Основы технологии клонирования

В соответствии с традиционной трактовкой, термин клонирование предполагает комплекс методов, позволяющих получить генетически однородных особей или индивидов, т.е. имеющих идентичный генотип (набор генов) и происходящих от одного предка. Клон - это группа генетически идентичных организмов.

Значение экспериментов Вилмута с клонированием овцы состоит в том, что он впервые доказал возможность создания живого организма (человека) из одной клетки. Лишь несколько десятилетий назад ботаники научились выращивать из одной клетки целое растение. Использование генной инженерии привело к появлению трансгенных растений и животных, содержащих в своем геноме чужеродный генетический материал; серьезный прогресс наметился в области искусственного оплодотворения чело­века и изменения его пола.

В ветеринарии до последнего времени применялись такие приемы клонирования, как:

1) микрохирургическое разделение ранних эмбрионов («сплитинг») с последующей подсадкой их самкам-реципиентам для получения однояйцевых двойняшек;

2) введение ядра соматической клетки в оплодотворенную яйцеклетку (зиготу) с заранее удаленным собственным ядром для обеспечения последующего эмбрионального развития. В последнем случае в эксперименте использовали ядра соматических клеток, изъятых из ранних эмбрионов, а не у взрослых животных.

Описания технологии были отработаны как за рубежом (в США, Германии), так и у нас в стране (в НИИ Российской академии сельскохозяйственных наук).

Таким образом, получение клонов животных имеет достаточно длительную историю и разработанные технологии. Именно поэтому создание овцы Долли является, по мнению многих ученых, в том числе и российских, лишь обновленным вариантом разрабатывавшейся ранее методики.

Необходимо подчеркнуть также, что опыты Вилмута доказали возможность генетической реверсии дифференцированных соматических клеток до стадии мультипотентных клеток, что ранее считалось невероятным и что, в сущности, является открытием нового биологического феномена.

Разработанный Вилмутом вариант технологии клонирования состоит из ряда этапов с использованием клеточной инженерии и трансплантации.

I. Манипуляции с донорской клеткой.

Соматические клетки, взятые из вымени овцы Финн Дорсет, помещали в культурную среду с низким содержанием питательных веществ. Заторможенное таким образом клетки перестают делиться, их гены утрачивают активность

II. Манипуляции с яйцеклеткой.

В то же время у другой овцы - шотландской Блэкфейс забирали неоплодотворенную яйцеклетку, из которой удаляли ее ядро (и соответственно ДНК), оставляя нетронутым цитоплазму яйцеклетки со всеми действующими механизмами, необходимыми для обычного развития эмбриона.

III. Слияние донорской клетки и безъядерной яйцеклетки. Обе клетки (от овец Финн Дорсет и Блэкфейс) помещали рядом друг с другом в сосуде с кулыуральной средой и с помощью электрического разряда вызывали их слияние. Таким образом, теперь ядром клеточного гибрида становится ядро донорской соматической клетки, а цитоплазма обеих клеток сливается воедино.

Действие второго электрического разряда заставляет «работать» механизм естественного оплодотворения, использовать весь метаболический потенциал яйцеклетки, а также оказывается импульсом к последующему делению клеточного гибрида.

IV. Спустя 6 дней сформировавшийся эмбрион, прошедший через ряд клеточных делений, имплантируют в матку второй овцы породы Блэкфейс.

V. В результате у овцы Блэкфейс появилась овечка Долли - генетическая копия исходной овцы Финн Дорсет

Проект Вилмута осуществлялся четырьмя исследователями в полном секрете. В 277 опытах было получено только 29 эмбрионов, выживших в течение более чем 6 дней. До дня рождения удалось дойти только Долли. По мнению ученых, решающим в успехе эксперимента был тот факт, что Вилмут приостановил деление донорской соматической клетки перед ее слиянием с яйцеклеткой.

К настоящему времени получено более 40 особей клонированных и трансгенных животных.

Клонирование животных

Клонирование животных имеет большое теоретическое и практическое значение для биологии и медицины. Наличие генетически идентичных клонированных животных, практически недостижимое даже при традиционном инбридинге, актуально для тестирования медицинских препаратов и их побочного действия.

Животные с одинаковым геномом (клоны) являются оптимальным объектом для установления влияния факторов внешней среды и генома на фенотип животных. Эта технология важна для повышения эффективности селекции животных, т.к. позволяет копировать геном наиболее выдающихся племенных особей, оценка генотипов которых трудоемка. При обычных способах размножения с высоким размахом комбинативной изменчивости такая оценка невозможна.

