3. Основы патологогистологической техники Этапы приготовления гистологических препаратов

1. Взятие патологического материала. Материал должен быть свежим. Кусочки органа для обычных гистологических исследований должны быть размером 1x1x1 см. При взятии материала учитывают анатомические особенности органа. Кусочки вырезают из всех слоев органа, а в измененных органах - центральные и периферические участки пораженной ткани, на границе с нормальными участками. В полостных органах вырезают небольшие участки стенки органа, расправляют их со стороны серозной оболочки на плотной бумаге или картоне для быстрой фиксации слизистой оболочки.

2. Фиксация патматериала. Вырезанные кусочки органов переносят в фиксирующие жидкости, налитые в стеклянные банки. Фиксирующую жидкость берут в объеме, превышающем в 10 раз объем кусочков, несколько раз ее меняют. В банку опускают этикетку с номером патматериала. Определение завершения фиксации: равномерное уплотнение кусочков, одинаковый сероватый цвет с поверхности и на разрезе. Приготовление 10%-ного раствора формалина: берут 10 мл продажного формалина на 90 мл воды (соотношение 1:9), в результате получается 100 мл 10%-ного раствора формалина. Для специальных методов окраски используют в качестве фиксирующих жидкостей 96%-ный этиловый спирт, жидкость Карнуа, ацетон и др.

3. Уплотнение патматериала. Для приготовления гистосрезов из фиксированных кусочков применяют их замораживание углекислотой или на полупроводниковых замораживающих столиках, заливку в желатин, парафин, целлоидин, а для электронной микроскопии — заливку в эпоксидные смолы.

4. Приготовление гистосрезов на замораживающем или санном микротомах. Снятие их с микротомного ножа, расправление, нанесение на предметное стекло.

5. Окраска гистосрезов и заключение их в консервирующую среду (пихтовый бальзам, глицерин-желатин).

Для окрашивания гистосрезов применяют ядерные краски — гематоксилин, кармин, тионин, метиловый зеленый и цитоплазматические краски — эозин, кислый фуксин, пиронин, пикриновая кислота и др.

Методы окраски: гематоксилин + эозин, гематоксилин + пикрофуксин (метод Ван Гизона), по Перлсу на железосодержащие пигменты, суданом-3 на жир, по Шабадашу на гликоген, по Браше на РНК и др.

Демонстрация гистопрепаратов, окрашенных гематоксилин-эозином, по Ван Гизону, суданом-3, по Перлсу, по Браше, по Шабадашу.

4. Основы музейной техники Этапы приготовления музейного препарата

1. Взятие патматериала. Берется орган целиком или часть его, опухоль или часть ее.

2. Фиксация в формалино-солевой смеси (100 мл продажного формалина + 5 г хлористого калия + 30 г уксуснокислого калия (натрия) + 1000 мл воды).

3. Восстановление естественной окраски 96%-ным этиловым спиртом.

4. Хранение препарата в глицериново-солевой смеси (глицерин х/ч — 600 мл, уксуснокислый калий (натрий) - 400 г, вода - 1000 мл).

5. Схемы описания органов, патологических очагов в них, серозных полостей

Схема описания компактных органов — печени, почек, легких, селезенки, лимфоузлов и др. Определяют в органе: величину (объем, масса), форму, консистенцию, цвет, рисунок строения на разрезе, характер поверхности разреза.

Величина (объем, масса) зависит от возраста, вида и породы животного. При патологических процессах она увеличивается или уменьшается. Величину органа можно дать в цифровых выражениях: длина, ширина, толщина в см, масса — в г, кг.

В практических условиях, чтобы определить увеличение или уменьшение органа, обращают внимание на его капсулу и края. В увеличенном органе капсула напряжена, при разрезе паренхима выбухает, края разрезанной капсулы не сходятся, острые края органа притуплены или округлены. Если орган уменьшен, то капсула его сморщена, края заострены.

Легкие не имеют постоянной величины (объема), поэтому при осмотре определяют степень их спадения. Спавшимися они бывают при ателектазе не спадаются — при воспалении, отеке, эмфиземе и т.д.

В сердце определяют величину полостей (расширены или сужены), а также толщину стенок правого и левого желудочков: соотношение толщины стенки правого и левого желудочков в норме 1:3, при гипертрофии стенки левого желудочка — 1:4, при ее атрофии — 1:2.

