Nasonova_V.A.,_Bunchuk_N.V._Лекции по клинической ревматологии_(Medicina,2001)-1

циямияхромосомяуягибридовяF1(NZB/NZW) вянесколькояразявыше,ячемяуя контрольнойялиниияC57BL/6J.

Таблица 25.2. Спонтанные и индуцированные митомици-

ном С аберрации хромосом в клетках костного мозга мышей

F1(NZB/NZW) и контрольной линии C57BL/6J

*я Поврежденнымия считаютсяя клеткия соя структурнымия аберрациямия и(или)яахроматиновымияпробелами.

**яМинимальныеяиямаксимальныеязначения.я***яКлетки,яимеющиеяболеея 10яразрывовяхромосом.

Такимяобразом,я9—10-месячныеясамки F1(NZB/NZW), уякоторыхя ранеея найденя наиболеея высокийя уровенья антителя кя ДНК,я отличаютсяя ия большейянестабильностьюяхромосом.яУямышейялиниияC57BL/6Jяуровенья клетокя ся хромосомнымия аберрациямия наиболеея низкий;я ая 3— 4-

300

месячныея самцы F1(NZB/NZW) занимаютя промежуточноея положениея какяпояуровнюяаутоантителякяДНК,ятакяияпоямутабельностияхромосом.

III. Определение аутоантител к эпителиальной ткани ти-

муса у мышей линии NZB и у гибридов F1(NZB/NZW) линий.

Вянастоящееявремяяустановлено,ячтояэпителийякорковойязоныятимусаямлекопитающихясоставляетямикроокружение,явякоторомяпроисходятя созреваниея ия дифференцировкая Т-лимфоцитов.я Показаноя также,я чтоя вя течениея первыхя месяцевя послея рожденияя уя мышейя NZBя снижаетсяя вя кровия уровеньятимусногоягормонаяия происходитяуменьшениея особойяпопуляциияэпителиальныхяклетокятимуса,япродуцирующихяэтотягормон.

Вясвязиясяэтимяиспытаныясывороткиякрови,яполученныеяная1—2- мяия4—5-мямесяцеяпослеярожденияяотямышейяNZBяи F1(NZB/NZW), a такжея отя мышейя контрольнойя линии BALB/c. Исследованияя проведеныя непрямым методомя иммунофлюоресценциия ная нефиксированныхя криостатныхясрезахятканейятимуса.

Ная срезахя тканейя тимусая мышейя всехя использованныхя линийя вя аутологичнойяиясингеннойясистемах,янаясрезахятимусаямышей BALB/c, a такжея ная тканяхя тимусая человекая положительныея реакциия ся эпителиемя обнаруженыявямедуллярнойязонеявокругятелецяГассаляяиявякорковойязонея тимуса.яНаясрезахятимусаяморскихясвинокясывороткияреагируютясяэпителиемятолькоявямедуллярнойязоне.яВяконтрольныхяопытах,япроведенныхяся сывороткамия мышейя BALB/c,я ная срезахя тимусая человека,я морскихя свинокяиямышейяразныхялинийяполученыяотрицательныеярезультатыя[2].

Такимяобразом,яуямышейялиниияNZBяияу F1(NZB/NZW) вятечениеяпервыхямесяцевяпослеярожденияяустановленояналичиеяантител,яреагирующихя ся эпителиемя корковойя ия медуллярнойя зоня тимуса,я ая такжея ся эпителиемябазальногояслояякожи.яПодобныеяантителаянеянайденыяуямы-

шейяBALB/c.