В сельском хозяйстве генерации клонов необходимы для оценки продуктивности скота, качества молока и т.д. Получение товарных стад клонированных животных существенно упрощает технологию их эксплуатации. Эмбрионы с оптимальным набором генетических признаков могли бы быть выращены как клоны и использованы для классической репродукции.

Клонирование как технология может быть использовано также для сохранения биоразнообразия животных и растений.

Развитие технологии клонирования животных предполагает возможность получения трансгенных клонов, например, с повышенной продуктивностью или секрецией молока. Трансгенные овцы Полли и Рози были получены в Шотландии в 1998 г.

Трансгенные свиньи с блокированными локусами гистосовместимости (НLА МLС) или с заменой одного или двух генов рассматриваются в перспективе в качестве источников донорских органов и тканей для ксенотрансплантации у человека.

Описанный эксперимент по клонированию овцы Долли может быть применен в принципе к любому другому виду млекопитающих, включая человека. По мнению ученых ВНИИ генетики и разведения сельскохозяйственных животных, клонировать человека не сложнее, чем корову

Сегодня Клонирование человека интересует мировое сообщество не только с научных и биологических позиций. Является ли эта возможность юридически разрешенной и допустимой с точки зрения морали? - вот что становится ключевой правовой и этической проблемой.

Клонирование человека

Хотя клонирование человека и столкнется с серьезными техническими трудностями, в принципе, нет оснований сомневаться в возможности положительного научного решения проблемы в ближайшее время. Сама идея клонирования человека открывает большие перспективы для человечества. Однако вместе с тем она таит и большие опасности для него.

Получение идентичных генетических копий конкретного взрослого индивидуума дает возможность использовать клетки и ткани (органы) для трансплантаций с гарантией отсутствия нежелательных иммунологических реакций. Такой материал может быть полезен, в том числе для целей омоложения, а также для лечения большого числа хронических заболеваний человека (см. следующую статью настоящего сборника).

Нельзя упускать из виду научное значение клонирования для лучшего понимания процессов развития и дифференциации клеток человека.

Вместе с тем, реальность клонирования человека порождает, как уже было упомянуто, серьезные этические проблемы, связанные с сохранением структуры традиционного общества. Противники клонирования прогнозируют создание каст людей, специально сориентированных на выполнение определенных функций, порождение существ-«копий», которые будут живыми складами донорских органов и тканей для своих генетических «оригиналов», воссоздание умерших «гениев и злодеев». В Рекомендации Национальной консультативной комиссии по биоэтике (США, 1997), самую негативную реакцию вызывает возможность нанесения ущерба кло­нированным детям, как физического, так и психологического. Такие дети могут страдать от ущемленного чувства индивидуальности и личной автономии. Высказываются также опасения по поводу деградации родительских отношений и семейной жизни. И практически все согласны с тем, что существующий ныне риск нанесения физического ущерба детям при клонировании путем пересадки ядер соматических клеток оправдывает сегодня запрещение экспериментов в этой области. В настоящее время экспериментирование по использованию технологии клонирования с целью создания потомства преждевременно, т.к. оно чревато неприемлемым риском для развивающегося ребенка. Отмеченное у овцы Долли заболевание суставов несомненно связано с нежелательными последствиями клонирования, недостаточно совершенной технологией клонирования.

Практика клонирования может открыть дорогу евгеническим проектам или побудить кого-либо рассматривать других людей в качестве объектов для манипулирования, а не как личностей, что приведет к разрушению важных социальных ценностей.

Отношение церкви к клонированию человека

В Рекомендации Национальной консультативной комиссии по биоэтике (США, 1997) отмечается, что религиозные позиции по вопросу о клонировании человека отличаются многообразием как посылок, так и методов аргументации и выводов. Для позиций иудаизма, католицизма, протестантизма и ислама характерен ряд главных тем, таких, как ответственное доминирование человека над природой, достоинство и предназначение человека, вопросы рождения потомства и семейной жизни. Одни религиозные мыслители считают использование клонирования с целью получения потомства изначально аморальным. Другие утверждают, что такая цель клонирования может быть морально оправдана при определенных обстоятельствах, но считают, что оно должно строго регулироваться во избежание злоупотреблений.

По замечанию епископа Коптской Церкви, «Ислам и христианство отрицают клонирование человека». Ватикан заявил о неприемлемости вмешательства в процессы репродукции, как в генетический материал человека, так и животного. Муфтий Египта и глава Коптской Церкви заявили, что такой вид научной деятельности противоречит моральным принципам и божественным законам.

