- •Предисловие
- •Введение
- •Спектральные методы.
- •Почему вещество способно поглощать электромагнитное излучение
- •Частота, длина волны и энергия электромагнитных колебаний
- •Спектральные диапазоны
- •Ультрафиолетовая спектроскопия.
- •Закон Бугера – Ламберта – Бера.
- •Инфракрасная спектроскопия и спектроскопия комбинационного рассеяния
- •Спектроскопия ядерного магнитного резонанса
- •Масс-спектрометрия
- •Хроматография
- •Газовая хроматография (гх и гжх)
- •Формальные аспекты газовой хроматографии
- •Составные части газового хроматографа
- •Газы, применяемые в хроматографии
- •Ввод пробы
- •Колонки,применяемые в газовой хроматографии
- •Неподвижная фаза
- •Детекторы применямые в газовой хроматографии
- •Детектор электронного захвата (дэз)
- •Пламенно-ионизационный детектор (пид)
- •Детектор по теплопроводности (дтп)
- •Качественный анализ
- •Количественный анализ
- •Тонкослойная хроматография
- •Формальные аспекты тонкослойной хроматографии
- •Преимущества и недостатки тсх
- •Экспрессность
- •Расход анализируемого вещества
- •Простота техники тсх
- •Наглядность и информативность
- •Простота протоколирования результатов
- •Простота оборудования
- •Стоимость
- •Характеристика основных “участников” тсх
- •Подложка
- •Сорбент
- •Растворители в тсх
- •Камеры для тсх
- •Методы проявления хроматограмм
- •Особенности качественного и количественного тсх-анализа
- •Качественный анализ
- •Количественный анализ
Особенности качественного и количественного тсх-анализа
Качественный анализ
В области качественного анализа ТСХ отвечает на вопросы:
представляет ли собой данный образец индивидуальное вещество или смесь разных веществ;
идентично ли анализируемое вещество имеющемуся образцу.
При получении на хроматограмме образца нескольких пятен вывод о наличии примесей в основном веществе является однозначным (следует методом двумерной ТСХ убедиться, что вещество не претерпевает химических превращений в процессе анализа). Наличие единственного пятна на хроматограмме не является однозначным результатом – не исключено наличие двух или более веществ с одинаковыми значениями Rfв выбранных условиях. Поэтому принято считать, что чистым является вещество, на хроматограммах которого присутствует единственное пятно при использовании не менее трех различных сочетаний сорбент-элюент. Следует обращать внимание на форму пятна. Чем больше форма пятна анализируемого объекта отличается от формы пятна нанесения, тем ниже достоверность вывода о чистоте вещества. Указанием на неэффективность разделения вещества и примеси при наличии единственного пятна служит вытянутая вдоль направления элюции форма пятна и его “гантелеобразная” форма, “шапочки” на основных пятнах и градиент окраски пятна вдоль направления элюции. Исключением в этом случае являются “кометообразные” пятна, образование которых является следствием высокой сорбции анализируемого вещества на высокоаффинных центрах (например, при хроматографировании оснований на силикагеле в некислых средах). Вытянутые вдоль “веретенообразные” пятна симметричные по обеим осям без градиента окраски не следует рассматривать как указание на загрязненность вещества – такая форма характерна для средних и слабых оснований и кислот при использовании кислых или основных элюентов, соответственно.
Аналогично, анализируемое вещество можно считать идентичным образцу в том случае, если при использовании не менее трех сочетаний элюент-сорбент значения Rfи цвет пятен анализируемого вещества и образца совпадают с ошибкой, не превышающей общую ошибку эксперимента.
Анализ сложных смесей может оказаться затруднительным из-за большого количества пятен и недостаточной разрешающей способности. В этом случае проблема может быть решена двумерной хроматографией с применением разных элюентов. При элюции в одном направлении, как правило образуются зоны, содержащие смеси близких по свойствам веществ, при элюции во втором – разделение внутри каждой группы. Если не удается одним элюентом разделить все группы на составляющие, хроматограмму можно разрезать на отдельные полоски и каждую из них элюировать во втором направлении, применяя отдельно подобранные элюенты.
Рисунок |
6.11 |
– Пример двумерной ТСХ смеси 1 мкг ДНФ-производных амино- |
кислот (13 13 см). Первое направление – элюирование толуольной смесью (см. текст); второе направление – элюирование смесью хлороформ–метанол–уксусная кислота (95 : 5 : 1). Выделенные соединения: ОН – 2,4-динитрофенол; Ди – ди-ДНФ-производные; NH2 — 2,4-динитроанилин; AM – а-аминомасляная кислота; АК –-аминокаприловая кислота; Ала – аланин; Асп – аспарагиковая кислота; (Цис2– цистин; Глу – глутаминовая кислота; Гли – глицин; Гис – гистидин; Илей – изолейцин; Лей – лейцин; Илей – норлейцин; Лиз – лизин; Мет – метионин; Мет-О2 – метионинсульфон; Орн – орнитин; Фен – фенилаланин; Про – пролин; Сар – саркозин; Сер – серии; Тр – треонин; Три – триптофан; Тир – тирозин; Вал – валин; Нвал – норвалин (Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: В 2-х т. Т. 1: Пер. с англ. – М.: Мир, 1981. – 617 с., рисунок со стр. 497).