Антитела,яобнаруженныеяуямышейяNZBяияу F1(NZB/NZW), следуетя считатья аутоантителами.я Во-первых,я положительныея реакциия обна- руженыявяаутологичнойяиясингеннойясистемах.яВо-вторых,яантиген,ясяко- торымяреагируютяэтияантитела,ясодержитсяявоявсехяиспытанныхяобразцахя тканейятимусаяиякожиячеловека,яморскойясвинкияиямышейяразныхялиний.я Последнееясвидетельствуетяоятом,ячтояэтотяантигеняотноситсяякятканеспецифическимяантигенам,яобщимядляяразныхявидов,япояотношениюякякоторымяобычноявозникаютяаутоантитела.яСледуетяотметить,ячтояаутоантитела,яреагирующиеясяэпителиемятимуса,яотличаютсяяотяаутоантител,яреагирующихясяядрамияклеток.

Необходимоя подчеркнуть,я чтоя аутоантитела,я реагирующиея ся эпителиемятимуса,яобнаруживаютсяяещеядояначалаяаутоиммунногояпроцесса.я

301

Каковая жея ролья этихя аутоантителя вя повреждениия эпителияя тимусая ия вя возникновениия иммунорегуляторныхя нарушений,я характерныхя дляя аутоиммунногояпроцесса?яОсновываясьянаятом,ячтояповреждениеяэпителиаль- нойятканиятимусаяная2—3ямесяопережаетядругиеяпроявленияяпатологиче- скогоя процессая вя организмея этихя животных,я можноя предположить,я чтоя происходитя первичноея поражениея тимусая новорожденныхя мышейя вирусомя ся преждевременнойя утратойя функцийя данногоя органа,я нарушениемя процессовясозреванияяиядифференцировкияиммунокомпетентныхяклетокяия развитиемядефицитаяТ-системыяиммунитета.

IV. Миграция и дифференцировка кроветворных стволовых

клеток.

Ся цельюя изученияя миграциия ия дифференцировкия кроветворныхя стволовыхяклетокянамияпроведеныяопытыянаямышах F1(NZB/NZW) линийяразногоявозраста,янаямоделиялетальнояоблученныхямышейясяэкрани- ровкойя'/,яголениясяподсчетомяная7—8-йяденьячислаякроветворныхяколо- нийявяселезенке,яобразовавшихсяявярезультатеямиграцииястволовыхяклетокяизяэкранированногояучасткаякостногоямозга.

Изяпредставленныхявятабл.я25.3ярезультатовяисследованийявидно,я чтояуямышей NZB/NZW 2-месячногоявозрастаявяселезенкуямигрируетявя среднемя15,4яколониеобразующихяединиця(КОЕ).

УямышейяF1 (NZB/NZW) 4—5-месячногоявозрастая(табл.я25.3),яуя которыхя выявляютсяя симптомыя аутоиммуннойя патологии,я миграционнаяя активностья стволовыхя кроветворныхя клетокя приобретаетя тенденциюя кя снижению.я Выраженноея угнетение миграционнойя активностия стволовыхя клетокяизякостногоямозгаяотмечаетсяявятерминальнойястадиияаутоиммун- ногояпроцессаяуя10—11-месячныхяживотных.яОпределениеяотносительно- гоя (вя расчетея ная 105 клеток)я ия абсолютногоя (вя расчетея ная клеточностья кости)я числая стволовыхя клетокя вя костномя мозгея экранированнойя конечностия 2-месячныхя (соответственноя 38,1±3,2яия 3560яКОЕ)яия 10-месячныхя (21,6±2,7яия 2000я КОЕ)ямышейяпоказало,я чтояихя числояся возрастомясни- жаетсяявя1,5—2яраза.яСледовательно,янарядуясяуменьшениемячислаямиг- рировавшихяизякостногоямозгаяКОЕяимеетяместояистинноеяснижениеямиграцииястволовыхяклеток.

Гистологическийяанализяколонийявяселезенкеяпоказывает,ячтояразвитиея аутоиммунногоя процессая приводитя кя торможениюя дифференцировкия стволовыхя клетокя поя гранулоцитарномуя пути,я вплотья доя полногоя отсутствияя колонийя гранулоцитов.я Вместея ся темя увеличиваетсяя относительноеячислояэритроидныхяколоний,ят.е.яколониеобразованиеяпроисходитя пояэритроидномуяпути.

