4 курс / Акушерство и гинекология / Кадырова_Л_В_Дифференцировка_Т_лимфоцитов_в_динамике_беременности

41

Таблица 2.3.1.

Количество проведенных исследований

42

Глава 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ДИНАМИКЕ НЕОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И У ЖЕНЩИН С РАЗВИВШИМСЯ ВПОСЛЕДСТВИИ САМОПРОИЗВОЛЬНЫМ ВЫКИДЫШЕМ

3.1.Особенности внетимической дифференцировки наивных Т-лимфоцитов

впопуляциях Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови при неосложненной беременности в динамике гестационного процесса

Тимус является основным источником наивных Т-клеток и играет ключевую роль в установлении и поддержании периферического Т-клеточного пула [161]. Известно, что беременность сопровождается инволюцией тимуса, выраженной в снижении его массы и клеточности, в основном за счет атрофии коркового слоя и истощения популяции кортикальных тимоцитов. Но это не вызывает изменений в абсолютном содержании периферических лимфоцитов на всем протяжении гестации [38].

Можно предположить, что во время беременности механизмом компенсации частичного подавления тимического пути развития лимфоцитов является процесс активации экстратимической дифференцировки Т-клеток.

Учитывая эти данные, мы провели изучение особенностей экспрессии ДНК TREC на поверхности лимфоцитов периферической крови, что позволяет выявить клетки, недавно вышедшие из тимуса, и, таким образом, оценить функциональную активность тимуса [65, 186]. Помимо этого, в нашей работе мы оценивали относительное содержание молекулы CD31, которая является маркером недавно мигрировавших из тимуса клеток, и также позволяют оценить функцию тимуса [129]. Как известно, только CD31+ лимфоциты в популяции наивных Т-клеток являются истинными ранними выходцами из тимуса, в то

43

время как при внетимической дифференцировке молекулы CD31 не экспрессируются наивными Т-лимфоцитами периферической крови [202]. На основании этих данных в настоящее время выделяют две фракции, получившие название тимических и центральных наивных Т-лимфоцитов – CD31+ thymic и

CD31- central [121].

Результаты, характеризующие особенности содержания наивных клеток в популяции периферических Т-хелперов в динамике неосложненной беременности, приведены на рисунке 3.1.1.

Нами было установлено, что в периферической крови женщин с неосложненным течением беременности, содержание наивных клеток в популяции периферических CD4+ лимфоцитов, начиная уже с 1 триместра беременности, было достоверно выше по сравнению с аналогичным показателем группы контроля (34,46±1,55%) и составило 38,98±1,58% (p<0,05). Максимальное повышение уровня Tn в популяции Т-хелперов периферической крови нами отмечалось в группе женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации относительно показателя небеременных женщин. Уровень наивных клеток во 2 триместре неосложненной беременности составил 42,07±2,36% (p<0,01). Достоверной разницы в содержании наивных клеток в популяции периферических CD4+ лимфоцитов во 2 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности по сравнению с аналогичным показателем группы беременных женщин 1 триместра гестации нами выявлено не было (p>0,05). В 3 триместре неосложненной беременности уровень клеток с фенотипом CD45RA+CD62L+ в популяции периферических Т-хелперов оставался достоверно более высоким по сравнению с аналогичным показателем группы доноров и составил 39,74±1,50% (p<0,05). Относительно 2 триместра гестации достоверных различий в содержании Tn в популяции CD4+ лимфоцитов периферической крови в 3 триместре беременности выявлено не было (p>0,05) (рис. 3.1.1.).

Рис. 3.1.1. Содержание наивных клеток в популяции периферических CD4+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05;*** - p<0,01).

Результаты, характеризующие особенности содержания наивных клеток в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов в динамике гестационного процесса, приведены на рисунке 3.1.2.

