Занятие 9. Санитарно-микробиологический контроль в фармацевтических учреждениях. Микробиологический контроль лекарственного сырья и готовых лекарственных средств.

1. Какие объекты в аптеках подвергаются микробиологическому исследованию?

Объектами исследования в аптеке являются:

• Вода дистиллированная для приготовления ЛС, кроме инъекционных растворов и глазных капель.

• Вода дистиллированная для приготовления инъекционных растворов и глазных капель — инъекционные растворы до стерилизации; глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах (то есть изготовляемые в самих аптеках).

• Сухие ЛС, используемые для приготовления инъекционных растворов.

• Аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие вспомогательные материалы.

• Инвентарь, оборудование, руки и санитарная одежда персонала.

• Воздух аптечных помещений.

1. Дистиллированная вода, используемая для изготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и глазных капель). Пробы отбирают в количестве 300 мл в стерильные бутылки с последующим закрытием ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки (или трубопровода), конец которой предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом. Определение количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри, затем заливают растопленным МПА. После застывания агара чашки выдерживают сутки при 37ºС и ещё сутки при комнатной температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний как на поверхности, так и 39 внутри питательной среды. При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов засевают по 0,5 мл исследуемой воды на 2 чашки со средой Сабуро и инкубируют при 20-22ºС в течение 3-4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых и дрожжевых грибов на обеих чашках. Результаты оценивают путём суммирования числа бактерий и грибов. Определение титра бактерий группы кишечной палочки (БГКП) проводится по методике для питьевой воды. Оценка результатов проводится в соответствии с требованиями ГОСТ «Вода питьевая».

2. Дистиллированная вода для приготовления инъекционных растворов и глазных капель. Инъекционные растворы до стерилизации. Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах. Пробы дистиллированной воды отбирают в стерильные флаконы в количестве 15-20 мл. Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают во время их приготовления, но не позднее 1,5 часов, и доставляют в лабораторию в тех же флаконах, в которых они будут подвергнуты стерилизации. Глазные капли доставляют в аптечной упаковке. Определение количества мезофильных аэробов и факультативных анаэробов проводят так же, как в предыдущем исследовании. Определение наличия БГКП в 1 мл проводится следующим образом. Исследуемый материал в количестве 1 мл засевают в 9 мл разведённой среды Эйкмана. Посевы выращивают при 37ºС в течение суток, затем высевают на среду Эндо и после суточного инкубирования чашек при 37ºС отбирают на чашках подозрительные колонии бактерий и определяют их принадлежность к БГКП. Количественное определение БГКП проводится следующим образом. 1 мл исследуемого материала наливают в стерильную чашку Петри и заливают растопленной средой Эндо. После застывания среды её инкубируют при 37ºС в течение суток и учитывают количество типичных колоний. Предельно допустимые количества микроорганизмов в 1 мл: дистиллированная вода, используемая сразу же после перегонки, не более 15, используемая после стерилизации для изготовления асептическим способом глазных капель - не более 3, растворы для инъекций до стерилизации не позднее 1,5 часов после изготовления – не более 30. Наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки и протея в данной группе исследуемых материалов недопустимо.

3. Инъекционные растворы и глазные капли после стерилизации доставляются для исследования в аптечной упаковке. Материалы этой группы должны быть стерильными.

4. Отбор сухих лекарственных веществ производят по показаниям. Стерильными ложками в стерильную посуду лаборатории отбирают 30-50 г вещества. Если вещество таблетированное, отбирают фламбированным пинцетом в стерильную посуду лаборатории в таком же количестве. 40

5. Аптечную посуду, подготовленную для разлива инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в момент приготовления их в количестве 3 штук одинаковой ёмкости. Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом аптечные пробки и прокладки. Доставленные в лабораторию флаконы последовательно ополаскивают 10 мл стерильной водопроводной воды. Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки, тщательно ополаскивая каждый флакон. Пробки (корковые и полиэтиленовые) и прокладки отбирают в момент приготовления инъекционных растворов и глазных капель фламбированным пинцетом и помещают по 5 штук в широкогорлые стерильные колбы или банки с последующим закрытием стерильными ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками. В лаборатории в колбы или банки наливают 10 мл стерильной водопроводной воды и тщательно ополаскивают. Используемые в аптеках пипетки прополаскивают несколько раз в пробирке, содержащей 10 мл стерильной водопроводной воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лабораторию. Определение в смывной жидкости количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий проводится, как описано в пункте 1. Число колоний, установленное в 1 мл смывной жидкости, умножают на 10, что соответствует содержанию бактерий на всей смывной поверхности. Количество бактерий не должно превышать 150. Определение наличия БГКП: 8 мл оставшейся смывной жидкости засевают в 1 мл концентрированной среды Эйкмана, инкубируют при 37ºС в течение суток и в дальнейшем идентифицируют БГКП. Наличие бактерий группы кишечной палочки не допускается.

6. Смывы с инвентаря, оборудования, рук персонала (во время приготовления лекарственных форм), санитарной одежды осуществляют с помощью ватных тампонов, помещённых в пробирки с физраствором. Влажным тампоном протирают исследуемую поверхность, затем тампон помещают в среду Кесслера или Кода. После инкубации в термостате пересевают на среду Эндо и определяют наличие БГКП. Определение патогенных (золотистых) стафилококков осуществляют путём посева смыва в пробирку с солевым МПБ. После инкубации в термостате определяют наличие стафилококков. Количественные определения их не проводятся. Наличие БГКП и стафилококков не допускается.

7. Исследование воздуха. Отбор проб воздуха производится при соблюдении следующих условий: - чистое подготовленное к работе помещение; - закрытые форточки и двери; - уровень высоты отбора воздуха соответствует высоте рабочего стола.

8. Методы микробиологического контроля лекарственных средств. Присутствие микробов в лекарственных средствах нежелательно, за исключением тех, в которых наличие микробов специально имеется в виду. 41 Поэтому необходим контроль. Контроль проводится в соответствии с Государственной фармакопеей (XII издание, 2010). Лекарственные средства, стерилизуемые в процессе производства, испытывают на стерильность, а инъекционные растворы - также и на пирогенность. Лекарственные средства, не стерилизуемые в процессе производства, могут быть контаминированы микроорганизмами и поэтому должны быть испытаны на микробную чистоту.