302

Таблицая 25.3. Миграция стволовых клеток у мышей

F1(NZB/NZW)

Изучениея дифференцировкия стволовыхя клетокя свидетельствуетя оя том,я чтоя уя мышей F1(NZB/NZW) воя всехя возрастныхя группахя наблюдаетсяя угнетениея илия полноея отсутствиея гранулоцитарнойя дифференцировкиястволовыхяклетокя[10].

Такимяобразом,янаяоснованиияполученныхяданныхяможнояпредположить,я чтоя уя мышей F1(NZB/NZW) ся аутоиммуннойя патологией,я независимоя отя возраста,я наблюдаетсяя торможениея дифференцировкия стволовыхяклетокяпоягранулоцитарномуяпутияразвития.

Ужеявысказываласьяточкаязрения,ясогласноякоторойядифференцировкаястволовыхяклетокяпоягранулоцитарномуяпутияобеспечиваетсяявяопределеннойя степения влияниемя Т-лимфоцитов.я С другойя стороны,я нельзяя такжеяисключитьявозможностьятого,ячтояуямышейяF1(NZB/ NZW) существуетя генетическийя дефектя ная уровнея предшественниковя гранулоцитарного рядаякроветворения.

V. Миграция и кооперативное взаимодействие Т- и В-

лимфоцитов у мышей F1(NZB/NZW) линий.

Изучениея процессовя миграциия Т-лимфоцитовя проводилисья намия пояметодуяР.М.Хаитовая(1975).

Результатыя исследованийя представленыя вя табл.я 25.4,я изя которойя видно,ячтояуямышей F1(NZB/NZW) сявозрастомяснижаетсяямиграцияяТлимфоцитов,я особенноя сильноя — у 10—11-месячныхя мышей

F1(NZB/NZW).

303

Такимя образом,я вя стадиия выраженногоя аутоиммунногоя процессая наблюдаетсяя значительноея угнетениея миграционнойя активностия Т- лимфоцитов.

Вядругойясериияисследованийяизученаямиграционнаяяспособностья В-лимфоцитовя уя мышей F1(NZV/NZW) различногоя возраста.я Полученныея данныея свидетельствуютя оя том,я чтоя прия аутоиммунномя пора- жениияпроцессыямиграциияВ-лимфоцитовяизякостногоямозгаяпрактическия неянарушаются.я

Таблица 25.4. Миграционная активность Т-лимфоцитов у

мышей F1(NZB/NZW)

Кооперативное взаимодействие Т- и В-лимфоцитов

Вя настоящем разделея работыя мыя исследовалия особенностия взаимодействияя Т-лимфоцитовя ся В-лимфоцитамия уя мышей F1(NZB/NZW) разногоя возраста.я Эффектя взаимодействияя Т- ия В-лимфоцитовя вя иммунномяответеяопределялияпояметоду Miller, Mitchell (1968).

Изятабл.я25.5явидноя(вариантяI),ячтояпереносяклетокятолькоякостногоя мозгая илия толькоя лимфатическихя узловя летальноя облученнымя реципиентамя сопровождаетсяя образованиемя сравнительноя небольшогоя числаяантителообразующихяклетокя(АОК)явяселезенкея(группы I—IV).яПере- носясмесияклетокякостногоямозгаяиялимфатическихяузловяприводитякярезкомуяповышениюячислаяАОК,янакапливающихсяявяселезенкея(группы V- VIII), чтояотражаетяпроцессякооперацииямеждуяТ- ияВ-лимфоцитами.яОд- накоя эффектя кооперациия клетокя костногоя мозгая ия лимфатическихя узловя

304

прияихясовместномяпереносеяпроявляетсяявяразличнойястепениявязависимостияотявозрастаядоноров.

