- •Часть I
- •§ I. А) Оборудование рабочего места.
- •§ 7. Метод люминесцентной микроскопии.
- •§ I. Устройство электронного микроскопа.
- •§2. Методы электронно-микроскопического препарирования.
- •§3. Методы получения ультратонких срезов
- •§ 4. Демонстрация ультратонких срезов бактериальных клеток в электронном микроскопе.
- •§ 5. Описание метода микроскопии в темном поле см. В методических указаниях к 4 практическому занятию.
- •§ 2. Посмотреть под микроскопом препарат-мазок из культуры бактерий, имеющих жгутики, и зарисовать. Препарат окрашен по методу Бениньетти.
- •§ 3. Окраска по Граму (в модификации Синева) производят следующим образом. Из исследуемого материала готовят тонкий препарат-мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени спиртовки.
- •§ 4. Окраска зерен волютина по Нейссеру.
- •§ 5. Окраска капсул по методу Бурри-Гинса.
- •§ 3. Метод микроскопии в темном поле.
- •§ 6. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обратить внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток.
- •3Анятие 5
- •§ 9. Сделать посев отпечатков пальцев руки на пластинки мпа и среды Эндо.
- •§ 4. Результаты посева на среды пестрого ряда зарегистрировать в таблице.
- •§ 5. Приготовить взвесь почвы в Физиологическом растворе. С помощью пастеровской пипетки засеять 1-2 капли взвеси на среду Тароцци.
- •§ 4. А) Определение дифтерийного экзотоксина реакцией преципитации в агаре.
- •§ 7. Демонстрация различных методов заражения экспериментальных животных:
- •§ I. Макроскопическое изучение культур стафилококков на кровяном мпа. Зарисовать картину гемолиза.
- •§ 2. Демонстрация инструментария, посуды, разбор правил пересылки материала для исследования в бактериологические лаборатории.
- •§ 5. Опыт действия лизоцима на Micrococcus lysodeikticus.
- •§ I. Определение ld50 по методу Рида и Менча. Ld50 - количество микроорганизмов (бактерий, вирусов), вызывающих гибель 50 % зараженных животных.
- •§ 3. Приготовить корпускулярные антигены из культур водного вибриона и кишечной палочки. Для этого:
- •§ 4. Методы иммунизации животных и получения иммунных сывороток:
- •§ 5. Реакция агглютинации:
- •§ I. Разбор методов приготовления 0- и н-антигенов.
- •§ 5. Определение титра агглютинирующей сыворотки. Для опыта необходимо иметь:
- •§ I. Учесть окончательный результат реакции агглютинации и определить титр испытуемой агглютинирующей сыворотки. Результаты опыта отметить в таблице, схема которой дана ниже.
- •§ 5. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:
- •§ 6.Реакция преципитации в агаре.
- •§2. Реакция лизиса.
- •§ 4. Реакция фагоцитоза. Постановка опсоно-фагоцитарной реакции.
- •§5. А)Прямой иммунофлуоресцентный метод.
- •§ I. А). Опыт трансдукции.
- •Часть II. Вирусология
- •§ I. Зарисовать феномен бактериофагии на плотной питательной среде.
- •§ 2. Для титрования бактериофага используются различные методы. Наиболее точным является метод агаровых слоев, предложенный Графа. Сущность этого метода состоит в следующем.
- •§ 3. А). Элементарные тельца (вирионы) вируса оспы (тельца Пашена) в препаратах, окрашенных по Морозову, выглядят в виде мелких точек круглой или удлиненной формы, темно-коричневого цвета.
- •§ 4. Методы заражения животных разнообразны: внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, интраназальный, заражение в мозг и другие.
- •§ 6. С помощью камеры Горяева подсчитают количество клеток в 1 мл. Клетки считают по всей камере под малым увеличением микроскопа . Количество клеток в 1 мл вычисляют по формуле:
- •3. Методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний
- •3Анятие 3
- •1. Вирусологические:
- •2. Эпидемиологические:
- •§ 3. Для диагностики вирусных гепатитов могут быть использованы методы:
- •Часть III
- •§1.Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на наличие заболевания бруцеллезом у данного больного?
- •§5.Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм сти).
- •§ 2,3. Поставить реакцию агглютинации с монорецепторными 0- и н-сыворотками, принимая во внимание биохимические свойства выделенной культуры. Результаты зарегистрировать в тетрадь.
- •§ 1. Произвести макро- и микроскопическое исследование подозрительных колоний (бесцветные, прозрачные). Посеять подозрительную колонию на скошенный мпа и среды "пестрого ряда".
- •§ 1. Поставить реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры кишечной палочки с поливалентными ок-сыворотками:
- •§1. Демонстрация роста анаэробов на средах Виллиса-Хоббс, Тароцци, Вильсон-Блера, Цейсслера, на молоке.
- •§1. Промикроскопировать готовые препараты-мазки из культуры коклюшной палочки с окраской по Граму и зарисовать.
- •§2. Разбор методов микробиологической диагностики коклюша: бактериологического и серологического. Дифференциация коклюшной и паракоклюшной палочек.