Анализ данных в содержание наивных клеток в 1 триместре неосложненной беременности в популяции CD8+ лимфоцитов периферической крови выявил, что данный показатель был достоверно выше аналогичного параметра группы контроля (33,19±1,49%) и составил 38,18±1,97% (p<0,05). В группе женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации в популяции периферических ЦТЛ нами также отмечалось достоверное повышение содержания наивных клеток по сравнению с аналогичным показателем группы небеременных женщин, которое составило 39,93±2,48 (p<0,05), при отсутствии достоверных различий по сравнению с аналогичным параметром группы женщин 1 триместра неосложненной беременности (p>0,05). Содержание клеток с фенотипом CD45RA+CD62L+ в 3 триместре неосложненной беременности составило 37,55±2,20 и не имело достоверных различий по сравнению, как с

45

группой доноров, так и с группой беременных женщин 2 триместра гестации

(p>0,05 в обоих случаях) (рис. 3.1.2.).

Рис. 3.1.2. Содержание наивных клеток в популяции периферических CD8+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности

* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05).

Данные, характеризующие содержание CD31+thymic и CD31-central клеток в популяции наивных Т-хелперов у женщин с неосложненным течением беременности в динамике гестационного процесса представлены в таблице 3.1.1.

Проведенный статистический анализ содержания наивных клеток с фенотипом ранних эмигрантов из тимуса (CD31+thymic) в популяции периферических CD4+ лимфоцитов выявил достоверное снижение данного показателя в равной степени во все сроки неосложненной беременности по сравнению с аналогичным параметром группы небеременных доноров (p<0,001 в 1 триместре, p<0,01 во 2 и 3 триместрах). Содержание CD31+thymic в пуле наивных Т-хелперов в 1, 2 и 3 триместрах беременности достоверно не различалось между собой (р>0,05 во всех случаях) (таблица 3.1.1.).

46

Таблица 3.1.1. Относительное содержание CD31+ thymic и CD31- central клеток периферической крови

в популяции наивных CD4+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности

В скобках дано число проведенных исследований.

*- коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных женщин (*** - p<0,01;**** - p<0,001).

Уровень CD31-central клеток в популяции периферических наивных CD4+ лимфоцитов на протяжении всей беременности превышал аналогичный показатель в группе небеременных доноров (p<0,001 в 1 триместре, p<0,01 во 2 и 3 триместрах). Нами не было выявлено статистически значимых различий показателя CD31-central клеток в зависимости от срока беременности в 1, 2 и 3 триместрах гестации (р>0,05 во всех случаях) (таблица 3.1.1.).

Данные, характеризующие содержание CD31+thymic и CD31-central клеток в популяции наивных цитотоксических Т-лимфоцитов у женщин с неосложненным течением беременности в динамике гестационного процесса представлены в таблице 3.1.2.

Впопуляции периферических наивных CD8+ лимфоцитов в группе женщин

снеосложненным течением беременности нами отмечалось снижение количества CD31+thymic клеток на протяжении всего гестационного процесса по сравнению с аналогичным показателем группы небеременных доноров (p<0,001 во всех случаях).

47

Таблица 3.1.2. Относительное содержание CD31+thymic и CD31-central клеток периферической крови

в популяции наивных CD8+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности

В скобках дано число проведенных исследований.

*- коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (**** - p<0,001);

х - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 1триместра гестации (хх - p<0,02).

Кроме того, во 2 триместре неосложненной беременности в популяции периферических наивных ЦТЛ достоверно снижался уровень CD31+thymic клеток по сравнению с соответствующим показателем женщин 1 триместра неосложненной беременности (p<0,02). В группе женщин с неосложненным течением беременности 3 триместра гестации нами не было выявлено достоверной разницы в содержании CD31+thymic клеток в пуле наивных цитотоксических Т-лимфоцитов по сравнению с аналогичным показателем группы женщин 2 триместра неосложненной беременности (p>0,05) (таблица

3.1.2.).

Уровень CD31-central клеток в популяции наивных CD8+ лимфоцитов периферической крови во все сроки неосложненной беременности был достоверно выше аналогичного показателя группы небеременных доноров (p<0,001 во всех случаях). Причем максимальное повышение данного показателя

48

отмечалось во 2 триместре беременности. Кроме того, в группе женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации достоверно повышался уровень CD31-central клеток в популяции периферических наивных CD8+ лимфоцитов по сравнению с аналогичным показателем группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (p<0,02). Достоверных различий в содержание CD31-central клеток в популяции периферических наивных ЦТЛ в 3 триместре беременности относительно 2 триместра гестации выявлено не было (р>0,05) (таблица 3.1.2.).