Таблица 25.5. Эффект взаимодействия Т- и В-лимфоцитов

1—2-месячных и 4—5-месячных доноров (вариант 1) и 1—2-

месячных и 10—11-месячных доноров (вариант 2) мышей в куль-

туре лимфоидных клеток

305

Изяприведенныхявятабл.я25.5я(вариантя1)яданныхявидно,ячтояэф-

фектя Т- ия В-кооперациия прия использованиия клетокя 4—5-месячныхя мышейядоноровязначительноянижея(группаяVI),ячемяприяпереносеяклетокя1—

2-месячныхядоноровя(группаяV).яЗаяснижениеяэффектаякооперациияуя4— 5-месячныхямышейяответственныяклеткиялимфатическихяузлов.яДействи- тельно,яклеткиялимфатическихяузловя1—2-месячныхямышейяэффективноя

кооперируютясяклеткамиякостногоямозгая4—5-месячныхяживотныхя(груп- паяVIII),янояклеткиялимфатическихяузловя4— 5-месячныхяживотныхяпло-

хоя кооперируютя какя ся клеткамия костногоя мозгая 4—5-месячныхя доноровя (группаяVI),ятакяиясяклеткамия1—2-месячныхядоноровя(группаяVII).яКлет- кия лимфатическихя узловя ия костногоя мозгая старыхя (10—11-месячных)я мышейя практически нея вступаютя вя кооперациюя (табл.я 25.5,я вариантя 2,я группая VI).я Использованиея реципрокныхя сочетанийя доноровя костногоя мозгая ия доноровя лимфатическихя узловя разногоя возрастая показало,я чтоя неспособностьякякооперативномуяТ- ияВ-взаимодействиюяуястарыхямышей F1(NZB/NZW) опосредуетсяя ная уровнея клетокя лимфатическихя узловя (табл.я25.5,явариантя2,ягруппыяVI,яVII,яVIII).

Полученныеяданныеяпозволяютясделатьявыводяоятом,ячтоясяразвитиемяаутоиммуннойяпатологиияуямышей F1(NZB/NZW) нарушаетсяяхел- пернаяяфункцияяТ-лимфоцитов,яоднакояВ-клетки,япредшественникияАОК,я прияэтомясохраняютясвоюяактивность.яДанныеялитературыяподтверждаютя наличиея Т-дефицитая уя аутоиммунныхя мышей.я Однакоя нельзяя былоя исключитья возможностья того,я чтоя неспособностья Т-клетокя старыхя мышей F1(NZB/NZW) кякооперацииясяВ-клеткамиясвязанаясяпоявлениемявялим- фатическихя узлахя прия старениия супрессорныхя клеток.я Показано,я чтоя вя селезенкея старыхя мышей F1(NZB/NZW) появляютсяя мононуклеарныея радиорезистентныея клетки,я устойчивыея кя действиюя антитимоцитарнойя сывороткия ия комплемента,я обладающиея способностьюя супрессироватья иммунныйяответяияпродукциюяАОКяклеткамияселезенкиямолодыхямышей

F1(NZB/NZW) вякультуре in vitro [1].

Вясвязиясяэтимявозникявопрос,янеяявляетсяялияснижениеяхелпернойя функциия клетокя лимфатическихя узловя старых мышей F1(NZB/NZW) следствиемяпоявленияя илияповышенияясупрессорнойяактивности.я Дляя ответая ная этотя вопрося вя смесья эффективноя взаимодействующихя Т- ия В-клетокя молодыхя мышей F1(NZB/NZW) добавлялия разныеядозыяклетокялимфатическихяузловястарыхямышей F1(NZB/NZW).

