала ЦТЛ.

Таким образом, в динамике гестационного процесса идет активный ответ материнской иммунной системы на антигены плода. Особенностями этого ответа является резкое повышение содержания наивных клеток, не обладающих выраженными цитотоксическими свойствами, но обладающими эффекторным потенциалом, который необходим для защиты материнского организма во время беременности.

Нарушение маточно-плацентарного барьера и массивный выход в кровоток матери антигенов плодового происхождения, а также резкое повышение уровня интерлейкина-15 приводят к изменению направленности дифференцировки Т- хелперов и ЦТЛ и образованию большого количества высокоэффекторнных терминально-дифференцированных клеток памяти, способных к развитию цитотоксических реакций, направленных на отторжение плода и преждевременное прерывание беременности на ранних сроках.

94

ВЫВОДЫ

1.В периферической крови беременных женщин по сравнению с показателями небеременных женщин в популяции Т-хелперов на протяжении всего гестационного процесса повышено количество наивных клеток, во 2 и 3 триместрах снижен уровень центральных клеток памяти, а в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов увеличено содержание наивных Т-клеток в 1 и 2 триместрах, снижен уровень центральных во 2 триместре и претерминальнодифференцированных клеток памяти в 1 и 2 триместрах.

2.В 1 триместре неосложненной беременности по сравнению с показателями небеременных женщин усилена внутриклеточная продукция IL-4 и IFNγ наивными Т-хелперами, а также увеличена продукция Granzyme B наивными цитотоксическими Т-лимфоцитами, но снижена выработка Perforin центральными и претерминальнодифференцированными клетками памяти в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов; во 2 триместре в популяции Т-хелперов повышена продукция IFNγ в пулах претерминально- и терминальнодифференцированных клеток, продукция IL-4 в пуле терминальнодифференцированных клеток, но снижена выработка Perforin всеми типами клеток памяти цитотоксических Т-лимфоцитов; в 3 триместре уменьшена продукция Perforin центральными, претерминально- и терминально-дифференцированными клетками памяти.

3.В динамике беременности изменения в содержании клеток памяти, находящихся на разных стадиях дифференцировки, в популяции Т- хелперов отсутствуют, во 2 триместре снижается уровень центральных клеток памяти по сравнению с показателями 1 триместра, в 3 триместре повышается количество претерминально-дифференцированных клеток памяти по сравнению с таковым во 2 триместре в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов.

95

4.Внутриклеточная продукция цитокинов также меняется с увеличением срока беременности: во 2 триместре по сравнению с показателями 1 триместра повышается количество IL-4+ и IFNγ+ терминальнодифференцированных клеток в популяции Т-хелперов; снижается продукция Perforin и Granzyme B наивными клетками, а также уровень Perforin+ терминально-дифференцированных клеток в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов; в 3 триместре уменьшается внутриклеточная продукция IFNγ претерминально- и терминальнодифференцированными клетками и IL-4 терминальнодифференцированными клетками памяти в популяции Т-хелперов, но повышается продукция Perforin наивными цитотоксическими Т- клетками.

5.В 1 и 2 триместрах неосложненной беременности по сравнению с показателями небеременных женщин повышен сывороточный уровень IL-2, который в 3 триместре снижается по сравнению с таковым во 2 триместре, сывороточное содержание IL-15 повышается в 1 триместре и остается повышенным на протяжении всего срока беременности.

6.Уровень наивных CD31+thymic клеток по сравнению с параметрами небеременных женщин снижается в 1 триместре и остается сниженным в течение всего гестационного периода, как в популяции Т-хелперов, так

и цитотоксических Т-лимфоцитов, а количество наивных СD31-central, наоборот, повышается в 1 триместре и остается повышенным на протяжении всей беременности. Уровень экспрессии ДНК TREC не отличается от такового у небеременных женщин в 1 и 3 триместрах неосложненной беременности и снижается во 2 триместре. Во 2 триместре происходит снижение экспрессии ДНК TREC по сравнению с ее уровнем в 1 триместре, в 3 триместре уровень экспрессии ДНК TREC повышается по сравнению с таковым во 2 триместре.

7.В группе женщин с неосложненной на момент обследования беременностью и развившемся впоследствии ранним самопроизвольным

96

выкидышем по сравнению с показателями беременных женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации происходит снижение уровня центральных клеток памяти в популяции Т-хелперов на фоне повышения содержания терминальнодифференцированных клеток памяти в популяции Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов, а также повышается сывороточный уровень IL-15.

8.Высокое содержание CD45RA+CD62L+ лимфоцитов (равное или более 46,7%) в популяции периферических Т-хелперов позволяют с точностью 85,1% прогнозировать развитие самопроизвольного выкидыша в 1 триместре у женщин с неосложненной на момент обследования беременностью.

97

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

У беременных женщин в сроке 6-12 недель для прогнозирования развития раннего самопроизвольного выкидыша рекомендуется определять относительное содержание CD45RA+CD62L+ клеток в популяции Т-хелперов периферической крови и при его содержании равном или более 46,7% прогнозируют самопроизвольный выкидыш с точностью 85,1%.