Форма органа может быть измененной. Например, при циррозе печени и склерозе почек поверхность этих органов принимает зернистый, бугристый или узловатый (печень) вид. В сердце при расширении желудочков верхушка бывает не заостренной, как в норме, а закругленной.

Консистенция органа зависит от органа и характера патологического процесса в нем. Она может быть твердой, плотной, упругой, дряблой, тестоватой, крепитирующей, пушистой. Например, при разрастании соединительной ткани в печени и почках (циррозах) консистенция их становится плотной и даже твердой, а при зернистой и особенно жировой дистрофии — дряблой, мягкой, орган легко рвется.

Консистенция легких в очагах воспаления и некроза плотная, при отеке — тестоватая (ямка, образовавшаяся при надавливании пальцем, выравнивается медленно); при эмфиземе — воздушная, пушистая, крепитирующая. В селезенке консистенция может быть плотной (гиперплазия), мягкой (при сепсисе), резиноподобной (при стрептококкозе).

Цвет органа определяется наличием в нем физиологических или патологических пигментов, а также степенью кровенаполнения.

При остром воспалении и венозной гиперемии цвет органов (кожи, легких, печени, почек и др.) красный или синюшно-красный; при застойном инфаркте – черно-красный; в септической селезенке (геморрагическом сплените) — темно- или черно-красный; при жировой дистрофии печени — желто-глинистый; при зернистой дистрофии почек — серый, серо-коричневый; при меланозе легких - черный; при бурой атрофии печени — бурый (липофусцин) и т.д.

Рисунок органа. В печени и легких на разрезе определяют дольчатое строение, в селезенке - рисунок лимфоидных узелков и трабекул, в лимфоузлах – лимфоидных узелков, в сердечной и скелетных мышцах — волокнистое строение, в почках и надпочечниках — четкость границы между корковым и мозговым слоями, в головном мозгу — границу между белым и серым веществом, в спинном мозгу — форму крыльев “бабочки” (серое вещество), в тимусе, печени и молочной железе — рисунок долек. В печени при венозной гиперемии (бабезиоз КРС, ИНАН лошадей) выражен рисунок мускатного ореха. При патологических процессах рисунок строения чаще затушеван (стерт), реже — усилен (например, рисунок фолликулов в селезенке усилен при ее лимфоидной гиперплазии).

Кроме того, в органах определяют кровенаполнение сосудов (полнокровные при гиперемии, пустые при анемии), характер жидкости, стекающей с поверхности разреза (кровь, красная или белая пенистая жидкость в легких, слизь, гной и др.), состояние поверхности разреза - сухая или влажная, блестящая или матовая, гладкая, шероховатая или зернистая.

При осмотре селезенки отмечают также степень размягчения пульпы (стекает при сибирской язве, легко соскабливается ножом при сепсисе, роже свиней и др., не соскабливается в норме). При исследовании легких выявляют плавучесть в воде (воздушность): кусочки воспаленных долей и при ателектазе тонут в воде; отечные легкие плавают, полностью погрузившись в воду; при эмфиземе - плавают на поверхности воды, в норме - плавают, погрузившись на 30-50%.

Схема описания патологического процесса: сущность, причины и механизм развития, классификация, локализация, течение; патоморфология: макроскопические, гистологические, иммуноморфологические, иммунопатологические, ультраструктурные и гистохимические изменения; исход, значение для организма; болезни, при которых наблюдается общепатологический процесс.

Схема описания болезни: определение болезни; этиология (и тропизм возбудителя), патогенез и клинико-эпизоотологические особенности; патологоанатомический диагноз; диагноз: нозологический и дифференциальный.

Схема описания патологических очагов в органе: локализация очагов, количество их, величина, форма, консистенция, цвет, рисунок строения в очаге, реакция со стороны окружающих тканей.

Локализация очагов — в легких: в передних, средних или задних долях, с обеих сторон или с одной стороны, в коже — на месте какой-либо стати, например шеи, подгрудка, бедра, спины и т.д., в почках — в корковом или мозговом веществе и т.д.

Количество очагов. Они могут быть единичными или множественными.

Величина очагов может быть различной. Очаги некрозов - субмилиарные (с маковое зерно: 1 — 2 мм в диаметре), милиарные - просовидные (2 - 5 мм), нодулярные (5 - 10 мм), нодозные (1-3 см), в виде крупных очагов в диаметре до 10 см, очаговый и диффузный некроз в слизистых оболочках в виде струпьев или отрубевидного налета, тотальный некроз в почках. Воспаление в легких - ацинозные очаги (1-5 мм), лобулярные (5 - 10 мм), лобарные (с охватом целой доли или нескольких долей). Кровоизлияния - точечные, пятнистые, полосчатые, диффузные, кровоподтеки разных размеров, гематома размером от 2 мм до 10 см в диаметре. Опухоль — размер от 1 см до 30 см в диаметре и больше. Абсцесс - 2 см в диаметре и т.д. на ней; состояние подслизистой, мышечной и серозной оболочек.