Изятабл.я25.6явидно,ячтояклеткиялимфатическихяузловястарыхямышей,я добавленныея кя клеткамя лимфатическихя узловя молодыхя мышейя вя соотношениия1:1я(группа III), неявлияютянаяТ- ияВ-кооперациюяуямолодыхя доноров.я Однакоя повышениея дозыя клетокя лимфатическихя узлов старыхя

306

доноровя(соотношениея5:1яияособенноя10:1ягруппыяIV—V)яприводитякясу- прессииякооперациияТ- ияВ-клетокямолодыхядоноровя[4].

Таблица 25.6. Анализ супрессионных свойств клеток лим-

фатических узлов старых мышей

Следовательно,я снижениея кооперативнойя способностия Т- ия В- лимфоцитовяуямышей F1(NZB/NZW) сяпоявлениемяаутоиммунногояпроцесса,я по-видимому,я объясняетсяя нея толькоя количественнымя илия функциональнымя дефицитомя Т-хелперов,я ноя ия повышениемя супрессорнойя активностияклетокялимфатическихяузлов.

Изучениеязаболеванияяуямышейянашейяколонии,яначинаяяся1975я г.,я позволилоя намя обнаружитья патологическиея процессы,я развивающиесяя уяновозеландскихямышейявясердце,ялегких,япечени,ятимусе,япочках,якрови,я коже,я молочнойя железе.я Уя данныхя животныхя намия определялисья хромосомнаяянестабильность,янарушениеяфункциияферментов,яантителаякя ДНК—РНК-гибриду,янДНК,ядсРНК,яэпителиюятимуса,ябазальномуяслоюя кожи,яколлагенуяIятипа,яЦИК,яизменениеяфункцииярегуляторныхяклетокя иммуннойясистемы.

Следствиемя вышеописаннойя тяжелойя патологии,я по-видимому,я являютсяя низкийя уровенья воспроизводительнойя функциия данныхя животныхя ия короткаяя продолжительностья жизни.я Вя терминальнойя стадиия наблюдаетсяярезкоявыраженнаяякахексияя[3,я5,я6].

307

Итак,яразностороннееяизучениеяиммунногоястатусаяуяновозеландскихя мышейя позволилоя установитья ия расшифроватья отдельныея механизмыянарушенияясоястороныяиммуннойясистемы.

Следуетя отметить,я чтоя показатель,я подтверждающийя наличиея вируснойя инфекциия вя организме,я — ДНК—РНК-гибридя определяетсяя воя всехявозрастныхягруппахя(прияотсутствииядостоверныхяразличийявязависимостияотягенотипа,явозрастаяияполаяновозеландскихямышей),яаятакжеяуя контрольныхямышейялиниияСВА,яхотяяегояуровеньядостоверноянижея(ря< 0,05).яОднакояжеятеяпризнаки,якоторыеяхарактеризуютястепеньявыраженностияпатологическогояпроцесса,я— наличиеяаутоантителякяэпителиюятимусаяиякожи,яхромосомныхяаберраций,яаутоантителякянДНКясявозрастомя динамичноя нарастают.я Показателия клеточногоя иммунитета:я миграция,я расселениея ия дифференцировкая кроветворныхя стволовыхя клеток,я функ- циональноеяияколичественноеясостояниеяТ-хелперов,якооперацияяТ- ияВлимфоцитовя— сявозрастомяснижаются,ясостояниеяТ-супрессоровяостает- сяяилиябезясущественныхяизменений,яилиявяконцеязаболеванияяактивизируется.я Вя результатея уя новозеландскихя мышейя наблюдается иммунодефицитя Т-хелперовя прия неизмененномя илия повышенномя количествея Т- супрессоровявятерминальнойястадииязаболеванияя(схемая25.1).

Полученныея результатыя ставятя нася передя темя фактом,я чтоя аутоиммунныеяболезнияследуетярассматриватьянеякакярезультатяповышеннойя активностияиммуннойясистемы,яаякакяпроявлениеяиммунодефицита.