Дополнительно к стандарту иммунологического обследования беременной женщины в динамике гестационного процесса рекомендуется проводить оценку характера дифференцировочного процесса Т-хелперов и цитотоксических Т- лимфоцитов периферической крови для оценки состояния иммунной системы.

Врачам акушерам-гинекологам рекомендуется использовать нормативные значения содержания наивных клеток, центральных, претерминально- и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов в 1, 2, 3 триместрах гестации.

1 триместр:

CD4+CD45RA+CD62L+ 35,7-42,7%, CD4+CD45RA-CD62L+34,1-40,7 %, CD4+CD45RA-CD62L- 17,6-26,1%, CD4+CD45RA+CD62L-1,6-3,4 %; CD8+CD45RA+CD62L+ 33,1-43,4 %, CD8+CD45RA-CD62L+ 8,4-11,5%, CD8+CD45RA-CD62L- 17,1-24,4%, CD8+CD45RA+CD62L- 26,4-35,7%; 2 триместр:

CD4+CD45RA+CD62L+ 37,3-46,9%, CD4+CD45RA-CD62L+ 30,5-37,5%, CD4+CD45RA-CD62L- 17,4-24,2%, CD4+CD45RA+CD62L- 2,1-4,3%; CD8+CD45RA+CD62L+ 34,9-45,0%, CD8+CD45RA-CD62L+ 7,7-10,0%, CD8+CD45RA-CD62L- 16,1-22,0%, CD8+CD45RA+CD62L-27,2-37,3 %; 3 триместр:

CD4+CD45RA+CD62L+ 36,2-44,3%, CD4+CD45RA-CD62L+ 33,8-39,4%, CD4+CD45RA-CD62L- 17,8-25,1%, CD4+CD45RA+CD62L- 1,9-3,3%; CD8+CD45RA+CD62L+ 32,6-41,9%, CD8+CD45RA-CD62L+ 8,5-13,0%, CD8+CD45RA-CD62L- 20,7-26,8%, CD8+CD45RA+CD62L- 24,0-32,6%.

98

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

99

АГ – антиген ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ЕКестественные киллеры мАТ - моноклональное антитело

ЦТЛ - цитотоксические Т-лимфоциты APC - аллофикоцианин

CD - кластер дифференцировки FITC - флюоресцеинизотиоцианат

Gr B - Granzyme B

IFNγ - интерферон γ IL - интерлейкин

MHC - главный комплекс гистосовместимости OSM - онкостатин М

PBS -фосфатный буфер

PCR - полимеразная цепная реакция PE - фикоэритрин

PerCP - перидинин-хлорофил протеин 5.5 Perf - Perforin

RQrelated quantity

Tcm - центральные клетки памяти TCR - Т-клеточный рецептор

Tem - претерминально-дифференцированные клетки памяти Temra - терминально-дифференцированные клетки памяти Th - Т- хелперы

Tn - наивные клетки

TREC - кольца реаранжировки генов α-цепи антигенраспознающего рецептора

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

100

1.Блинова Е.А. Количество TREC в периферических Т-лимфоцитах человека

внорме и при иммунопатологических состояниях: автореф. дис. … канд. биолог. наук. – Новосибирск, 2012. – 28 с.

2.Бойко Е. Л. Репродуктивное здоровье супружеских пар и его реабилитация при невынашивании беременности: автореф. дис. … д-ра мед. наук. – Иваново, 2006. – 48 с.

3.Воробьев А. А., Быковская С. Н., Пашков Е.П. Роль клеток-регуляторов CD4+CD25+ в развитии хронических инфекционных заболеваний // Вестник Рос. АМН. – 2006. – № 9–10. – С. 24–29.

4.Гасанова Д.Д. Дифференцировка и функциональная активность Т-хелперов при гипертензивных расстройствах у беременных: автореф. дис. … канд. мед. наук. – Иваново, 2012. – 28 с.

5.Доброхотова Ю. Э. инфекционные аспекты невынашивания: учебнометодическое пособие. – М., 2005. – 16с.

6.Донецкова А. Д. Новый подход к исследованию Т-лимфопоэза с помощью

7.Железникова Г. Ф. Регуляторные Т-лимфоциты в иммунном ответе на инфекцию // Журнал инфектологии. – 2011. – Т. 3, № 1. – С. 6–13.

8.Изучение колец реаранжировки генов α-цепи антигенраспознающего рецептора Т-лимфоцитов (TREC) как подход к оценке функции тимуса «in vivo» в норме и патологии / М. В. Головизнин [и др.] // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2010. – № 2/1. – С. 26–27.

9.Иммунологическая загадка беременности / Н. Ю. Сотникова [и др.]. – Иваново: МИК, 2005. – 272 с.

10.Кадырова Л.В., Сотникова Н.Ю., Кудряшова А.В. Дифференцировка Т- лимфоцитов в динамике неосложненной беременности и при развитии акушерской патологии // Медицинская иммунология. – 2011. – Т. 13, № 4–5.

– С. 424–425.