Форма очагов может быть круглой, узловатой, грибовидной, треугольной, квадратной, ромбовидной, неправильной.

Консистенция очага — твердая, плотная, мягкая, слизистая, тестоватая, крепитирующая.

Цвет — белый, красный, коричневый, черный, бурый, желтый, зеленый и т.д. (в зависимости от наличия в них физиологических или патологических пигментов).

Рисунок строения — обычно стерт, но может принимать другой вид по сравнению с нормальным органом, например, в фиброме и лейомиоме — перекрещивание пучков ткани.

Реакция вокруг очага может быть неодинаковой. Острые некрозы окружены красного цвета воспалительной демаркационной зоной, хронические некрозы инкапсулированы. Ареактивные некрозы в слизистых оболочках пищеварительного тракта (при стахиботриотоксикозе, фуза-риотоксикозе) окаймлены кровоизлияниями, острые абсцессы окружены пиогенной зоной, хронические — капсулой. Могут развиваться секвестры, когда между капсулой и очагом некроза накапливается гнойный экссудат.

Схема описания полостных органов (желудка, кишечника, матки, мочевого пузыря и др.): положение органа; общий вид и размер его; содержимое полости (количество, консистенция, состав, цвет, запах); в слизистой оболочке - вид поверхности, толщина, цвет, складчатость, гладкость, влажность, блеск, характер наложений на ней или повреждений; состояние подслизистой, мышечной и серозной оболочек.

Положение органа — нормальное или смещенное.

Общий вид и размер — изменены или не изменены. В кишечнике могут быть стриктуры (перетяжки), сужения, расширения. При острой тимпании у крупного рогатого скота рубец резко расширен и переполнен газами.

Содержимое органа. В желудке — кормовые массы, свернувшаяся кровь, фибрин. В кишечнике – кормовые массы, фибрин, красного цвета жидкая масса, свертки крови, гельминты и т.д.

Состояние слизистой оболочки — нормальная, уплотненная, разрыхленная, серого цвета, покрасневшая очаго-во или диффузно, на поверхности слизь, эрозии, язвы, фибрин, кровоизлияния, атрофия или гипертрофия (утолщение), перфорация стенки.

Подслизистая, мышечная и серозная оболочки — серозный или геморрагический отек подслизистой оболочки, гипертрофия или атрофия мышечной оболочки, некроз и перфорация стенки. Пласт фибрина, кровоизлияния, очаговая воспалительная гиперемия серозной оболочки.

Схема описания серозных полостей (брюшной и грудной полостей, сердечной сорочки): положение органов - нормальное или смещенное; постороннее содержимое - количество, состав, прозрачность, цвет, запах, примеси крови, фибрина, кормовых или каловых масс, паразитов и т.д.; состояние серозных оболочек (плевры, брюшины, эпи- и перикарда): влажность или сухость, блеск или матовость, гладкость или шероховатость, цвет, характер наложений, спайки и др.

Положение органов — нормальное или отмечено смещение (инвагинация, заворот, выпадение).

Постороннее содержимое серозной полости — прозрачная белая отечная жидкость (серозный транссудат) при водянке; красная мутная отечная жидкость (геморрагический транссудат); свернувшаяся красного цвета кровь (при разрыве крупных сосудов); серозно-фибринозный, геморрагический, гнойный экссудат при воспалении серозной оболочки (серозная оболочка очагово покрасневшая, с кровоизлияниями, матовая, покрыта нежными пленками фибрина, гноем); пищевые или каловые массы при перфорации стенки желудка или кишечника; инородные предметы (при травме сетки, желудка или брюшной стенки); гельминты, паразиты (цистицерки) и т.д.

Серозная оболочка — в норме влажная, блестящая, гладкая, полупрозрачная, бледно-серого цвета. При водянке она не изменена. При воспалении - влажная, матовая, шероховатая, покрасневшая, с кровоизлияниями, покрыта пленками фибрина, гнойным экссудатом. При хроническом воспалении отмечаются спайки и утолщения серозной оболочки вследствие разроста соединительной ткани.