Визначення загального кальцію в реакції з кальційарсеназо (ііі)

Принцип методу.Кальцій утворює з барвником комплекс фіолетового кольору, який визначають фотометрично при довжині хвилі 590–650 нм.

Склад набору: реагент для визначення кальцію (концентрований), еталон кальцію (2,5 ммоль/л).

Приготуванняробочого реагенту для визначення кальцію: змішують 1 об’єм концентрованого розчину реагенту для визначення кальцію з 19-ма об’ємами дистильованої води. Розчин стабільний при зберіганні в холодильнику протягом 10-ти діб.

Калібрувальний розчин: змішують 1 мл еталону кальцію з 9 мл дистильованої води. Отриманий розчин містить 2,5 ммоль/л кальцію (10 мг в 100 мл). Розчин стабільний при зберіганні в холодильнику кілька тижнів.

Методика визначення. До 4 мл робочого розчину реагенту для визначення кальцію додають 0,05 мл дослідної сироватки крові (або іншого субстрату). Суміш перемішують. Одночасно ставлять також калібрувальну пробу (до 4 мл робочого розчину реагенту додають 0,05 мл калібрувального розчину). Витримують 5–10 хв при кімнатній температурі і колориметрують при довжині хвилі 590–650 нм на спектрофотометрі або фотоелектроколориметрі проти контролю в кюветі товщиною 1 см.

Контроль:до 4 мл реагенту додають 0,05 мл дистильованої води.

Вміст кальцію (табл. 14) вираховують за формулою:

де: Е_досл і Е_ст – поглинання, відповідно, дослідної проби і калібрувального розчину з концентрацією 2,5 ммоль/л.

Таблиця 14 – Вміст загального кальцію в сироватці крові здорових тварин

Вид тварин	Загальний кальцій
	мг/100 мл	ммоль/л
Велика рогата худоба (дорослі тварини)	9,5–12,5	2,38–3,13
Телята	10–12,5	2,5–3,13
Вівці	9,5–13,5	2,38–3,38
Коні	10–14	2,5–3,5
Свині (дорослі)	10–12	2,5–3.0
Поросята відлучені	10–13	2.5–3,25

Зниженнявмісту кальцію в сироватці крові (гіпокальціємія) діагностується при тривалому недостатньому надходженні його з кормом, порушенні засвоєння внаслідок дефіциту вітаміну D, при остеодистрофії, рахіті, гіпофункції щитоподібної залози, післяродовій гіпокальціємії, хворобах печінки та нирок внаслідок порушення синтезу біологічно активних метаболітів холекальциферолу.

Збільшеннявмісту кальцію в сироватці крові (гіперкальціємія) діагностується при передозуванні препаратів вітаміну D, згодовуванні тваринам рослин, що містять дигідроксивітамін D₃, гіперфункції прищитоподібних залоз.

3.9. Визначення неорганічного фосфору в сироватці крові

У крові фосфор міститься у вигляді органічних та неорганічних сполук. Органічний фосфор зв’язаний з білками та ліпідами. У клінічній практиці діагностичне значення має визначення неорганічного фосфору, яке здійснюють реакціями з ванадат-молібденовим реактивом (за Пулсом у модифікації Коромислова В.Ф. і Кудрявцевої Л.А.) та з аскорбіновою кислотою (у модифікації Івановського С.А.). При зберіганні сироватки крові органічний фосфор розкладається зі збільшенням неорганічного. Щоб уникнути помилки при дослідженні, необхідно проводити аналіз лише свіжої сироватки крові або одержувати її безбілковий фільтрат після додавання трихлороцтової кислоти.