По мнению муфтия шейха Нас Фарида, «клонирование людей противоречит основным принципам религии». «Бог создал нас совершенными, и невозможно, чтобы человек вносил свои изменения, пытаясь повторить божественный акт творения».

До последнего времени в целом позиция Русской Православной Церкви по вопросам клонирования человека оставалась неопределенной.

По мнению О. Володина (Чаплина), возглавляющего Секретариат по взаимоотношениям церкви и общества Отдела внешних сношений Московского Патриархата, «наука безусловно должна развиваться, но под контролем общества и государства. Обеспечение человечества продовольствием, развитие сельского хозяйства — благие цели, однако необходимо всегда помнить о том, что целостность природы, которая есть творение Божие, должна быть сохранена. При определенных условиях все может быть допустимо — и клонирование животных и растений, и пересадка органов. Но человеку следует быть полностью уверенным в том, что своими действиями он не навредит ни себе, ни окружающей среде, ни будущим поколениям всего живого. Рождение человека — промысел Божий, и злоупотреблять этими методами не стоит».

В заявлении Православной Церкви в Америке (11 марта 1997 г.) о современных разработках в технологии клонирования сказано следующее: «Представители Православной Церкви во всем мире остаются верными строгости понимания сакральности человеческой жизни: каждый человек создан как уникальная личность «по образу Божию». Поэтому подавляющее большинство православных этиков настаивает, что все формы евгеники, включая манипулирование с человеческим генетическим материалом, вне терапевтических целей в нравственном отношении отвратительны и угрожают человеческой жизни и благополучию...»

Этот документ Православной Церкви дает представление о сути позиции по отношению к клонированию человека. Логика рассуждения здесь изложена довольно четко: христианскую общественность беспокоит возможность тиражирования, потребительского отношения человека к человеку через создание «человеческих запасников». Отсутствие правового регулирования может способствовать стремлению к некоему «высшему классу», или породе, людей; любая форма искусственного размножения является «технологической» поддержкой инвертированных лиц (например, гомосексуалистов).

Архиерейский Собор Православной Церкви, проведенный летом 2000 г. в Москве, дал окончательную отрицательную оценку возможности применения технологии клонирования к человеку. В его решениях клонирование человека рассматривается как «разрушительная для общества идея, «тиражирование» людей с заданными параметрами - желательными для приверженцев тоталитарных идеологий». «Клонирование человека способно извратить естественные основы деторождения, кровного родства, материнства и отцовства... Крайне опасны... психологические последствия клонирования. Человек, появившийся на свет в результате такой процедуры, может ощущать себя не самостоятельной личностью, а всего лишь «копией» кого-то из живущих или ранее живших людей. Побочными результатами экспериментов с клонированием человека неизбежно стали бы многочисленные несостоявшиеся жизни и, вероятнее всего, рождение большого числа нежизнеспособного потомства».

Вместе с тем Архиерейский Собор уделил внимание и перспективам технологии, не направленной на человека, отмечая, что «клонирование изолированных клеток и тканей организма не является посягательством на достоинство личности и в ряде случаев оказывается полезным в биологической и медицинской практике».

Международные подходы к решению этических

и правовых проблем клонирования

Весь мир откликнулся на феномен клонирования. По данным одного из опросов, проведенных в США в 1997 г., 87% американцев считают, что клонирование человека должно быть поставлено вне закона. В мае того же года Институт социологического анализа провел общероссийский опрос с участием 1600 респондентов. Выяснилось, что 55% россиян считают клонирование недопустимым и 24% полагают, что при определенных условиях оно может быть разрешено.

Проблема обострилась после провокационного заявления чикагского эмбриолога Ричарда Сида о том, что он берется за клонирование человека и собирается превратить это в выгодный бизнес. По его словам, при законодательных барьерах в США он найдет признание, финансирование и место для проведения своих опытов в странах типа Мексики, с еще неосвоенным право­вым полем.

Очень важно, что уже в январе 1998 г. мексиканское правительство дало отпор заявлению Сида, отвергнув его притязания на работу по клонированию человека на территории страны. Это означает, что даже страны со слабо развитым законодательством стремятся к гармонизации своих социально-политических решений в этой области с мировыми законодательными инициативами.

В Европе, США, Японии были предприняты политические и юридические меры, призванные ограничить попытки клонирования человека. Возможность такой быстрой реакции обусловлена тем, что во многих странах уже созданы механизмы и структуры, осуществляющие мониторинг новых биомедицинских технологий и наделенные полномочиями для решений этического и правового характера.

