- •Б3.В.9 технология спирта лабораторный практикум
- •Уфа 2013
- •Введение
- •Лабораторная работа №1 контроль качества зернового сырья и мелассы (4 часа)
- •Общие положения
- •1. 1 Определение органолептических показателей зерна
- •Общие положения
- •1.2. Определение влажности зернового сырья
- •Общие положения
- •1.3. Определение качества помола зерна
- •1.4 Определение реакции среды мелассы
- •Определение видимых сухих веществ мелассы
- •1.6 Определение сбраживаемого сахара (сахаристость) Общие положения
- •1.6.1 Определение прямой и инверсионной поляризации
- •1.6.2 Определение инвертного сахара (метод Оффнера)
- •1.7. Определение доброкачественности мелассы
- •1.8. Определение цветности мелассы
- •Лабораторная работа № 2 контроль качества осахаривающих материалов (4 часа)
- •Общие положения
- •2.1 Определение амилолитической активности колориметрическим методом
- •2.2 Определение глюкоамилазной активности (поляриметрический экспресс-метод)
- •Лабораторная работа № 3 приготовление и анализ качества разваренной массы (4 часа)
- •Лабораторная работа № 4 контроль качества осахаренной массы (4 часа)
- •Общие положения
- •4.1 Определение концентрации сухих веществ сусла.
- •4.2 Определение кислотности сусла
- •4.3 Определение концентрации растворимых сбраживаемых углеводов
- •4.4 Определение видимой доброкачественности сусла
- •Лабораторная работа № 5 контроль качества спиртовых дрожжей ( 4 часа)
- •Общие положения
- •5.1 Форма и размеры клеток дрожжей
- •5.2 Биологическая чистота дрожжей
- •5.3 Определение общего количества клеток
- •5.4 Подсчет процентного количества мертвых клеток в дрожжевой суспензии
- •5.5 Определение содержания гликогена в дрожжевых клетках
- •5.6 Подсчет процентного количества почкующихся клеток
- •Лабораторная работа № 6 контроль качества зрелой бражки и спирта (4 часа)
- •Общие положения
- •6.1 Определение видимой и истинной концентрации сухих веществ
- •6.2 Определение кислотности
- •6.3 Определение концентрации спирта в бражке
- •6.4 Определение растворимых несброженных углеводов
- •6.5 Состав ректификованного спирта.
- •6.6 Определение органолептических показателей
- •6.7 Определение крепости спирта
- •6.7.1 Ареометрический метод
- •6.7.2 Пикнометрический метод
- •6.8 Проба на чистоту (проба Савалля)
- •6.9 Проба на окисляемость
- •6.10 Определение примесей в ректификованном спирте
- •6.10.1 Определение массовой концентрации альдегидов
- •6.10.2 Определение массовой концентрации сивушных масел
- •6.10.3 Определение массовой концентрации сложных эфиров
- •6.10.4 Определение объемной доли метилового спирта
2.2 Определение глюкоамилазной активности (поляриметрический экспресс-метод)
Аппаратура и реактивы: пробирки с притертыми крышками, водяная баня, мальтоза, 5 Н раствор соляной кислоты.
Порядок выполнения работы
Метод основан на определении скорости гидролиза мальтозы глюкоамилазой. Скорость измеряется поляриметрическим способом.
Мальтоза не атакуется - амилазой, поэтому глюкоза, образовавшаяся в процессе реакции, является единственным продуктом действия глюкоамилазы на мальтозу, а изменение величины угла вращения плоскости поляризации этого сахара в реакционной среде характеризует активность глюкоамилазы.
За единицу активности глюкоамилазы принимается такое количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 мкмоля мальтозы при температуре 500,1 0С и рН 4,7 в течение 1 мин.
Результаты определения активности фермента глюкоамилазы поляриметрическим методом можно также выражать в единицах стандартного глюкозооксидазного метода.
В этом случае за единицу активности глюкоамилазы принимается такое количество фермента, которое за 1 мин при температуре 300,1 0С и рН 4,7 образует из крахмала 1 мкмоль глюкозы.
Культуральную жидкость фильтруют, добиваясь прозрачности, затем разбавляют водой: Глюкаваморин Гх-466 5-100 мл до 100 мл, Глюкоэндомикопсин Гх 5-10 мл до 50 мл., ультраконцентрат Глюкаваморина Г18х-466 5 мл до 250 – 500 мл.
Рабочий раствор поверхностной культуры готовят, как солодовую вытяжку.
Испытуемые растворы глюкоамилазы должны обеспечивать величину П от 0,5 до 2,0 0 нормальной сахарной шкалы.
В две пробирки (для проведения параллельных определений) вводят по 25 мл 2%-ного раствора мальтозы и помещают их в водяную баню при 500,10С на 10 мин для прогревания. Затем приливают по 5 мл ферментного раствора, энергично перемешивают и выдерживают точно 15 мин в водяной бане при 500,1 0С, вынимают и добавляют 1 мл 5 н. раствора соляной кислоты, а затем 5 мл исследуемого раствора фермента.
Опытные и контрольный растворы охлаждают до комнатной температуры и определяют угол вращения плоскости поляризации, используя трубку длиной 200 мм на сахариметре. Если поляриметр с круговой шкалой, то
П0сах = П0круг. /0,3462 (14)
шкала шкала
Если исходный ферментный препарат был мутным, то гидролизаты следует осветлять, добавляя 1 мл 30%-ного раствора сульфата цинка и 1 мл 15%-ного раствора гексациано – (II) – ферроата калия.
В результате определений получают два значения угла вращения плоскости поляризации опытных проб (П1 иП2) и одно значение контрольной пробы Пк. Затем вычисляют разность (П):
П = Пк – (П1+П2)/2 (15)
П должно быть в пределах от 0,5 до20 нормальной сахарной шкалы, иначе определение следует повторить, приготовляя ферментную вытяжку с большим или меньшим количеством исходной культуральной жидкости.
Зная П, определяют активность фермента глюкоамилазы (ГлС мп, в ед./мл или ед./г):
ГлС = 0,00243 х 31 х 106 х П/( х 2 х 180, 16 а), (16)
где 0,00243 – коэффициент пересчета величины П в глюкозу, г на 1 мл инкубационной среды, мл; 106 – коэффициент пересчета в микрограммы; - продолжительность.
Вопросы для самоконтроля знаний:
Охарактеризуйте технологию и расчеты осахаривания ферментными препаратами.
Приведите принципы методов определения активности ферментных препаратов.