- •§2. Промикроскопировать готовые препараты-мазки туберкулезных бактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену. Препараты зарисовать.
- •§3. Демонстрация роста туберкулезных бактерий на глицериновом бульоне, яичной среде Петраньяни и других средах.
- •§7. Ознакомление с составом и назначением следующих иммунопрепаратов: туберкулин Коха, очищенный туберкулин ррd-l, вакцина бжп.
- •§1. Произвести учет результатов определения биохимической активности коринебактерий и пробы на токсигенность.
- •§1. Промикроскопировать и зарисовать готовые препараты-мазки риккетсий. По Романовскому-Гимза риккетсии окрашены в красный цвет.
- •§2. Разбор и демонстрация реакции агглютинации с риккетсиозным антигеном (взвесь убитых формалином риккетсий). Результаты реакции зарегистрировать.
§ 7. Демонстрация различных методов заражения экспериментальных животных:
а)подкожный способ заражения кролика и белой мыши;
б)внутрикожный способ заражения кролика и морской свинки; в)накожный способ заражения морской свинки;
г)внутривенный способ заражения кролика и белой мыши;
д)внутрибрюшинный способ заражения морской свинки и белой мыши.
Промикроскопироватъ культуру палочки Фридлендера с косячка МПА, окрасить препарат по Граму (по Ионэ), проверить чистоту культуры. Если культура чистая, приготовить из нее взвесь. Для этого стерильной пипеткой добавить в пробирку с культурой 5 мл стерильного физиологического раствора и вращением пробирки между ладонями рук смыть культуру; 0,2 мл полученной взвеси ввести внутрибрюшинно белой мыши. Зараженное животное маркировать краской и поместить в специальную банку.
Окраска капсул по Ионэ. На приготовленный и зафиксированный в жидком фиксаторе мазок наливаю 2%-ный раствор генцианвиолета и окрашивают в течение 3-х минут при легком подогревании над пламенем горелки. Затем сливают краску и наносят на препарат I %-ный раствор уксусной кислоты на 10 секунд (стекло необходимо покачивать). Препарат промывают водой, сушат и микроскопируют под иммерсией. Тела бактериальных клеток и фон окрашивается в фиолетовый цвет, капсулы не окрашиваются. Препарат зарисовать.
Контрольные вопросы.
Что такое экзотоксин?
Что такое эндотоксин?
Каковы основные свойства экзотоксинов?
Каковы основные свойства эндотоксинов?
Какова химическая природа экзо- и эндотоксинов?
Что произойдет с экзотоксином, если его обработать формалином? Какие методы используются для обнаружения экзотоксинов?
Как называются бактерии, способные образовывать экзотоксин? Каков механизм действия гемотоксина, как можно обнаружить его присутствие?
На чем основан метод определения токсина в геле (агаре)?
Рис.1 Среда Эндо (1.Кишечная палочка; 2.Фекальный щелочеобразователь; 3.Стафилококк)
Рис.2 МПА (1.Кишечная палочка; 2.Фекальный щелочеобразователь; 3.Стафилококк).
Рис.3 Анаэробные бактерии со среды Тароцци. Окраска по Граму.
Рис.4 Анаэробные бактерии со среды Вильсон-Блера. Окраска по Граму.
Рис.5 Определение экзотоксина реакцией преципитации в агаре.
Рис.6 Палочка Фридлендера Klebsiella pneumoniae
Определение действия фактора проникновения по распространению краски в коже кролика.
Рис.7 Опыт (тушь+фильтрат культуры стафилококка)
Контроль (тушь+физраствор)
Рис.8 Положительная дермонекротическа реакция при внутрикожном введении экзотоксина
Рис.9 Воспалительная реакция при внутрикожном введении эндотоксина.
Какие методы используются для обнаружения эндотоксинов?
Как определяется сила действия экзотоксина? Что такое минимальная смертельная доза, DL50?
Какие факторы патогенности (кроме токсинов) вы знаете?
Что такое патогенность и вирулентность микробов? Какие ферменты могут играть роль факторов патогенности? Какой фермент содержится в факторе распространения? Его действие на соединительную ткань?
С какой целью производится заражение лабораторных животных? Какие способы заражения животных Вы знаете?
Как маркируются подопытные животные и как они содержатся?
Какие меры предосторожности следует соблюдать при заражении животных?
Как производится подготовка животных к опыту?
Как осуществляется наблюдение за подопытными животными?
ЗАНЯТИЕ 8
Дата_____________
Тема: ИНФЕКЦИЯ. ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
План занятий
1. Регистрация результатов опыта по обнаружению гемотоксина.
2. Знакомство с методами обнаружения микробов в организме, техникой взятия и пересылки материала от больного для бактериологического исследования.
3. Вскрытие мыши, зараженной на предыдущем занятии, и исследование ее органов.
4. Фагоцитоз:
а) постановка опыта фагоцитоза;
б) незавершенный фагоцитоз - микроскопия готовых мазков го нококков в гное от больных.
5. Лизоцим. Действие лизоцима на различные виды бактерий.
Методические указания.