Правовое поле в области клонирования человека не может, конечно, регулировать саму науку, оно касается норм соблюдения конституционных прав человека, регулирования деятельности и отношений в связи с этой проблемой, имеющей как научные, так и социальные аспекты.

Каковы будут права клонированных людей, как идентифицировать отцовство при вариантах принадлежности ядра исходной соматической клетки, с которого начинается манипулирование? Клонирование как технология биомедицины и научное открытие подпадает под законы об охране интеллектуальной собственности. За рубежом должно быть усовершенствовано законодательство по контролю над экспериментированием на частной базе. В связи с возможным «подпольным» бизнесом по клонированию людей необходимо пересмотреть определенные разделы уголовного права.

В США отношение к клонированию человека приобрело резко отрицательный характер. Президент Б. Клинтон охарактеризовал в Конгрессе технологию клонирования как «непроверенную, опасную и морально неприемлемую». Действия Сида, по его словам, лишь подчеркивают остроту и необходимость срочного создания системы правового регулирования в области клонирования человека.

Подготовлен целый ряд законопроектов о запрете на клонирование человека с оговоркой о необходимом пересмотре закона через каждые 5 лет. Такой пересмотр предусматривает неизбежность динамики взглядов общества на проблему, как в социальном, так и в научном аспекте.

Проект Закона, внесенного в Сенат в феврале 1998 г., запрещает использование федеральных средств на «исследования, связанные с клонированием человеческих индивидуумов». Необходимо обратить внимание на тот факт, что запрет на финансирование работ по клонированию касается только бюджетных ассигнований, открывая путь частным исследованиям. Это может быть рассмотрено одновременно как открытие возможности для совершенствования технологии и недопущение отставания Америки в перспективной области науки.

В двух других законопроектах, внесенных в Сенат в 1999 г., запрещается финансирование «исследований, связанных с использованием человеческих соматических клеток в процессе клонирования человека», и налагается штраф в 5 000 долларов «на каждого, кто занимается продукцией человеческих клонов».

Предполагается корректировка законов введением запрета на использование технологии клонирования в исследованиях человеческих эмбрионов. Научный Комитет Белого дома одобрил проекты законов с предложением некоторых поправок и переработки.

Одним из важнейших предложений Клинтона является объявление на несколько лет эффективного добровольного моратория в отношении клонирования человека.

12 января 1998 г. в Париже 17 (а к настоящему времени 27) европейских стран подписали Протокол, дополнительный к Конвенции по правам человека и биомедицине, который запрещает клонирование человека с репродуктивными целями. Это, по сути, первое международное соглашение в данной области.

По словам Жака Ширака, международный запрет - результат январской встречи в Париже — станет существенной мерой для приостановки миграции технологии в страны с менее строгим регулированием.

Англия и Германия не смогли подписать Протокол — с одной стороны, по формальным причинам, т.к. заранее не подписали саму Конвенцию. С другой стороны, помешали этому и период изменений в составе правительства в Англии и некоторое недовольство Гер­мании содержанием Конвенции.

Однако английским и немецким законодательством в области репродукции и клонирования создание человеческого эмбриона с помощью переноса ядер было запрещено.

За последние месяцы 2000 г. в мире произошел явный сдвиг представлений о допустимости работ с клетками клонированных эмбрионов человека. По современным научным прогнозам, эмбрионы, клонированные из ядер собственных клеток больного, могут стать источником стволовых клеток для генерации конкретных тканей, не отторгаемых входе их трансплантации тому же пациенту. Правительство Великобритании приняло связанные с этими перспективами рекомендации экспертной консультативной группы, что может привести к новым правилам, разрешающим использование клонированных эмбрионов человека и стволовых клеток эмбрионального происхождения в исследованиях, направленных на развитие клеточной или тканевой терапии. До настоящего времени, согласно Закону по проблемам оплодотворения человека и эмбрио­логии (1999), в Великобритании были разрешены только исследования на эмбрионах, не достигших 14 дней развития, для решения проблем бесплодия, наследственных болезней, генных и хромосомных аномалий, контрацепции. Несмотря на то, что в Великобритании высоко оценен «потенциал исследований стволовых клеток», изъятых у клонированных эмбрионов, «для новых подходов к лечению хронических болезней и нарушений, освобождения человека от страданий», отношение к репродуктивному клонированию остается неизменным. Клонирование индивидуумов в Великобритании под запретом.

