Лекция_2_ГИ_М_2014
.pdf
Создание трансгенных растений картофеля
•Полученные векторы, несущие экспрессионные кассеты гена cry3aM, были использованы агробактериальной трансформации листовых дисков картофеля сорта Скарб.
По результатам |
|
|
проведенного |
|
|
скрининга на |
|
|
селективных средах |
|
|
рассчитаны |
А |
|
показатели |
||
|
||
эффективности |
В |
|
трансформации |
|
|
|
Б |
растение сорта Скарб на среде
Б Контрольное растение сорта Скарб на среде без антибиотика В Растение сорта Скарб после
трансформации на селективной среде
Уровни накопления рекомбинантных белков
Анализ инсектицидных свойств гена сry3aM в
составе систем экспрессии под управлением индуцируемого светом промотора rbcS конститутивного конститутивного промотора
35S
У части трансгенных линий уровень повреждения надземных органов статистически значимо ниже, чем таковой у контрольных. Наблюдается более низкий уровень повреждаемости листовых пластинок у растений трансгенных линий: 0-10% в период окончания цветения и 10-20% в период созревания, тогда как у контрольных растений листовые пластинки повреждались на 20-30% и 60-70% соответственно.
Т |
К |
|
Линии с повышенной устойчивостью к колорадскому жуку для каждой экспрессионной системы.
Индекс восприимчивости
25,00 |
|
|
В |
|
|
|
rbcS-Lsc |
|
|
|
|
rbcS |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
20,00 |
|
|
21,31 |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
С |
|
С |
|
У |
|
У |
|
У |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
15,00 |
|
|
|
13,60 |
|
|
|
|
|
У |
|
У |
|
||||||
|
|
|
12,55 |
|
|
|
|
|
У |
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
11,31 |
11,10 |
11,02 |
10,31 |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
10,00 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
9,76 |
|
9,43 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
5,00
0,00
Скарб |
6-3 |
38-3 |
36-6 |
1-5 |
67-5 |
176-2 |
49-6 |
19-6 |
Линии картофеля
Сравнительный анализ относительного |
||
содержания гибридного белка Cry3a-LicBM3 в |
||
различных органах трансгенных растений |
||
|
картофеля разных линий |
|
90 |
|
|
80 |
|
|
70 |
|
|
60 |
|
|
50 |
|
rbsc промотор |
% |
|
|
|
35S РНК CaMV промотор |
|
40 |
|
|
30 |
|
|
20 |
|
|
10 |
|
|
0 |
|
|
Лист |
стебель |
Клубень |
Сравнительный анализ систем экспрессии
Система |
Транскрип- |
Белок |
Поврежда |
Урожай |
Устой- |
экспрессии |
ция |
, % |
-емость |
, кг |
чивост |
|
|
|
|
|
ь |
35S-C-L |
53 % |
0,05 |
80-90 % |
0,503 |
СУ |
|
|
|
|
|
|
RBCS-Lch-C- |
52 % |
0,07 |
70-80 % |
0,335 |
СУ |
L |
|
|
|
|
|
RBCS-C-L |
70 % |
0,11 |
До 60 % |
0,796 |
У |
|
|
|
|
|
|
RBCS-Lsc-C- |
69 % |
0,09 |
До 60 % |
0,543 |
У |
L |
|
|
|
|
|
По результатам проведенного анализа
Контроль 0 % 0,03 80-90 % 0,339 В
перспективными для дальнейшего использования признаны системы экспрессии RBCS-C-L и RBCS-Lsc-C-L
Новая и более безопасная система экспрессии Cry3a белков в растениях
Эта система основана на использовании гибридных сry3a генов, в состав которых входит лихеназа, и светоиндуцибельного промотора гена rbcS, который обеспечивает высокий уровень экспрессии модифицированного и гибридного генов в листьях трансгенных растений - органах-мишенях для личинок колорадского жука
Как получить растения устойчивые к бактериям и патогенным грибам?
Нужно знать защитные механизмы растений в ответ на атаку патогена
Сложность защитных механизмов растений в ответ на атаку бактерий и фитопатогенных грибов
Участие компонентов патогена и растения