С целью уточнения особенностей функционирования тимуса при неосложненной беременности в динамике гестационного процесса нами была проведена оценка уровня экспрессии ДНК TREC методом ПЦР в режиме реального времени. Полученные данные представлены на рисунке 3.1.3.

Сравнительный анализ особенностей экспрессии ДНК TREC в общем пуле периферических Т-лимфоцитов в 1 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности выявил, что данный показатель существенно не отличался от аналогичного параметра группы небеременных фертильных доноров и составил 1,07±0,35 (p>0,05). Уровень экспрессии ДНК TREC лимфоцитами периферической крови в группе женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации составил 0,20±0,10, что достоверно ниже, чем в группе небеременных женщин и группе женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (р<0,05 в обоих случаях). Результаты исследования уровня ДНК TREC в общем пуле периферических лимфоцитов в 3 триместре неосложненной беременности показали, что экспрессия исследуемого гена лимфоцитами достоверно повышалась по сравнению с аналогичным показателем женщин с неосложненным течением беременности 2 триместра гестации и составила 0,93±0,15 (р<0,001) и практически не отличалась от соответствующего показателя небеременных доноров и беременных женщин 1 триместра гестации (p>0,05 в обоих случаях) (рисунок 3.1.3).

49

RQ

2

1

0

1 триместр 2 триместр 3 триместр

Рис. 3.1.3. Экспрессия ДНК TREC в общем пуле периферических Т-лимфоцитов в динамике неосложненной беременности (результаты представлены как n-кратные различия по сравнению с показателем в группе небеременных доноров).

Таким образом, в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов при беременности отмечалось: достоверное увеличение уровня наивных клеток, сохранявшееся на протяжении всего гестационного процесса в пуле CD4+ лимфоцитов и до 2 триместра в пуле CD8+ лимфоцитов; снижение уровня CD31+thymic клеток и повышение уровня CD31-central в пуле Т-хелперов и ЦТЛ на всем протяжении гестационного процесса. В динамике гестационного процесса отмечалось снижение уровня ДНК TREC периферическими Т-лимфоцитами во 2 триместре беременности относительно 1 триместра гестации и небеременных доноров, а также увеличение экспрессии исследуемого гена в 3 триместре беременности по сравнению со 2 триместром. Эти данные могут свидетельствовать об угнетении тимической продукции и активации экстратимического пути дифференцировки клеток.

50

3.2.Особенности дифференцировки клеток памяти в популяциях Т-хелперов

ицитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови при неосложненной беременности в динамике гестационного процесса

Плацентарный барьер, ограждающий иммунную систему плода от воздействия материнских иммунокомпетентных клеток, не является абсолютно непроницаемым для антигенов плода [18, 27, 66, 92, 113, 183, 184, 149, 167].

Предполагается, что стимуляция иммунной системы матери АГ плода является необходимым фактором нормального развития беременности, а избыточное поступление АГ, при нарушении барьерной функции плаценты, приводит к формированию акушерской патологии [167, 152]. Это позволило нам предположить, что при беременности могут формироваться специфические клоны лимфоцитов, реагирующие на АГ плода, с последующим образованием пулов клеток памяти. В связи с этим нами было проведено исследование особенностей дифференцировки Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов с учетом формирования клеток памяти в периферической крови женщин с неосложненным течением беременности в динамике гестационного процесса.

В таблице 3.2.1. представлены данные по содержанию центральных (Tcm), претерминально-дифференцированных (Tem) и терминальнодифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических Т- хелперов в динамике неосложненной беременности.

Как показал сравнительный анализ данных в 1 триместре неосложненной беременности, достоверных отличий в содержании клеток памяти, находящихся на различных этапах дифференцировки, в популяции Т-хелперов периферической крови по сравнению с аналогичными показателями группы небеременных доноров нами выявлено не было (р>0,05 во всех случаях). В группе женщин с неосложненным течением беременности во 2 триместре гестации в популяции периферических CD4+ лимфоцитов отмечалось достоверное снижение уровня CD45RA-CD62L+ клеток по сравнению с аналогичным показателем небеременных доноров (p<0,02), содержание CD45RA-CD62L- и