В Японии последовательно проводится работа по созданию правового поля в области клонирования человека. Комиссия по биоэтике при научно-техническом совете Японии провела рассмотрение соответствующих социальных и научных проблем, касающихся последствий применения технологии к человеку. По результатам проведенного анализа был подготовлен законопроект «О запрете клонирования человека», представленный в Правительство Японии. За нарушение запрета на клонирование в законопроекте предпола­гается уголовная ответственность в виде работ в трудовых лагерях на срок до 5 лет. Запрещая клонирование человека, вне закона объявляются действия по созданию клонированных химер с использо­ванием составляющих технологии (ядер соматических клеток и безъядерных яйцеклеток, «суррогатных матерей») от разных видов млекопитающих. В ближайшее время законопроект будет рассмотрен в Парламенте Японии.

Несмотря на мощное общественное движение в сторону запрета клонирования человека, нельзя не принимать во внимание того, что любое объявление техники клонирования вне закона не может отменить прогресс биологии в целом. По мнению ряда ученых, ни одно регулирование, предпринятое государством или ответственными ведомствами (в США, например, FDA,NIН илиFBI), не остановило развитие науки и стремления к экспериментированию в области клонирования. В первую очередь, из-за притягательной легкости технологии, а также из-за тех потенциальных выгод, которое клонирование сулит человечеству в том случае, если будет на­правлено в нужное правовое русло.

В связи с этим любая страна, в том числе и Россия, должна выработать на государственном уровне свою позицию по отношению к развитию технологии клонирования применительно к человеку. Необходимо предпринять все усилия для того, чтобы срочно сформировать российскую законодательную базу в области клонирования человека и животных. Актуальность этой задачи возрастает для России с опасением и реальной возможностью стать бесправным полигоном для экспериментов по клонированию человека в случае отсутствия у нее своевременно поставленных правовых барьеров.

Российская позиция в отношении клонирования человека

В России никогда не проводились эксперименты по клонированию человека. Вместе с тем в нашей стране была отработана технология клонирования на животных, позволяющая получить клоны, т.е. особей с практически одинаковым геномом. Российские ученые использовали иную, чем Вилмут, технологию, основанную на микрохирургическом разделении ранних эмбрионов с последующей трансплантацией их самкам-реципиентам.

Результаты этих работ имеют большое теоретическое и практическое значение.

Несмотря на то, что в России уже около 10 лет разрабатывается нормативно-правовая база в области генно-инженерной деятельности и биотехнологии, она не охватывает проблему клонирования человека.

Сфера действия Федерального закона «О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности» (1996), дополненного Федеральным законом «Об изменении и дополнении Федерального закона «О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности», не включает клетки в составе организма человека.

В ближайшее время Россия подпишет Конвенцию по правам человека и биомедицине (Страсбург, 1996). Присоединение ее к Дополнительному (к Конвенции) Протоколу «О запрете на клонирование человеческих существ» не является обязательным и определяется национальным выбором.

Проанализировав зарубежный опыт регулирования в области клонирования человека, российские эксперты пришли к выводу о целесообразности принятия в России 5-летнего временного запрета на клонирование человека. Это предложение ученых нашло отклик в государственных структурах, включая заинтересованные министерства, Российский национальный комитет по биоэтике Российской академии наук, Национальный комитет по биомедицинской этике при Президиуме Российской академии медицинских наук.

В основу такого решения легли следующие соображения:

• необходима длительная всесторонняя, строго научная и межотраслевая оценка генетических и социальных последствий технологии;

• временный запрет предотвратит начало бесконтрольной деятельности в области клонирования на территории России, в том числе с участием зарубежных исследователей, не имеющих такой возможности у себя в стране из-за действующих там регулирующих норм;

• временный запрет обеспечит необходимые условия для развития российской науки в освоении технологий клонирования для целей медицины (трансплантации, генотерапии);

• временный запрет предоставит возможность (с учетом динамики социальных и этических тенденций в обществе) принять взвешенное решение проблемы клонирования человека.

Проект Закона о временном (на срок до 5 лет) запрете клонирования человека в России одобрен в первом чтении в Государственной Думе (2001). Следует заметить, что в упомянутом проекте предусматривается уголовная ответственность за нарушения моратория на клонирование человека и за нелегальный ввоз на территорию России клонированного биологического материала.

General Ethical Guidelines in Medical Genetics.

ОБЩИЕ ЭТИЧЕСКИЕ ПРАВИЛА МЕДИЦИНСКОЙ ГЕНЕТИКИ

ЗАЯВЛЕНИЕ HUGO О ПРИНЦИПАХ ПРОВЕДЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ³⁶