30. Методы кратковременного хранения спермы.

Кратковременное хранение спермы при комнатной температуре (16—20 °С). Для хранения спермы хряков широко ис­пользуют хелатные среды. Хелатон (трилон Б) — сокращенное на­звание двунатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты. Это соеди­нение при комнатной температуре инактивирует ферменты, подавляя таким об­разом обмен веществ у спермиев. Действие хелатона снимается, если спер­ма оказывается подогретой до температу­ры тела животного и спермии начинают двигаться. Это происходит после введе­ния спермы, разбавленной хелатной сре­дой, в половые органы самки.

Известны также среды с угольной кислотой для хранения спермы быков, баранов и хряков при комнатной темпе­ратуре, но они не получили широкого распространения.

Кратковременное хранение спермы при температуре тающего льда (2—5 °С). Такая температура пригодна для хранения спермы быка, барана и жеребца. Темпе­ратура, близкая к 0 °С, значительно удли­няет переживаемость спермиев и замед­ляет обменные процессы; дыхание и фруктолиз спермиев быка и барана тор­мозятся в 20—25 раз по сравнению с ин­тенсивностью этих процессов при темпе­ратуре тела животных.

Для охлаждения спермы используют холодильник или термосы различной конструкции, в которых температура до 2—5 °С. Применение желточных разба­вителей значительно повышает устой­чивость спермиев к температурному шоку, но полностью не устраняет его. Поэтому сперму необходимо охлаждать медленно и постепенно. После разбав­ления сперму быка выдерживают при комнатной температуре (18—20 °С) 20— 30 мин. Затем ампулы, флаконы или пробирки со спермой обертывают не­большим слоем ваты, помещают в поли­этиленовые мешочки и кладут в холо­дильник или термос со льдом. Мешочки со спермой укладывают так, чтобы они сверху были закрыты кусочками льда, что обеспечивает необходимую темпе­ратуру (2—5 °С).

31. Замораживание спермы быка, жеребца.

Для замораживания пригодна сперма быка с активностью спермиев не ниже 8 баллов и концентрацией их не менее 0,8 млрд в 1 мл.

Замораживают сперму быков в гранулах (0,1-0,2 мл). Эта расфасовка обеспечивает более эффективное использование со­судов Дьюара для хранения спермы, несколько лучшую выжи­ваемость и оплодотворяющую способность спермиев. После оценки сперму разбавляют средой № 1 (11%-ный раствор лакто­зы – 63 мл, желтка – 30 мл, глицерина – 7 мл) в соотношении 1:1, затем средой № 2 (11%-ный раствор лактозы – 81,5 мл, желтка – 15 мл, глицерина – 3,5 мл), доводят степень разбавле­ния до нужного показателя. Для замораживания спермы грану­лами по 0,5-1 мл используют среду: вода дистиллированная – 100 мл, лактоза – 11,5 г, желток куриного яйца – 20 мл, глице­рин – 5 мл.

Замораживание спермы жеребца. Перед замораживанием сперму жеребца разбавляют в 4 раза лакто-хелато-цитратно- желточной (ЛХЦЖ) или лактозо-желточно-сульфатной (ЛЖС) средой.

Состав среды ЛХЦЖ: лактоза – 11 г; желток – 0,8 г; 4,2% раствор двууглекислой соды – 0,2 мл; 35,7% раствор цитрата натрия – 0,25 мг; хелатон – 100 мг; глицерин – 3,5 мл; вода дистиллированная – 100 мл.

Состав среды ЛЖС: лактоза – 10 г; сульфат аммиака – 150 мг; желток – 1,6 г; глицерин – 3,5 мл; вода дистиллированная 100 мл.

После разбавления сперму охлаждают до 0°С и выдерживают при этой температуре 2 ч. Охлажденную сперму разливают

валюминиевые пакеты по 13 мл, плотно закрывают. Пакеты со спермой замораживают в охлажденном газе над жидким азотом

вспециальном устройстве, после чего их переносят в хранилище с жидким азотом. Оттаивание производят путем погружения алюминиевого пакета на 1-2 мин в водяную баню при температуре 3840°С. После чего их вытирают стерильной марлей, обеззаражива-

ют 96% спиртом, обрезают стерильными ножницами край пакета и стеклянной палочкой берут каплю спермы, добавляют к ней каплю 2,9% раствора натрия лимоннокислого и оценивают активность спермиев. Подвижность спермиев в оттаявшей сперме должна быть не ниже 2 баллов.