Вясвязиясяэтимяинтересныяисследования Eudenberg [11]япояизучениюягенетическогояконтроляяиммунногояответаяуямышейяразныхялинийякя вирусуя Гросса.я Оня обнаружиля уя новозеландскихя мышейя наличиея геная низкогояиммунногоя ответаякявирусуяГросса.яИспользуяяглавноеяположениеяэтойяобластияиммуногенетикия— наличиеягеновявысокогояиянизкогоя иммунногояответаянаятеяилияиныеяконкретныеяантигены,яможнояпредположитьяследующее:яеслияорганизмягомозиготеняпоягенам,яопределяющимя низкуюяиммунологическуюяреактивностьяпояотношениюякяантигенамянекоегоя микроорганизма,я тоя оня нея можетя осуществлятья полноценнуюя иммуннуюязащитуяотяэтогоямикроорганизма.яВяотношенииядругихяантигеновя организмя способеня развиватья нормальныйя иммунныйя ответ.я Иммунодефицитя такогоя типая обеспечиваетя достаточноя длительноея безнаказанноея персистированиеяданногоямикроорганизма,янапримеряретровируса,явятканяхяорганизма.яВызваннаяяимядеструкцияятканейяприводитякявысвобождениюяскрытыхявяобычныхяусловияхятканевыхяантигенов,якоторыеявянормея никогдая вя кровотокя нея поступают.я Посколькуя генетическийя дефектя иммуннойясистемыяобусловливаетяееянеполноценностьятолькоявяотношениия ретровируса,я оная полноценноя реагируетя ная высвобожденныея вследствиеяинфекционнойядеструкцииятканевыеяаутоантигены.яВырабатывают-

308

сяяаутоантителая— организмяпытаетсяязащититьсяясам,яеслиянеяотясамогоя инфекционногояагента,ятояхотяябыяотяпродуктовятканевойядеструкции.

Рассматриваяя заболеванияя ся аутоиммуннымия нарушениямия ся этойяточкиязрения,яво-первых,яможнояобъяснитьяпатогенезяаутоиммунныхя болезнейяиясвязьяихясяинфекциями,ят.е.яданнаяяконцепцияяможетяобъяснитья фактя наличияя восприимчивыхя индивидуумовя средия популяциия людей,я ая уя животныхя — наличиея восприимчивыхя инбредныхя линий.я Другимиясловами,яу человекаяилияживотного,яорганизмякоторогоягомозиготеня поягенам,яопределяющимявысокийяиммунныйяответ,яинфекционныйяагентя (вя данномя случаея ретровирус)я нейтрализуетсяя специфическимия антителамияилиядругимиямеханизмамиязащиты.яУяиндивидуумов,ягомозиготныхя поягенамянизкогояиммунногояответа,яразвиваетсяяинфекционныйяпроцесся (схемая 25.2).я Этая гипотезая можетя служитья обоснованиемя теоретическогоя предположенияя обя иммунодефицитея какя следствиия оппортунистическойя инфекции.я Вероятностья развитияя продуктивнойя стадиия иммунодефицитая зависитя отя степения гомозиготностия индивидуумая поя генам,я определяющимя силуя иммунногоя ответая ная данныйя антиген.я Во-вторых,я прия этомя ставитсяя подя сомнениея целесообразностья иммунодепрессивнойя терапии,я широкоя применяемойя прия лечениия рядая аутоиммунныхя болезней.я В- третьих,я этая концепцияя подчеркиваетя важностья проблемыя поиская способовя превращенияя генетическия низкореагирующихя ная данныйя антигеня особейя вя высокореагирующих.я Иначея говоря,я ставитсяя вопрося оя том,я чтоя дляя леченияя аутоиммунныхя расстройствя необходимоя целенаправленноя стимулироватьяиммуннуюясистему,яаянеяподавлятьяееяиммунодепрессивнымиясредствамия[7].

Схема 25.1. Развитие иммунодефицита у новозеландских

мышей

309